1、毕业论文开题报告生物技术三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素浓度的变化一、选题的背景与意义三疣梭子蟹（PORTUNUSTRITUBERCULATUS），隶属于甲壳纲、十足目、梭子蟹科，是中国沿海的重要经济蟹类。其生长迅速，养殖利润丰厚，肉多，脂膏肥满，味鲜美，营养丰富。每百克蟹内含蛋白质14克、脂肪26克。鲜食以蒸食为主，还可盐渍加工“枪蟹”、蟹酱，蟹卵经漂洗晒干即成为“蟹籽”，均是海味品中之上品，已经成为中国沿海地区重要的养殖品种。梭子蟹一般在35米深海底生活及繁殖，冬天移居到1030米的深海，喜在泥沙底部穴居。目前国内也有人对甲壳动物中有关蜕皮激素做了研究，如叶海辉等采用组织切片和电镜技术，对锯缘
2、青蟹大颚器、Y器的形态结构进行了观察，以及赵维信、陆剑峰对中华绒螯蟹ERIOCHEIRSINENSISY器官在蜕皮周期中的超微结构，进而指出其对蜕皮过程的影响。国内很少有人研究三疣梭子蟹（PORTUNUSTRITUBERCULATUS）的蜕皮周期，作为中国沿海重要的经济蟹类，刚蜕完壳的软壳蟹的体积比蜕壳前增加了3040,其壳通过环境中的钙盐等不断硬化而恢复正常硬度，三疣梭子蟹的个体增长在外表上并不连续，而是呈阶梯形，每蜕一次皮，上一个台阶。由此可见，三疣梭子蟹的生长发育与蜕皮息息相关，促进蜕皮的发生，可促进其发育成熟，提高产量。了解蜕皮发生的时间，周期的长短对促进沿海三疣梭子蟹养殖业的发展非常
3、重要。Y器又称为蜕皮腺，与昆虫的前胸腺为同功器官。1953年GABE首次描述了58种软甲亚纲MALACOSTRACA种类的Y器，而切甲亚纲ENTOMOSTRACA种类没有Y器1。Y器分泌的蜕皮类固醇不具生物活性，只有进入血淋巴，在外周组织20羟化酶的催化作用下才转化成具有生物活性的20羟蜕皮酮。研究表明，20羟蜕皮酮不仅参与甲壳动物的蜕皮活动和胚胎发育，而且参与了卵巢发育过程2。如日本沼虾MACROBRACHIUMNIPPONENSE、中华绒螯蟹ERIOCHEIRSINENSIS、中国对虾PENAEUSCHINENSIS血淋巴中20羟蜕皮酮的周期性变化均与卵巢发育相关联36。利用高效液相色谱电
4、喷雾串联质谱（LCMS/MS）法完成三疣梭子蟹蜕皮过程中血淋巴蜕皮激素浓度变化的测定，对所得数据进行统计学分析，为海洋甲壳动物蜕皮等生长发育过程的生理学研究提供参考。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内容1、利用高效液相色谱电喷雾串联质谱（LCMS/MS）法完成三疣梭子蟹蜕皮过程中血淋巴蜕皮激素浓度变化的测定。2、对所得数据进行统计学分析。拟解决的问题三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素浓度的变化。三、研究的方法与技术路线研究方法1、实验材料三疣梭子蟹在宁波宁海长街得水育苗场购得，雌雄各半。体宽在911CM之间，体重在4565G之间，实验样本均为未经过生殖蜕皮的三疣梭子蟹。2、参照传统甲壳
5、动物蜕皮阶段的划分，结合三疣梭子蟹类本身所独有的特点，以游泳足末节新旧表皮间距/旧表皮厚度的比值为主要依据，1）血淋巴蜕皮激素的提取从蟹的游泳足基部抽取300L血淋巴，加入含有1200L乙腈和20L100NG/ML内标的15ML离心管内，轻微涡旋震荡，8500R/MIN高速离心15MIN。而后吸取上清液1ML（勿将底部蛋白吸入）于灭菌15ML离心管中，做好标记。冰箱下层20保存一周以内。2）血淋巴蜕皮激素浓度的变化的测量将上清液旋转蒸发，用02ML纯甲醇复溶，进行液质分析。根据样品中20羟基蜕皮酮（20E）特征离子响应强度与内标物高油菜素内酯的特征离子响应强度比值，用加入内标的工作曲线法求得样
6、品中20羟基蜕皮酮的含量。3）绘制统计图表进行分析。技术路线四、研究的总体安排与进度201010毕业论文选题；201010201011进行文献查阅和资料收集；201011201012完成任务书、开题报告、综述，进行开题答辩；2011120112完成两篇外文文献的翻译；2011220114进行论文实验，然后再把实验的数据整理，完成毕业论文20115进行毕业答辩五、主要参考文献高速离心于15ML离心管漩涡震荡内吸取上清液1ML冰箱下层20保存将上清液旋转蒸发02ML纯甲醇复溶加入内标的工作曲线法求得样品中20羟基蜕皮酮的含量8500R/MIN，15MIN于灭菌15ML离心管中血淋巴的提取不超过1周
