1、毕业论文开题报告生物工程地衣芽孢杆菌变异株发酵工艺研究一、选题的背景与意义地衣芽孢杆菌BACILLUSLICHENIFORMIS属硬壁菌门（FIRMICUTES）、杆菌纲（BACILLI）、芽孢杆菌科（BACILLACEAE）、芽孢杆菌属（BACILLUS）。由于地衣芽孢杆菌安全性高、生长快速、抗逆性强、有高效的产酶能力、在较高温度下仍可存活等特点而被人们所广泛应用。近年来,国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多。在发酵产酶、医药、饲料加工、农药等行业,取得了较好的研究成果。根据文献显示,关于地衣芽孢杆菌的专利有用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法地衣芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂地衣芽孢杆
2、菌T1菌株的构建及其粗酶提取物的发酵生产利用基因突变技术,改变地衣芽孢杆菌NCIB8061A淀粉酶的耐温性和耐酸性酶的性质等。本实验室在经60CO照射后的东海香参中分离得到一株能高效分解东海香参的菌株A，对该菌进行形态学特征、生理生化指标、16SRDNA和MIDI全自动微生物鉴定等发现其为地衣芽孢杆菌。该菌株为突变株，因此对其在医药和产酶等功能方面的研究具有重大的意义。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）基本内容1碳源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响2碳源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响3氮源种类对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响4氮源量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响5金属离子对地
3、衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响6初始PH值对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响7接种量对地衣芽孢杆菌产蛋白酶发酵的影响（二）拟解决的主要问题浒苔水解最佳条件摸索，检测指标的选择将成为主要问题三、研究的方法与技术路线（一）实验安排以碳源种类、碳源量、氮源种类、氮源量、金属离子、初始PH值、接种量为变量进行单因素实验1碳源种类在基础培养基中分别添加浓度为75的不同碳源麦芽糖、蔗糖、环糊精、葡萄糖、可溶性淀粉和浒苔，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力2碳源量在基础培养基中分别添加浓度为25、35、45、55、65、75、85、95不同浓度最佳碳源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力3氮源种类在基础培养基中分别添加
4、浓度为3的不同氮源干酪素、牛肉膏、酵母浸膏、大豆蛋白、明胶、尿素、硫酸铵、蛋白胨，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力4氮源量在基础培养基中分别添加浓度为1、2、3、4、5、6、7、8等不同浓度的最佳氮源，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力5金属离子在基础培养基中分别添加浓度为0002的不同微量金属元素MG2、FE2、CA2、MN2、SN2、CU2、BA2、LI、FE3、ZN2，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力6初始PH值调节培养基初始PH分别为50、60、70、80、90、100、110和120，培养后测定发酵液的蛋白酶比活力7接种量分别按照2、4、6、8、10、12、14和16的添加水平，接种培养12
5、H的种子培养基于发酵培养基中，测定发酵液蛋白酶比活力（二）技术路线富集分离纯化培养基选择样品采集单因子试验文献查阅及实验设计样品采集富集分离纯种产碱性蛋白酶发酵培养基选择对不同培养基成分进行单因素实验运用响应面软件主效分析确定七个主要因素在根据响应面软件进行七因素七水平实验确定最优发酵培养基的配方运用最佳培养基配方对发酵各个条件进行单因素实验运用响应面软件根据上诉同样的方法确定出最佳发酵条件四、研究的总体安排与进度2010082010091实验前的准备工作查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2文献整理，实验方案的确定；2010092010111开展实验；2优化实验方案中的各条件；3获
6、得实验过程中的各类数据。2011022011031整理和补充相关数据，整理实验结果；2撰写论文初稿。3论文定稿。五、主要参考文献1荆谷，冯静，孔健，等微生物金属蛋白酶研究进展J生物工程进展，2002，22161632王吉庄，钟芳，王璋高水解度大豆肽的制备J食品工业科技，2003，24940423HADJALINE,AGREBIR,GHORBELFRIKHAB,ETA1BIOCHEMICALANDMOLECULARCHARACTERIZATIONOFADETERGENTSTABLEALKALINESERINEPROTEASEFROMANEWLYISOLATEDBACILLUSLIEHENIFON
7、NISNHLJENZYME确定最佳发酵条件论文撰写碳源种类氮源种类氮源量碳源量数据分析金属离子初始PH值接种量ANDMICROBIALTECHNOLOGY,2007,405155234PANT,LINSJFERMENTATIVEPRODUCTIONOFALKALINEPROTEASEASDETERGENTADDITIVEJCHINESEBIOCHEMSOC,1991,2049605BAKHTIARS,ESTIVEIRARJ,HATTIKAULRSUBSTRATESPECIFICITYOFALKALINEPROTEASEFROMALKALIPHILICFEATHERDEGRADINGNESTER
8、ENKONIASPAL20JENZYMEANDMICROBIALTECHNOLOGY,200537555345406蔡雁，郝勃，喻子牛抗动物病原菌芽孢杆菌的筛选、初步鉴定和抗菌活性J微生物学杂志，200525519227唐丽娟，纪兆林，徐敬友，等地衣芽孢杆菌W10对灰葡萄孢的抑制作用及其抗菌物质J中国生物防治，2005，2132032058JOHNSONBA,ANKERH,MELENEYFLANEWANTIBIOTICREDUCEDBYAMEMBEROFTHEBSUBTILISGROUPMSCI,1945,1023763779赵婷，梁秀芝，刘成君皮革霉变真菌的分离鉴定及拮抗菌的筛选J中国皮革，
9、2005，3423101310唐娟，张毅，李雷雷等；地衣芽孢杆菌应用研究进展；湖北农业科学；2008，3，35135411POTUMARTHIR,SUBHAKARCHALKALINEPROTEASEPRODUCTIONBYSUBMERGEDFERMENTATIONINSTIRREDTANKREACTORUSINGBACILLUSLICHENIFORMISNCIM2042EFFECTOFAERATIONANDAGITATIONREGIMESJBIOCHEMICALENGINEERINGJOURNAL,2007,3418519212马永强，那治国，张娜，等地衣芽孢杆菌2709高去酰胺活性碱性蛋白酶
10、发酵条件及酶学性质的研究J食品工业科技，2008，2910818513章海锋，阮晖，刘婧，等地衣芽孢杆菌ZJUEL31410产胞外弹性蛋白酶的分批发酵研究J中国食品学报，2009，9113013614SB/T103171999蛋白酶活力测定法15史锋生物化学实验杭州；浙江大学出版社，2002929316KAILSJ,FMAUGERI,RODRIGUESMIRESPONSESURFACEANALYSISANDSIMULATIONASATOOLFORBIOPROCESSDESIGNANDOPTIMIZATIONJPROCBIOCHEM,2000,3553955017LIY,CUIFJ,LIUZQETA1IMPROVEMENTOFXYLANASEPRODUCTIONBYPENICILLIUMOXALICUMZH30USINGRESPONSESURFACEMETHODOLOGYJENZYMEANDMICROBIALTECHNOLOGY,2007,4013811388
