1、毕业论文开题报告生物工程鱼类嗅觉基因的SOUTHERN杂交分析研究一、选题的背景与意义鱼类的嗅觉器官是其重要的化学感受器之一，由鼻孔、鼻腔和位于鼻腔内的嗅囊构成，鱼类嗅觉器官的进化与发展也经历了一个由低级到高级、由简单到复杂的过程。鱼类的嗅觉器官在鱼类的生活中，诸如摄食、御敌、生殖和集群等行为上发挥着重要的作用。本研究主要利用SOUTHERN印迹杂交技术检测本实验室已经鉴定出9个家族的嗅觉受体基因（OR）在基因组中分布情况，同时预测嗅觉基因在基因组的拷贝数，旨在为了解大黄鱼的嗅觉分子生理提供理论基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内容1、从大黄鱼内脏或肌肉组织中提取DNA，并电
2、泳检测DNA的浓度；2、用两种酶（HINDIII和ECOLII）酶切目的DNA；3、地高辛标记的探针制备；4、探针与目的DNA的SOUTHERNBLOT杂交；5、杂交膜的洗脱和显色。拟解决的问题1、大黄鱼DNA的提取；2、地高辛标记探针的制备；3、电转法转膜的效率；4、杂交膜的洗脱与显色的控制。三、研究的方法与技术路线（一）研究方法1DNA的提取和回收从大黄鱼的肝脏或肌肉组织中提取适量基因组DNA；2随机引物法标记探针分别用两种酶（ECOLI1,HIND3）酶切大黄鱼基因组DNA，电泳胶回收目的DNA片段，制作地高辛标记探针；3电转法转膜采用电转法将目的DNA片段转移到尼龙膜上（80V，50M
3、IN）；4SOUTHERNBLOT膜烘干（120,30MIN）后，先用预杂交液进行预杂交，再用DIG标记探针杂交过夜；5杂交膜的洗脱和显色杂交完毕，经洗膜后，再用抗体与DIG标记探针杂交，再次用WASHINGBUFFER洗膜后，即可加入显色剂，将被显色剂充分浸透的杂交膜装入一封闭的袋子中，并置于暗室显色过夜。显色完全后，查看膜上的条带从而获得相应家族基因的拷贝数，最后将膜烘干并拍照。这样用9种不同的DIG标记探针就可以获得大黄鱼嗅觉基因系统9大家族基因的拷贝数。（二）技术路线四、研究的总体安排与进度201011201012实验前1毕业论文选题。2进行文献查阅和资料收集。3制定具体研究计划和试验
4、方案。4开题答辩与综述。20101220111实验中1试验相关试剂准备。2数据和材料整理、分析。2011120115实验后1完成2篇外文翻译。2论文撰写、提交并答辩。五、主要参考文献电转法转膜探针杂交BLOTINGAGROSE电泳大黄鱼基因组DNA提取DIG标记探针制备酶切效率检测与浓缩基因组DNA酶切洗膜后，显色剂显色洗膜后，抗体与DIG标记探针杂交烘干，拍照1陈星玉,中国鲤科鱼类嗅觉器官的研究J动物分类学报,1988,1321821942孟庆闻,殷名称鳐类和银鲛类嗅觉器官的研究J水产学报,1981,532092143孟庆闻,殷名称鲨类嗅觉器官的研究C鱼类学论文集,北京科学出版社,19812
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