1、毕业论文开题报告生物技术10种形态相似川茶花品种的分子鉴定一、选题的背景与意义茶花CAMELLIAJAPONICAL为山茶科THEACEAE山茶属CAMELLIA常绿灌木或小乔木的统称，是我国十大名花之一，其花姿丰盈、高雅，树高可达34米，树干平滑无毛，大多数花重瓣鲜艳美丽，具有很高的观赏和生态价值，在盆栽和园林绿化中广泛应用，国内茶花年产值已超过30亿元。在长期的发展过程中，由于茶花品种间自然或人工杂交，使得很多品种的花色花型、外部形态极其相似，品种间很难区分，这给川茶花品种分类和杂交育种亲本选配等工作带来很大困难，搞清相似品种间的遗传差异，对茶花品种的鉴别及育种工作具有重要意义。ISSRI
2、NTERSIMPLESEQUENCEREPEAT是一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记技术，由ZIETKIEWIEZ等在1994年创建，它具有多态性高、稳定性强、检测方便、成本低等特点，因此在植物的品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱的构建等方面得到了广泛的应用。本研究建立茶花基于ISSR标记的分子鉴定方法，利用ISSR标记对外部形态特征极其相似的茶花品种进行品种间鉴定，为相似品种间的准确区分提供依据。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题1研究的基本内容茶花DNA的提取方法研究ISSR引物筛选研究扩增条件的建立研究利用建立的ISSR分子标记对4组外部形态特征极其相似的茶花品种进行品种间分子鉴定
3、。2解决的主要问题（1）ISSR引物筛选；（2）形态特征极其相似的茶花品种的ISSR分子分析。三、研究的方法与技术路线研究方法1材料的处理将采回的新鲜山茶叶片用纸包好，做好记录，放入袋中用变色硅胶干燥。2DNA的提取用改良的CTAB法提取材料叶片中的DNA，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量与浓度。提取的DNA稀释后20保存备用。3ISSRPCR31引物设计通过阅读相关文献，挑选出适合该实验的引物，从某生物公司订购。32引物筛选筛选电泳条带清晰且重复性好的引物。33PCR确定PCR反应体系，用PCR仪进行扩增反应。PCR产物用3的琼脂糖凝胶电泳。用凝胶成像系统观察，拍照，获得电泳图。4数据分析观察
4、得到的条带是否具有多态性，计算出多态性条带比例，以及几种相似茶花的遗传相关系数。技术路线四、研究的总体安排与进度2010年11月2011年1月1、实验前的准备工作查找资料，写开题报告和论文综述；2、开始翻译外文文献。2011年2月2011年3月1、茶花DNA的提取2、ISSR引物筛选研究3、扩增条件的建立4、对形态特征极其相似的茶花品种进行品种间分子鉴定5、完成外文文献翻译。2011年4月2011年5月1、分析相关数据，整理试验结果，补充完善相关实验；2、论文写作及修改。新鲜茶花叶片变色硅胶干燥CTAB法提取DNA电泳测DNA纯度与浓度稀释过的DNA20保存备用ISSR引物设计ISSR引物筛选
5、ISSRPCR反应条件优化进行PCR条带扩增PCR结果跑电泳、拍照品种的分子鉴别五、主要参考文献1ZIETKIEWIEZE,RAFALSKIA,LABUDADGENOMEFINGERPRINTINGBYSIMPLESEQUENCEREPEATSSRANCHOREDPOLYMERASECHAINREACTIONAMPLIFICATIONJGENOMICS,1994,2021761832IANDGODWIN,ELISABETHABAITKEN,LAWRENCEWSMITHAPPLICATIONOFINTERSIMPLESEQUENCEREPEATISSRMARKERSTOPLANTGENETICS
6、JELECTROPHORESIS,1997,18152415283朴红梅,李万良,穆楠等ISSR标记的研究与应用J吉林农业科学,2007,32528304宁静,朱旗,黄建安等ISSR分子标记及其在茶树遗传育种研究中的应用J茶叶科学技术,2008,2585欧阳彩虹,何桥,秦国新等25个菊花品种遗传多样性的ISSR分析J山西农业大学学报自然科学版,2010,3032012046冷言峰,马云芳,何桥等几个槐树植物的ISSR鉴定J西南师范大学学报自然科学版,2007,32683867田青松,韩冰,杨劼等96份雀麦属材料遗传多样性的ISSR分析J中国草地学报,2010,118258倪穗,李纪元,王强20
7、个茶花品种遗传关系的ISSR分析J林业科学研究,2009,2256236299王照兰,杨持,赵丽丽等扁蓿豆不同品系ISSR标记遗传差异和遗传多样性J中国草地学报,2010,1111710赵晓清,王波,王一等利用ISSR分析野生蘑菇与双孢蘑菇的遗传多样性J四川大学学报自然科学版,2009,4641130113411倪穗,田敏,李纪元等红山茶总DNA提取及ITSPCR扩增条件优化研究J浙江林业科技,2007,272161912李延龙,张明,曹秀敏等ISSR分子标记技术在金叶女贞品种鉴定中的应用J安徽农学通报,2008,14223939,3413霍光,李德芳,陈安国利用ISSR分子标记分析44份红麻
8、种质资源的遗传多样性J安徽农业科学,2009,37219890989214张权党,田华,谢耀坚桉树4个种遗传多样性的ISSR分析J中南林业科技大学学报自然科学版,2010,301121715SUSHMAVERMA,TSRANAGENETICDIVERSITYWITHINANDAMONGTHEWILDPOPULATIONSOFMURRAYAKOENIGIILSPRENG,ASREVEALEDBYISSRANALYSISJBIOCHEMICALSYSTEMATICSANDECOLOGY,20111616于恒秀,王淼,梁国华等ISSR引物鉴定芍药栽培品种之间亲缘关系的初步研究J植物生理学通讯,200
9、6,42227127417段伟,闫文德,乌云塔娜14个杏李品种的ISSR分析及分子鉴别J内蒙古农业大学学报自然科学版,2010,214715318姚明哲,黄海涛,余继忠等ISSR在茶树品种分子鉴别和亲缘关系研究中的适用性分析J茶叶科学,2005,25215315719JOUANNLAI,WEICHENYANG,ANDJUYINGHSIAO,ANASSESSMENTOFGENETICRELATIONSHIPSINCULTIVATEDTEACLONESANDNATIVEWILDTEAINTAIWANUSINGRAPDANDISSRMARKERSBOTBUUACADSIN2001,429310020
10、谭和平,徐利远,余桂蓉等茶树种质资源ISSR分子标记初步研究J核农学报,2006,20211311521王亨洪,索化夷,杨坚等川渝地区重要野生大茶树遗传多样性的ISSR分析J茶叶科学,2009,29216817222罗晓莹,庄雪影,杨跃生杜鹃红山茶遗传多样性的ISSR分析J热带亚热带植物学报,2007,1529310023潘仙鹏,洪莉,干才连等2个茶花变异种与原种间的ISSR分析J浙江农业科学,2010,229529724朱岩芳,祝水金,李永平等ISSR分子标记技术在植物种质资源研究中的应用J种子,2010,2555925KOSMANE,LEONARDKJSIMILARITYCOEFICIENTSFORMOLECULARMARKERSINSTUDIESOFGENETICRELATIONSHIPSBETWEENINDIVIDUALSFORHAPLOID,DIPLOID,ANDPOLYPLOIDYSPECIESJMOLECULARECOLOGY,2005,142415424
