1、毕业论文开题报告生物技术大黄鱼垂体肿瘤转化基因克隆及分子特征一、选题的背景与意义大黄鱼PSEUDOSCIAENACROCEA，属石首鱼科、黄鱼属，俗称黄鱼、黄花鱼等。主要分布于我国黄海南部、东海和南海，分为3个地理种群岱衢族、闽一粤东族和硇洲族。大黄鱼曾是我国著名的四大海洋捕捞对象之一，也是浙江省的重要经济鱼类。大黄鱼味道鲜美，营养价值高。此外，大黄鱼还有很高的药用价值，大黄鱼还有很高的药用价值，中医认为黄鱼有和胃止血、益肾补虚、健脾开胃、安神止痢、益气填精之功效；对贫血、失眠、头晕、食欲不振及妇女产后体虚有良好疗效。其耳石有清热去瘀、通淋利尿的作用，膘有润肺健脾、补气止血作用，胆有清热解毒功
2、能。在肿瘤的发生、发展过程中，癌基因与抑癌基因扮演着重要的角色，然而，单个基因的改变不足以造成细胞的完全恶性转化，而是多种癌基因与抑癌基因形成复杂的调控网络共同作用于肿瘤细胞。垂体瘤转化基因PTTG是从垂体瘤分离得到的一种原癌基因。PTTG是一种很强的肿瘤转化基因，与绝大多数肿瘤发生、发展、侵袭及转移密切相关，通过多种机制参与肿瘤的发生，在促进细胞转化及肿瘤形成中起着重要作用。通过对PTTG基因进行分子克隆及特征分析，有助于我们了解肿瘤的发生机制，研究在核酸或蛋白水平阻断PTTG的表达，则可望在较高水平对肿瘤的发生和转移等恶性表型进行逆转。由于近海资源遭到严重破坏，自二十世纪八十年代大黄鱼人工
3、育苗技术获得突破以来，大黄鱼的养殖规模逐年扩大。研究结果表明长期人工繁殖育种的动物会产生养殖品系的遗传退化，引起某些基因丢失而导致其优良经济性状衰退。目前养殖大黄鱼已出现了一系列问题，如生长缓慢、性成熟提早、亲鱼个体变小及肉质变差等，这些因素直接影响到大黄鱼的产量、销售和商品价格。所以，通过现代生物学方法改良大黄鱼的遗传背景，从而提高大黄鱼的抗病害能力以及肉质，以达到高产优质的效果，是人们正在着力研究的课题。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内容1大黄鱼肌肉组织总RNA的提取和检测；2通过RTPCR得到CDNA，并建立CDNA全长文库；3随机测序大黄鱼肌肉组织CDNA全长文库的克隆
4、菌，通过几次EST测序，测通PTTG的CDNA，得到大黄鱼PTTGCDNA序列；4要运用生物信息学对大黄鱼PTTG基因进行序列同源性分析5要进行系统进化树分析。拟解决的主要问题研究大黄鱼垂体肿瘤转化基因（PTTG）与其他生物的PTTG基因比较有何特点。三、研究的方法与技术路线连接RTPCR连接转化BLAST查询引物设计大黄鱼肌肉组织总RNA提取总CDNA质粒重组质粒细菌感受态细胞的制备CDNA全长文库的克隆菌随机测序CDNA全长文库克隆菌，获得PTTG基因的EST获得PTTG基因的EST测通PTTG基因的CDNA全长序列分析氨基酸序列同源性分析系统进化树分析四、研究的总体安排与进度2010年1
5、0月到2010年11月查阅文献，准备实验中要用的材料和仪器。2010年12月到2011年2月相关文献综述、进行实验和外文文献的翻译。2011年3月到2011年4月完成毕业论文。2011年5月准备毕业论文答辩。五、主要参考文献1PEIL,MELMEDSISOLATIONANDCHARACTERIZATIONOFAPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEPTTGJMOLENDOCRINOL,1997,1144334412ZHANGX,HORWITZGA,PREZANTTR,ETALSTRUCTURE,EXPRESSION,ANDFUNCTIONOFHUMANPITUITARYT
6、UMORTRANSFORMINGGENEPTTGJMOLENDOCRINOL,1999,1311561663KAKARSSMOLECULARCLONINGGENOMICORGANIZATIONANDIDENTIFICATIONOFTHEPROMOTERFORTHEHUMANPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEPTTGJGENE,1999,24023173244CHENL,PURIR,LEFKOWITZEJ,ETALIDENTIFICATIONOFTHEHUMANPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEHPTTGFAMILYMOLECULARSTRUC
7、TURE,EXPRESSION,ANDCHROMOSOMALLOCALIZATIONJGENE,2000,24812241505DOMINGUEZA,RAMOSMORALESF,ROMEROF,ETALHPTTG,AHUMANHOMOLOGUEOFRATPTTG,ISOVEREXPRESSEDINHEMATOPOIETICNEOPLASMSEVIDENCEFORATRANSCRIPTIONALACTIVATIONFUNCTIONOFHPTTGJONCOGENE,1998,1717218721936CHIENW,PEILANOVELBINDINGFACTORFACILITATESNUCLEART
