1、毕业论文开题报告生物技术大黄鱼肌钙蛋白基因克隆及序列特征一、选题的背景与意义大黄鱼（PSEUDOSCIAENACROCEA）俗称黄花鱼，为暖温性近海经济鱼类，通常生活在近海区域的中上水层，有结群涸游习性，在我国黄海东海及南海海区都有分布，曾被视为我国海洋捕捞的“当家鱼”。国内外都有许多大黄鱼的相关研究报道，大黄鱼经济价值较高，肉质细嫩，营养丰，01公斤鱼肉含蛋白质176克，还含有脂肪、糖类、钙、磷、铁、维生素等多种营养成分，具有很高药用与食疗功效，特别是其鳔具有大补气血的功能，凡血气亏损者均可食用，对治疗肺结核、再生障碍性贫血等症都有较的效果。另据临床报导其鱼鳔用香油炸酥后，压碎吞服治疗食道癌
2、、血癌，有一定疗效。因此大黄鱼在国内外颇受欢迎，养殖大黄鱼效益较好，是农业部2008年主要推荐的养殖品种之一。肌钙蛋白（TROPONIN）是肌肉的主要调节蛋白质，直接参与钙所控制的肌肉收缩。它占肌原纤维蛋白的5。由肌钙蛋白TTNT、肌钙蛋白ITNI及肌钙蛋白CTNC三种亚单位组成，这三种成分之间存在着钙依赖性的相互作用，三者结合通过钙控制肌肉的收缩。近几年来，随着对肌钙蛋白研究的深入，检测肌钙蛋白的方法及试剂广泛地应用于实验室，因此它的应用范围越来越广泛，作用更加突出越来越受重视，所以肌钙蛋白分子生物学研究具有重要的临床意义。近年来，大黄鱼养殖的产量和品质都有下降的现象，遗传育种及遗传多样性方
3、面的研究结果表明长期人工繁殖育种的动物会产生养殖品系的遗传退化，引起某些基因丢失而导致其优良经济性状衰退。所以，通过现代生物学方法改良大黄鱼的遗传背景，提高大黄鱼的抗病害能力以及肉质，以达到高产优质的效果，是人们正在着力研究的课题。近年来，人们发现肌钙蛋白在鱼类肌肉中有重要的作用。因此，研究大黄鱼的肌钙蛋白基因，有可能为大黄鱼的育种开辟一条新的途径，为大黄鱼肌钙蛋白的研究积累基础资料，并促进大黄鱼养殖的发展。同时通过大黄鱼肌钙蛋白基因的提取和分析，可为以后制备出核酸探针、筛选和克隆出一批具有优良性状的基因、构建基因文库等研究工作奠定基础。二、研究的基本内容1随机测序大黄鱼肌肉组织CDNA全长文
4、库的克隆菌，通过若干次EST测序，测通肌钙蛋白的CDNA，得到大黄鱼肌钙蛋白CDNA序列；2对大黄鱼肌钙蛋白基因进行序列同源性分析3进行系统进化树分析。拟解决的主要问题1获得肌钙蛋白基因的序列；2大黄鱼肌钙蛋白与其他生物的肌钙蛋白基因比较有何特点。研究的方法与技术路线三、研究的总体安排与进度2010年10月到2010年11月查阅文献资料，准备实验中要用的材料和仪器。2010年12月到2011年2月相关文献综述、进行实验和外文文献的翻译。2011年3月到2011年4月完成毕业论文。2011年5月准备毕业论文答辩。四、主要参考文献1FARAHCS,REINAEHFCTHETROPONINCOMPL
5、EXANDREGULATIONOFMUSCLECONTRACTIONFASEBJ,1995,9755引物设计序列分析序列同源性分析进化树分析CDNA全长文库随机测序CDNA文库BLAST查询获得TN基因的EST测通TN基因CDNA全长培养提取质粒2CALVERTMJ,WARDDG,TRAYERHR,TRAYERIPTHEIMPORTANCEOFTHECARBOXYLTERMINALDOMAINOFCARDIACTROPONINCINCA2SENSITIVEMUSCLEREGULATIONJBIOLCHEM,2000,27542323王慧,徐霞心肌肌钙蛋白的研究进展J中华今日医学杂志,2004,
6、42864ADAMASJE,BEDORGS,DAVILAROMANVG,ETA1CARDIACTROPONINIAMARKERWITHHIGHSPECIFICITYFORCARDIACINJURYJAMCOILCARDIOL1996125门卫东,马建智心肌肌钙蛋白的研究进展及临床应用J中国现代医生,2008,4613406APPLEFSTISSUESPECIFICITYOFCARDIACTROPONINI,CARDIACTROPONINTANDCREATINEKINASEMBJCLINCHIMACTA,19992842L5LL597BABUINL,JAFFEAS,TROPONINTHEBIOM
7、ARKEROFCHOICEFORTHEDETECTIONOFCARDICINJUJCMAJ,2005,173101191208王晓阳,胡艳东,史玲玲心肌肌钙蛋白应用的研究J医学综述,2008,14101569HAREMCWCADIACSPECIFIETROPONISINACUTECORANANYSYNDROMESBRAUNWALDHEARTDISEASEMPHILADELPHIASANNDERSWBCO,199757257310MOCKDM,HELLERGJ,ETAL,THEACUTECORONARYSYNDROMEDIAGNOSISANDPROGNOSITIEEVALUATIONBYTROP
8、ONINIISINFLUENCEDBYTHETESTSYSTEMAFFINITYTODIFFERENTTROPONINCOMPLEXESJCLINCHEMACTA,2000,2931213915511YANGYZ,WUQBSOMEOBSERVATIONOFDIAGNOSISANDCAREINPATIENTWITHVIRALMYOCARDITISJCHINESEJOURNALOFCARDIOLOGY,2002,3012913012ANTMANEM,ETALCARDIACSPECIFICTROPONINILEVELSTOPREDICTTHERISKOFMORTALITYINPAPIENTSWITH
9、ACUTECORONARYSYNDROMESJNEWENGMED,1996,3351313GUOMZ,CHENXR,LUOYQTHEROLEOFSERUMCARDIACTROPONINIINDIAGNOSISANDOBSERVATIONINPATIENTSWITHVIRALMYOCARDITISJCHINAMEDICALENGINEERING,2007,15197L0214赵恩福血清心肌酶测定对开胸术后心功能预测的意义J天津医药,1996,201373915MISSOVE,CALZOLARIC,PANBCIRCULATINGCARDIACTROPONINIINSEVERECONGESTIVEH
10、EARTFAILUREJ,CIRCULATION,1997,96929529516VECCHIALAL,MEZZENAG,OMETTOR,ETA1DETECTABLESERUMTROPONINIINPATIENTSWITHHEARTFAILUREOFNONMYOCARDIALISCHEMICORIGINJAMCARDIAL,1997,801888917谢瑞,孙刚心肌肌钙蛋I临床应用进展J现代生物医学进展,20082518苗丽娟,耿贺梅心肌肌钙蛋白I在早期诊断心肌损伤中的应用J华北煤炭医学院学报,2002,17447047119VECCHIAL,MEZZENAG,ETA1DETECTABLESERUMTROPONINIINPATIENTSWITHHEARTFAILUREOFNONMYOCARDIALISCHEMICORIGINJAMCARDIAL,1997,801888920李明云,张海琪大黄鱼基因组DNA的不同提取方法及RAPD扩增比较J浙江海洋学院学报自然科学版,2001,204275277
