1、毕业论文开题报告生物技术几种吸管虫原生动物的生物学研究一、选题的背景与意义纤毛虫CILIATES隶属于原生动物界，是最原始、最低等的动物之一，也是原生动物中种类数量最多，单位个体最大，特化程度最高的一大类群，经历了十分久远的进化和演化史，是地球上最古老的真核生物之一。日前已知的近万种纤毛虫在形态结构、生活方式、环境分布及其他生物学特征方面均表现出较大的多样性。其主要特征有1其生活史中至少在某一时期存在纤毛或由其进一步特化而成的纤毛器作为运动、摄食胞器；2具有功能不同的大小核型，大核MACRONUCLEUS为多倍体，司营养，小核MICRONUCLEUS为二倍体，司遗传和生殖；3具有高度特化的细胞
2、器如纤毛CILIA、伸缩泡CONTRACTILEVACUOLE、胞口CYTOSOME、胞咽CYTOPHARYNX、胞肛CYTOPYGE等；4无性生殖通常为横二分裂，少数种类有出芽生殖及复分裂；5有性生殖为特殊的接合生殖CONJUGATION，极少数有自配AUTOGAMY或质配CYTOGAMY；6生活方式有自由生、共生、共栖及寄生等各种类型，全为异养。吸管类纤毛虫是纤毛门中高度特化的类群，大部分阶元尤其是海洋类群近半个世纪以来一直无人问津。在CORLISS的分类系统中，吸管类纤毛虫隶属于纤毛门，动基片纲，吸管亚纲、吸管目。几乎全部为固附或外栖性生活，无性生殖主要通过出芽方式进行，因此生活史中可以
3、明确分为成体和幼体阶段。成体时体表纤毛完全退化，无胞口；营摄食的管状或针状触手成簇或周身分布，触手上通常生有突出小体，称系缚式刺丝泡，借以捕食其它纤毛虫或它类原生动物。多数种类具有无收缩性的柄。幼体游泳体可自由游泳，全身或部分被有纤毛，无柄和吸管。无性生殖根据出芽的三种不同方式，分为外生、内生和外翻3个亚目。吸管虫是周丛生纤毛虫的主要组成类群，大部分种类可附生于其他生物体表，如原生动物、藻类、软体动物、轮虫、环节动物、甲壳动物、昆虫、鱼、海龟等，一些种类也可寄生于马、犀牛、豚鼠、大象的肠内。一般情况，吸管虫对其宿主影响不大，但当其大量滋生时，对养殖动物则有相当大的危害。周丛纤毛虫的群落结构具有
4、良好的自我维持和修复能力；集约化海水养殖水体中周丛纤毛虫的物种多样性显著高于开放的近海岸水体；其优势种群丰度、群落结构参数和多个环境因子具有显著的相关性；不同时空群落结构间相似性及其参数能较好反映周丛纤毛虫的群落结构演替，并能较好的响应集约化海水养殖水体环境的变化。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）基本内容本实验对几种吸管类纤毛虫的生物学进行详细研究，包括形态学，分类学，生活史等。采集于自然水体的吸管虫在实验室条件下培养，通过体式显微镜和光学显微镜观察该类生物的生活史、活体形态学等特征。用现代银染方法揭示其游泳体的纤毛图式，核器结构等结构。通过对该类生物的研究，揭示其在自然界中所扮演的
5、重要角色。（二）拟解决的问题通过样品采集、种类分离与鉴定，活体形态学与生活史的观察，结合现代银染方法，对几种吸管类纤毛虫原生动物的生物学做初步的分析与研究。掌握该类群的采集、培养、光学显微镜观察及现代银染方法，完成23种吸管类纤毛虫的形态学描述和生活史观察。三、研究的方法与技术路线吸管虫原生动物几乎全部为固附或外栖性生活，无性生殖主要通过出芽方式进行，因此生活史中可以明确分为成体和幼体阶段。成体时体表纤毛完全退化，无胞口；幼体游泳体可自由游泳，全身或部分被有纤毛，无柄和吸管。其自身形态学特征决定研究方法相对复杂，如对成体主要进行活体观察，而游泳体需银染方能得到其纤毛图式等结构。1标本采集11采
6、集工具准备准备500和1000ML广口瓶各一，用于盛放载玻片的染色缸数量视采集点设置而定，装PFU海绵块约7X7X7CM的密闭塑料袋或具盖水桶等，同时还应准备若干个由培养皿改制成的潮湿房以备用分离培养用。12采集地点的选择在过分清洁或污染各类生活污染或工业污染极端严重的水体内或含大量硫化氢并有恶臭等强烈气味的场所，通常除特有种外，一般不易采到大量丰富的标本。水体较清,但底层有较多的有机质腐积层枯枝败叶或水中植物等通常是良好的纤毛虫栖息场所。背阳、潮湿而又富含植物根叶的表层土应视作理想的土样采集点而不应选择主要为砂砾结构、过分干硬而又缺少植物根叶等有机质的土壤。水色浓重，而这种颜色是由于自养性鞭
