1、毕业论文开题报告生物技术大黄鱼肌动蛋白基因克隆与序列分析一、选题的背景与意义大黄鱼LARIMICHTHYSCROCEA属石首鱼科，黄鱼属，也称黄鱼、大鲜、大黄花等，为暖温性近海中下层群体性洄游鱼类。其肉质细腻，味道鲜美，营养丰富，肌肉蛋白质中富含多种氨基酸，是当今人类较为理想的动物蛋白源。此外，大黄鱼还有很高的药用价值，其耳石有清热去瘀、通淋利尿的作用，膘有润肺健脾、补气止血作用，胆有清热解毒功能。但是近年来由于捕捞强度过大，野生大黄鱼已经很难捕获。随着大黄鱼人工育苗技术的成熟和完善，海水网箱养殖大黄鱼技术迅速发展。由于多年的全人工累代繁育与养殖，造成了大黄鱼种质严重退化。一些问题例如性早熟、
2、品质退化、生长速率变慢等制约了大黄鱼养殖的健康发展，因此加强大黄鱼基础生物学方面的研究已迫在眉睫。肌动蛋白ACTIN是细胞骨架的重要组成部分，肌肉细胞的一个重要的收缩蛋白，参与细胞发育进程的多个方面，包括细胞运动、新陈代谢、有丝分裂、肌肉收缩等，家族根据氨基酸序列的不同可分为6种类型，包括2种细胞质ACTIN（型和型），2种横纹肌型ACTIN，即骨骼肌ACTIN、心脏ACTIN和2种平滑肌ACTIN，即血管平滑肌型、型内脏平滑肌型。而大黄鱼肌肉中的是属于横纹肌肌动蛋白，也称骨骼肌肌动蛋白，肌动蛋白普遍存在于真核生物中，肌动蛋白是一种具有2个亚基的蛋白质,是其主要作用是将肌动蛋白微丝锚定在肌节Z
3、线上，所以表达的增加无疑能提高运动的强度，该基因是一种在进化中高度保守的蛋白质，所以肌动蛋白基因可以很好的被克隆。自SATRAUD于1942年就从家兔中分离到了骨骼肌的肌动蛋白以来，目前对肌动蛋白基因研究很多。本实验是以宁波水产大世界大黄鱼的肌肉为材料，并对其肌动蛋白基因进行克隆并对其基因序列进行生物信息学方面的分析可得到肌动蛋白基因相关的一些功能结构，近年来，人们发现肌动蛋白在鱼类肌肉中有重要的作用。因此，研究大黄鱼的肌动蛋白基因，有可能为大黄鱼的育种开辟一条新的途径，并利用大黄鱼作为模型动物研究人类的疾病和其他领域的应用提供了一定的理论基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内
4、容；1、CDNA文库构建；2、EST测序；3、获得肌动蛋白基因全长；4、肌动蛋白基因序列与其他鱼类同源性比较；5、氨基酸结构；6、利用CLUSTALX及MEGA软件构建系统进化树；拟解决的主要问题1、肌动蛋白结构；2、与其他鱼类蛋白质结构比较有什么特点；三、研究的方法与技术路线大黄鱼肌肉总RNA提取MRNACDNA合成CDNA与载体连接重组体转化宿主细胞构建全长CDNA文库EST测序获得肌动蛋白基因片段经BLAST在GENBANK上查询确定基因肌动蛋白基因全长分析引物设计相似性氨基酸结构进化树四、研究的总体安排与进度201011201101查询与论文有关的资料、撰写试验计划、熟悉基本的实验操作
5、；201101201104肌动蛋白基因克隆；对肌动蛋白基因进行生物学分析；201105整理数据，撰写论文及准备答辩；五、主要参考文献1贺淹才肌动蛋白和肌动蛋白基因的研究进展J生命的化学,2002,2232482502胡文革,陈创夫,王远志等准噶尔雅罗鱼肌动蛋白因启动子克隆及序列分析J动物学杂志,2010,45118263MONSERRATL,HERMIDAPRIETOM,FERNANDEZX,ETALMUTATIONINTHEALPHACARDIACACTINGENEASSOCIATEDWITHAPICALHYPERTROPHICCARDIOMYOPATHY,LEFTVENTRICULARNO
6、NCOMPACTION,ANDSEPTALDEFECTSJEURHEARTJ,2007,2816195319614GERALDKCELLBIOLOGY,2NDEDITIONMMCGRAWHILLBOOKCOMPANY,19845李明云,张海琪,钟爱华大黄鱼基因组DNA的提取及其RAPD分析条件的探索J科技通报,2002,1853683736李明云,陈炯,张祖兴等大黄鱼PSEUDOSCIAENACROCEA转铁蛋白TF基因克隆及序列分析J海洋与沼泽,2007,3865635687唐伟,谭海东,张素芳等斯达氏油脂酵母肌动蛋白基因克隆及序列分析J生物技术通报,2009,2802838李兴平,唐国勇等
7、运动对骨骼肌肌动蛋白的影响研究评述J吉首人学学报2007,2861131159纪玲,杨林,武延格等应用免疫组织化学S100和肌动蛋白抗原鉴定组织工程软骨J中国组织工程研究与临床康复,2007,28611311510BOOKWALTERCS，TRYBUSKMFUNCTIONALCONSEQUENCESOFAMUTATIONINANEXPRESSEDHUMANALPHACARDIACACTINATASITEIMPLICATEDINFAMILIALHYPERTROPHICCARDIOMYOPATHYJBIOLCHEM,2006,28124167771678411于新凯,田野,左群等下坡跑训练对大鼠腓
8、肠肌和比目鱼肌肌动蛋白基因表达的影响J上海体育学院学报,2002,2611475112刘芳,陈树宝,刘晓青等心脏肌动蛋白基因在胚胎心脏发育中的时空表达J中华儿科杂志,2005,431077277613ABDELWAHIDE,PELLINIEMILJ,SZUCSIKJC,ETALCELLULARDISORGANIZATIONANDEXTENSIVEAPOPTOSISINTHEDEVELOPINGHEARTOFMICETHATLACKCARDIACMUSCLEALPHAACTINAPPARENTCAUSEOFPERINATALDEATHJPEDIATRRES,2004,55219720414FLO
9、RIANB,HARALDB,WATSONL,ETALCARDIACALPHAACTININSMOOTHMUSCLECELLSDETECTIONINUMBILICALCORDVESSELSANDINATHEROSCLEROTICLESIONSJBASICRESCARDIOL,2000,9610611315姜红堃心脏肌动蛋白基因与心脏疾病的相关研究进展J中国实用儿科杂志,2010,25430931116OLSONTM,DOANTP,KISHIMOTONY,ETALINHERITEDANDDENOVOMUTATIONSINTHECARDIACACTINGENECAUSEHYPERTROPHICCAR
10、DIOMYOPATHYJJMOLCELLCARDIOL,2000,3291687169417MATSSONH,EASONJ,BOOKWALTERCS,ETALALPHACARDIACACTINMUTATIONSPRODUCEATRIALSPETALDEFECTSJHUMMOLGENET,2008,17225626518PORTERAC,SVENSSONSP,STAMERWD,ETALALPHA2ADRENERGICRECEPTORSSTIMULATEACTINORGANIZATIONINDEVELOPINGFETALRATCARDIACMYOCYTESJLIFESCI,2003,721314551466
