1、毕业论文开题报告生物技术甬江中下游两种自由生纤毛虫形态学研究一、选题的背景与意义甬江水系为浙江省八大水系之一，发源于奉化、新昌和嵊州交界的乌山。上游称剡江，中游称奉化江，在宁波市区以下始称甬江，在镇海口外游山注入东海,是宁波的母亲河，干流总长106KM，流域面积5400KM2。原生动物在动物界中属于最原始、最低等的单细胞动物，它们身体通常较微小，一般长度在100300UM之间。原生动物的种类繁多，如今记载的种类已逾65000种，其中至少有半数为现存种。原生动物结构简单，生命周期短，对污染反应迅速，水体环境的突然变化能及时从原生动物群落的变化上反映出来。原生动物除了可以在自然水域中广泛分布外，还
2、可以在处理废水和污水时建立起来的人工体系中栖居。在污水处理的人工体系中，原生动物的种类及数量与生物处理的效果有着密切的关系，因此，原生动物又可以用来作为污水处理的指示生物。原生动物与细菌之间存在相互依存的功能关系，直接观察原生动物的种类组成和生长，不仅能反映出细菌的生长情况，也能间接地监测出水质，起着指示的作用。利用化学综合污染指数这一普遍接受的水质化学评价方法，将原生动物对污染的反映属性直接建立在化学参数的基础之上，从而更客观地反映出水质的状况。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内容；1、定期对甬江中下游水体中的纤毛虫进行采集；2、光学显微镜观察目标生物的活体形态；3、对纤毛虫原
3、生动物的活体形态与染色后得到的结构进行种类确定；4、了解纤毛虫对甬江水体的影响；拟解决的主要问题1、纤毛虫的分离与培养；2、蛋白银法染色技术；三、研究的方法与技术路线研究方法1、采集工具准备准备500和1000ML广口瓶各一,用于盛放载玻片的染色缸数量视采集点设置而定,装PFU海绵块约7X7X7CM的密闭塑料袋或具盖水桶等,拖浮网，同时还应准备若干个由培养皿改制成的潮湿房以备用分离培养用。2、标本采集在浅的水体如水塘、河沟、浅滩或潮间带的积水处,可先用木杆将水搅动,至底层沉积物泛起后以大广口瓶采水,并应捞取若干地点之植物茎叶或漂浮物枯叶、败絮等。3、分离与培养分离根据虫体的大小而选用不同口径的
4、微吸管将所需虫体挑选至已备好的培养皿或多孔凹玻片内对于虫体数量不多时推荐后者。当用多孔凹玻片分离虫体时,为防止干涸，分离后的玻片即应置于潮湿房内。可视情况选择不同的培养方式如不能立刻分离时,则建议加培养水或清洁水至样品内至少等量以稀释并暂于低于原水环境510的培养箱内保存但此步不应超过24小时。对土壤样本则可取土样数克入1012CM之培养皿内,加入培养水,24小时后解剖镜下观察,或将水以纱布滤出后观察,并挑取虫体进行分离。一经分离后即刻应对分离标本进行编号，以备查。培养根据培养虫体的单一程度可至少将培养类型分为三种,即粗培养,纯培养和克隆培养,使用者可根据所需选取其适用的方式。一般说来，对于做
5、分类区系或生态学研究中的种类鉴定时,可优先考虑选用前两者，而从事分子生物学、细胞发生、种下关系的研究或存疑种的鉴定时则可主要采用后两种方法。1、活体观察用毛细吸管吸一小滴虫体液量尽可能少以将盖玻片压至极限而水不至于自四边溢出为度于载玻片上,加盖玻片四周涂以少许凡士林以避免直接压在虫体上；观察与标本原始数据的记录（采集地、日期、编号），在低倍镜下测量应至少选取大、中、小三个不同个体以得到虫体变幅的信息,观察并记录虫体的大小、外形尤其应注意个体间的外形差异,同一个体之外形变化以及同一虫体之具体不同部位的变化特征、运动特征主要包括虫体运动特征，纤毛器的运动特征，游泳的体位变化中倍镜下观察轻压盖玻片以
6、减缓虫体运动纤毛及纤毛器长度,分布和排列特征等,伸缩泡位置/数目以及形成过程，排空间歇时间，有无收集管等、内质情况有无特殊的油球、空泡、结晶体、食物泡数目/分布特征等、色素体的有无及体色。油镜下观察轻压盖玻片至虫体无法运动为止,此时应特别注意细胞的表膜结构、纤毛特征、射出体的有无/分布/形态、伸缩泡的形成及变化过程、食物泡和内质/表膜下颗粒分布特点等分类学特征。观察所用光学显微镜以微分干涉显微镜为最好,如以相差显微镜,推荐正低相差为佳PLPOSITIVELOW,若仅有明视野观察则可通过改变数值光栏以详细观察表膜结构。2、记录在记录用纸上对所观察标本予以编号（如199912501）（同时尽可能给