7、毛虫藻造成的，通常不易采获丰富的纤毛虫标本。个体丰度及种类数通常近岸海淡水处多于离岸的水体。13标本采集选定采集地点进行标本采集，采集的同时均应认真记录下采集的时间、地点及主要生境条件水温、盐度、环境特征等。2分离与培养在解剖镜下进行，根据虫体的大小而选用不同口径的微吸管将所需虫体挑选至已备好的培养皿或多孔凹玻片内。一经分离后即刻对分离标本进行编号，以备查收。3活体观察方法活体观察方法主要用以获取吸管虫细胞大小、外形、触手数目、柄长、外鞘形状、伸缩泡、食物泡、内质颗粒及射出体等分类学特征。观察所用光学显微镜以微分干涉显微镜为最好，如以相差显微镜，推荐正低相差为佳PLPOSITIVELOW，若仅
8、有明视野观察则可通过改变数值光栏以详细观察表膜结构。在记录用纸上对所观察标本予以编号（如199912501）（同时尽可能给出一日后可辨别的名称）采集人，地点，日期，生境特征（盐度、水温、PH等）。4蛋白银法蛋白银染色技术对大部分纤毛虫的染色效果极佳，但对于咽膜类、肾形类及篮环目等类群则常常不够理想。其主要用以显示虫体的皮层及内部结构，如纤毛下器、毛基体、核器及各种表膜下纤维系统等，而银线系统则不被染色。WILBERT之蛋白银法的具体步骤1虫体于胚胎皿中用BOUIN液或饱和升汞HGCL2固定510MIN；2蒸馏水洗34次BOUIN液以水洗至无色为准；3以最细微吸管小心将虫体“吹”至胚胎皿中心；4
9、用0102的次氯酸钠NACLO或次氯酸钾（KCLO）微量直接供至虫体处以漂白至“透明”约12MIN用HGCL2固定时，标本往往漂白效果略差；5蒸馏水洗两次以清洗完全为度；6将胚胎皿中蛋白银浓度控制在约05，加盖后于5060的恒温箱底板上保持3050MIN视不同种类的嗜染状况及虫体大小而调整时间；7室温下用0102的显影液显影15MIN或更短；8镜检后用5的硫代硫酸钠NA2S2O3定影约5MIN；9蒸馏水洗一次此时应清洁虫体，将虫体转入载玻片上并与等量的蛋白胶混匀，用眉毛笔调体位在必要时,如需腹面朝上等，除去余液，至温箱烘片约10MIN；10常规脱水封片70酒精起809095100100无水酒精
10、和二甲苯混合液11二甲苯二甲苯,以上过程每步约25MIN，其中在无水酒精中每步应不少于5MIN，以确保彻底脱水。采样点周丛类群PFU法、载玻片框法样品采集纤毛虫分离、富集样品室内处理观察生活史培养成体、游泳体形态学活体观察游泳体的纤毛图式蛋白银染色生物学描述数据总体技术路线示意图四、研究的总体安排与进度2010年11月2010年12月1实验前准备工作查找资料，对实验内容做初步了解2取样工具、实验仪器和药品的准备3学习银染方法4完成开题报告、任务书及文献综述的撰写2011年1月2011年2月1实验2翻译英文文献2011年2月2011年3月1实验2数据整理3撰写初稿2011年4月2011年5月1初
11、稿经指导老师指正后进行修改和完善2毕业论文定稿，准备答辩五、主要参考文献1宋微波,徐奎栋,施心路,等原生动物学专论M青岛青岛海洋大学出版社,1999125,211268,3253622宋微波,赵元莙,徐奎栋,等海水养殖中的危害性原生动物M北京科学出版社,200312623宋微波,沃伦,胡钟晓,等中国黄渤海的自由生纤毛虫M北京科学出版社,20091351694XUK,CHENJK,YANGEJ,ETA1BIOMONITOFINGOFCOASTALPOLLUTIONSTATUSUSINGPROTOZOANCOMMUNITIESWITHAMODIFIEDPFUMETHODJMARINEPOLLUTI
12、ONBULLETIN,2002,448778865宋微波,徐奎栋纤毛虫原生动物形态学研究的常用方法J海洋科学,1994,6696陈相瑞,宋微波,胡晓钟青岛沿海吸管虫原生动物,纤毛门一新属、新种及九新纪录种记述J动物分类学报,2005,3034935007李琦路,宁应之土壤生态环境中纤毛虫的研究与应用J西北师范大学学报自然科学版,2008,44382878龚骏,宋微波青岛沿海的管口类纤毛虫（原生动物,纤毛门,管口目）J动物分类学报,2009,49499539吴利,冯伟松,陈相瑞,等五种淡水吸管虫原生动物中国新纪录种的描述J动物分类学报,2006,31231131610李继秋,林晓凤,许恒龙,宋微波海水养殖水体周丛纤毛虫的群落结构及其对环境因子的响应J水生生物学报,2008,32449350011GONGJ,SONGWBANDWARRENAPERIPHYTICCILIATECOLONIZATIONANNUALCYCLEANDRESPONSESTOENVIRONMENTALCONDITIONSJAQUATMICROBECO1,2005,39159170