8、RANSLOCATIONANDTRANSCRIPTIONALACTIVATIONFUNCTIONOFTHEPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEPRODUCTJBIOLCHEM,2000,2752519422194277PEILIDENTIFICATIONOFCMYCASADOWNSTREAMTARGETFORPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEJBIOLCHEM,2001,27611848484918PEIL,MELMEDSISOLATIONANDCHARACTERIZATIONOFAPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEP
9、TTGJMOLENDOCRINOL,1997,1144334419HAMIDT,KAKARSSPTTGANDCANCERJHISTOHISTOPATHOL,2003,18124525110MCCABECJ,KHAIRAJS,BOELAERTK,ETALEXPRESSIONOFPITUITARYTUMOURTRANSFORMINGGENEPTTGANDFIBROBLASTGROWTHFACTOR22FGF22INHUMANPITUITARYADENOMASRELATIONSHIPSTOCLINICALTUMOURBEHAVIOURJCLINENDOCRINOLOXF,2003,582141150
10、11FOLKMANJWHATISTHEEVIDENCETHATTUMORTRSAREANGIOGENESISDEPENDENTJNATLCANCELLNST,1990,821312HAMADAJ,CAVANAUGHPC,LOTANOSEPARABLEGROWTHANDMIGRATIONFACTORSFORLARGECELLLYMPHOMACELLSSECRETEDBYMICROVASCULARENDOTHELIALCELLSDERIVEDFROMTARGETORGANSFORMETASTASISJBRJCANCER,1992,6634935413ISHIKAWAH,HEANEYAP,YUR,E
11、TALHUMANPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEINDUCESANGIOGENESISJCLINENDOCRINOLMETAB,2001,86286787414ZOUH,MCGARRYTJ,BERNALT,ETALIDENTIFICATIONOFAVERTEBRATESISTERCHROMATIDSEPARATIONINHIBITORINVOLVEDINTRANSFORMATIONANDTUMORIGENESISJSCIENCE,1999,285542641842215ORRWEAVERTLPERSPECTIVESCELLCYCLETHEDIFFICULTYINSE
12、PARATINGSISTERSJSCIENCE,1999,285542634434516KIMD,PEMBERTONH,STRATFORDAL,ETALPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEPTTGINDUCEGENETICINSTABILITYINTHYROIDCELL1JONCOGENE,2005,243048617YUR,HEANEYAP,LUW,ETALPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENECAUSESANEUPLOIDYANDP53DEPENDENTANDP53INDEPENDENTAPOPTOSISJBIOLCHEM,2000,27547
13、365023650518ZHANGX,HORWITZGA,HEANEYAP,ETALPITUITARYTUMORTRANSFORMINGGENEPTTGEXPRESSIONINPITUITARYADENOMASJCLINENDOCRINOLMETAB,1999,84276176719SAEZC,JAPONMA,RAMOSMORALESF,ETALHPTTGISOVEREXPRESSEDINPITUITARYADENOMASANDOTHERPRIMARYEPITHELIALNEOPLASIASJONCOGENE,1999,18395473547620HEANEYAP,SINGSONR,MCCAB
14、ECJ,ETALEXPRESSIONOFPITUITARYTUMOURTRANSFORMINGGENEINCOLORECTALTUMOURSJLANCET,2000,355920571671921FRIESEMA,WISCHHUSENJ,WICKW,ETALRNAINTERFERENCETARGETINGTRANSFORMINGGROWTHFACTORBETAENHANCESNKG2DMEDIATEDANTIGLIOMAIMMUNERESPONSE,INHIBITSGLIOMACELLMIGRATIONANDINVASIVENESS,ANDABROGATESTUMORIGENCITYINVIVOJCANCERRES2004,642075967603