7、时间液质分析20羟基蜕皮酮（20E）特征离子响应强度/内标物高油菜素内酯的特征离子响应强度绘制统计图表进行分析整理数据、表格，撰写论文1LACHAISEF，LEROUXA，HUBERTM，ETA1THEMOLTINGGLANDOFCRUSTACEANSLOCALIZATION，ACTIVITYANDENDOCRINECONTROLAREVIEWJJCRUSTBIO1，1993，131982342SUBRAMONIAMTCRUSTACEANECDYSTERIODSINREPRODUCTIONANDEMBRYOGENESISJCOMPBIOEHEMPHYSIO1，2000，125C1351563O
8、KUMURAT，HANCH，SUZUKIY，ETA1CHANGESINHEMOLYMPHVITELLOGENINANDECDYSTEROIDLEVELSDURINGTHEREPRODUCTIVEANDNONREPRODUCTIVEMOLTCYCLESINTHEFRESHWATERPRAWN，MACROBRACHIUMNIPPONENSEJZOO1SEI，1992，937454罗荣生，王幽兰，曹梅讯等中华绒螯蟹血淋巴20羟蜕皮酮诱发蜕皮和卵巢发育的作用J动物学报，1990，3621571645姜仁良，谭玉钧，吴嘉敏等中华绒螫蟹血淋巴中2O羟蜕皮酮17雌二醇和皋酮含量的变化J水产学报，1992，1
9、6210L1066赵维信，王义强，欧阳奋春中国对虾体内2O羟基蜕皮酮含量与生长和性腺发育关系J台湾海峡，1992，LL43053097叶海辉,李少菁,黄辉洋等锯缘青蟹器结构与卵巢发育的研究J厦门大学学报,2002,4167917958赵维信，陆剑峰中华绒螯蟹Y器官在蜕皮周期中的超微结构J中国水产科学，2004，11174769朱小明，李少菁甲壳动物幼体蜕皮的调控J水产学报，2001，25437938410赵红霞甲壳动物蜕皮调控研究及蜕壳素的使用J广东饲料，2006，151323511姚俊杰，赵云龙甲壳动物蜕皮的调节机制研究进展J水利渔业，2006，266810，10812亓一舟，朱冬发，杨济芬
10、等甲壳动物蜕皮抑制激素调控机制的研究进展J动物学杂志，2010，45216517013秦昆，康现江，郭明申等三疣梭子蟹Y器、大颚器显微及超微结构研究J台湾海峡，2007，261768414叶海辉,李少菁,黄辉洋,等锯缘青蟹大颚器的显微和超微结构J海洋学报,2005,27112012415刘智俊，吴旭干，成永旭等三疣梭子蟹卵巢发育期间Y器官组织学变化J上海海洋大学学报，2010，（3）31432016薛俊增，堵南山，赖伟等中国三疣梭子蟹PORTUNUSTRITUBERCULATUSMIERS的研究东海海洋，1997，154606517杜育哲，顾景龄中华绒螯蟹大颚器官超微结构的研究J南开大学学报，
11、2000，3321071L018上官步敏，李少菁锯缘青蟹窦腺显微和超微结构研究J动物学报，1995，41434134619上官步敏，李少菁锯缘青蟹X器官神经分泌细胞的细胞学研究J海洋学报，1994，16611612120蔡生力甲壳动物内分泌学研究与展望J水产学报，1998，22215416121阎斌伦，梁利国，张晓君三疣梭子蟹主要病害研究进展J水产科技情报，2010，12933,3722王建平，余晓巍，周志强等宁波市三疣梭子蟹主要病害流行特征及应对措施J河北渔业，20089495323赵鹏，徐继林，亓一舟等高效液相色谱三重四级杆质谱分析海洋甲壳动物淋巴和肌肉中的20羟基蜕皮酮J分析化学研究报告
12、，2011，39（1）576124LIMAYAVARAMBAN,DDHAYAPARAN,HALAGOWDERDEVARAJMOLECULARMECHANISMOFMOLTINHIBITINGHORMONEMIHINDUCEDSUPPRESSIONOFECDYSTEROIDOGENESISINTHEYORGANOFMUDCRABSCYLLASERRATAFEBSLETTERS581,2007,5167517225CORNELIABUCHHOLZ,DIETERADELUNGTHEULTRASTRUCTURALBASISOFSTERIODPRODUCTIONINTHEYORGENANDTHEMAND
13、DIBULARORGANOFTHECRABSHEMIGRAPSUSNUDUSDANAANDCARCINUSMAENASLCELLTISSUERES1980,206,839426JUNYINGZHENG,TERUAKINAKATSUJI,ROBERTDROER,RDOUGLASWATSONSTUDIESOFARECEPTORGUANYLYLCYCLASECLONEDFROMYORGANSOFTHEBLUECRABCALLINECTESSAPIDUS,ANDITSPOSSIBLEFUNCTIONALLINKTOECDYSTEROIDOGENESISGENERALANDCOMPARATIVEENDOCRINOLOGY155,2008,780788
