1、毕业论文开题报告海洋生物资源与环境胰蛋白酶、SDS对三疣梭子蟹酚氧化酶活力的影响一、选题的背景与意义三疣梭子蟹PORTUNNSTRITUBERCULATUS属甲壳纲短尾族梭子蟹科，是著名的大型海产食用蟹，具有较高的经济价值。该蟹遍布我国沿海，东海、黄渤海产量较大。近年来，由于海洋渔业资源结构的变化，梭子蟹自然资源急剧衰退，使得其商品价值倍增，人工养殖迅速兴起。甲壳类等节肢动物不具有特异性免疫功能，免疫防御是通过非特异性免疫发挥作用。酚氧化酶原激活系统PROPHENOLOXIDASEACTIVATINGSYSTEM是甲壳动物重要的防御和识别系统，由丝氨酸蛋白酶和其他相关因子组成，类似于脊椎动物补
2、体系统，在识别异物、释放调理素促进血细胞的吞噬和包囊以及介导凝集和凝固产生杀菌物质等免疫功能方面发挥重要作用。酚氧化酶PHENOLOXIDASE，PO是酚氧化酶原激活系统的产物，是衡量机体免疫功能的重要指标。已有研究表明甲壳血蓝蛋白在体外条件下不仅可以受十二烷基硫酸钠SDS、胰蛋白酶、尿素等的诱导表现出酚氧化酶活性，而且在一些内源性物质如血细胞溶解产物、凝集因子等的诱导下亦可显示出酚氧化酶活性，同时PERDOMO等研究证实美洲龙虾PANULIRUSARGUS血蓝蛋白在正常机体内具有酚氧化酶活性。本实验试图分别将胰蛋白酶和十二烷基硫酸钠（SDS）作用于三疣梭子蟹的血淋巴及血细胞溶解产物，测定酚氧
3、化酶活力的变动情况。本实验将在这方面进行初步的探索，为以后的实验打下基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容（1）在三疣梭子蟹第三步足基关节处用玻璃注释器提取淋巴液；（2）血浆样品和血细胞溶解产物的制备；（3）血淋巴、血细胞酚氧化酶活力的测定；（4）数据处理与分析。拟解决的主要问题试图分别将胰蛋白酶和十二烷基硫酸钠（SDS）作用于三疣梭子蟹的血淋巴及血细胞溶解产物，测定酚氧化酶活力的变动情况。三、研究的方法与技术路线研究方法首先准备好实验材料，其次配置和稀释好各种实验试剂，做好实验前期的准备工作。分好实验梯度，接下来采集血淋巴、血浆样品及血细胞溶解产物的制备。将配置的不用浓度的试剂作
4、用于获取的样品，测定酚氧化酶的活力变动情况。技术路线四、研究的总体安排与进度2010年11月2010年12月开题2011年2月2011年4月（1）翻译外文文献；（2）完成实验操作；（3）数据分析；（4）撰写论文。五、主要参考文献1王雷,李光友甲壳动物的体液免疫研究进展J海洋科学,1992,318192夏栋,卞疆龙虾多酚氧化酶的纯化及其部分生化特性J江苏食品与发酵,2000,116193赵东海,张建平,侯菊花蘑菇中多酚氧化酶的酶学特性研究J食品与机械,2004,20512174张明辉,陆宏达中华绒螯蟹血淋巴液抗凝剂的筛选J水产科技情报,2005,32（增刊）93995陆宏达,张明辉中华绒螯蟹血细
5、胞数及离体后形态学变化J水产学报,2006,3044444626孙虎山,李光友栉孔扇贝血淋巴中酚氧化酶和髓过氧物酶活力J中国水产科学,1999,629137黄辉洋,李少菁,王桂忠甲壳动物酚氧化酶活力及其在养殖中的应用J海洋通报,2000,19379848章跃陵,王三英,彭宣宪虾类免疫学的基础和应用研究J海洋科学,2000,24（12）2629购买三疣梭子蟹并喂养测定酚氧化酶的活力变动样品制备将试剂作用于样品论文撰写配制实验试剂数据分析、制表9章跃陵,王三英,刘光明南美白对虾血蓝蛋白对酚氧化酶活性的影响J中国水产科学,2005,12（4）40240610章跃陵,陈俊,林伯坤,等南美白对虾血蓝蛋白
6、血细胞凝集活性初探J汕头大学学报自然科学版,20053485311冯从经,杜宇州,陆自强,等亚洲玉米暝幼虫血清中酚氧化酶原的性质J昆虫学报,2005,48564965412JUNWAH,YYANG,AWANGRECONSIDERATIONOFPHENOLOXIDASEACTIVITYDETERMINATIONINWHITESHRIMPLITOPENAEUSVANNAMEIJFISHSHELLFISHIMMUNOLOGY,2010,2824024413陈丽娇,郑明锋,李怡宾南美白对虾多酚氧化酶的生化特性J福建农林大学学报自然科学版,2004,33（3）37738014YILIANGW,LPING
7、PAN,SLIYU,HHANGLICLONING,MICROBIALEXPRESSIONANDSTRUCTUREACTIVITYRELATIONSHIPOFPOLYPHENOLOXIDASESFROMCAMELLIASINENSISJJOURNALOFBIOTECHNOLOGY,2010,145667215樊廷俊,汪小锋中国对虾酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质J生物化学与生物物理学报,2002,34558959416孟凡伦,张玉臻,孔键,等甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统研究评价J海洋与沼,1999,30111011617罗日祥,姜玉香,李光友中国对虾细胞中酚氧化酶活力研究J海洋科学,19
8、96（6）1318李义温度PH对日本沼虾血清酚氧化酶活力及稳定性的影响J海洋科学,2002,26（10）1319孙兆峰,王雷中国明对虾和凡纳滨对虾血清酚氧化酶活性的研究J高技术通讯,2001（12）242720沈锦玉,刘问,曹铮,等免疫增强剂对中华绒鳌蟹免疫功能的影响J浙江农业学报,2004,16（1）252921彭涤非,钟彩虹,王仁才桃多酚氧化酶的纯化及其特性J湖南农业大学学报（自然科学版）,2004,30（3）25125622宗亦臣冬枣果实中酚类物质及其多酚氧化酶性质的研究J中国农学通报2004,2（4）979823赵欣平,舒畅,杨芳,等金属离子和脲对白蜡虫碱性磷酸酶的影响J昆虫学报,2002,45（2）31832224于新,黄小丹,冯彤,等草菇酚氧化酶及过氧化物酶特性的研究J仲恺农业技术学院学报,1998,113273325樊廷俊,汪小锋中国对虾酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质J生物化学与生物物理学报,2002,345589594