7、出一日后可辨别的名称）采集人，地点，日期，生境特征（盐度、水温、PH等）体长体宽技术路线采样点现场测定部分理化因子水温、盐度、PH、溶解氧浮游类群浮游生物网、水样采集器周丛类群PFU法、载玻片框法底栖类群挖取地质、沙子，捞取沉积物原位水样水样瓶密封样品采集样品室内处理理化因子测定氨氮、硝氮、磷酸盐、BOD纤毛虫分离、富集记录种类构成，优势种丰度/生物量形态学观测活体观察、显微图像记录、形态学记录染色制片各种银染法获得纤毛图式、银线系等结构SPSS、PRIMER数据分析特征分析、数据统计处理种类鉴定绘图、数据处理信息整理四、研究的总体安排与进度2010年10月2010年12月1实验前的准备工作查
8、找资料，对实验内容做初步的了解；2实验仪器和药品的准备；3取样；4完成开题报告及任务书。2011年11月2011年2月撰写文献综述及翻译英文文献2011年2月2010年3月撰写初稿。2010年4月2010年5月1初稿经指导老师指正后进行修改和完善；2毕业论文定稿，准备答辩。五、主要参考文献1张毅强近代兽医原生动物学的分类概况J广西畜牧兽医2005,21288912齐桂兰,刘桂杰常见原生动物纤毛虫的采集、分离与培养J生物学教学,2008,33738393陈琳纤毛虫的生物学基础与危害鱼类的常见种属J福建畜牧兽医,1999,245514PIERCERW,TURNERJTECOLOGYOFPLANKT
9、ONICCILIATESINMARINEFOODWEBSJREVAQUATSCI,1992,61391815张毅强近代兽医原生动物学的分类概况J广西畜牧兽医,2005,21288916刘磊简析活性污泥中微生物群体的特征及作用J环境科学与技术,2009,326C5615627科海所海洋原生动物J齐鲁渔业,2007,248608CAMPBELLL,LANDRYLRRESPONSEOFMICROBIALCOMMUNITYSTRUCTURETOENVIRONMENTALFORCINGINTHEARABIANSEAJDEEPSEARESEARCH1998,452230123259李江平,李雯指示生物及其
10、在环境保护中的应用J云南环境科学,2001,201515410范晓鹏,沈韫芬环境因素对原生动物群落特征的影响J应用与环境生物学报,2001,7655444711黄彬,张明凤,陈寅山,许友勤原生动物生物指数在福州市内河水质评价中的运用J福建环境,2003,204293112刘松岩,吴坤杰,田海军原生动物在水体生物监测中的应用研究J信阳农业高等专科学校学报,2007,17311211313王娅宁,施心路,刘桂杰等纤毛原生动物研究的经济意义J生物学杂志,2009,266727514周可新,许木启,曹宏等土壤原生动物在环境监测中的应用J动物学杂志,2003,381808315MARTINGONZALE
11、ZA,BORNIQUELS,DIAZSULTRASTRUCTURALALTERATIONSINCILIATEDPROTOZOAUNDERHEAVYMETALEXPOSUREJCELLBIOLINT,2005,29211912616沈韫芬,冯伟松,顾曼如河流的污染监测M北京中国建筑工业出版社,199517崔木子,施心路,刘桂杰等原生动物的水质监测及净化作用研究综述J吉首大学学报自然科学版,2008,281909318邢宏,邢光印,张杨水中原生动物对细茵的影响J中国给水排水,2006,2210419林利明,朱延彬,谭石慈利用原生动物的趋化性进行水质生物检测的方法研究J华南师范大学学报自然科学版,1
12、994,4424620许木启,翟家骥,邵永怡利用PFU原生动物群落多样性快速监测北京通惠河水质J动物学杂志,1998,3341721李风超,沈韫芬,刘存歧应用原生动物群落评价枯水期白洋淀的水质现状J生态学杂志,2005,24778578922CAIRNSJJBIDWELLJRTOUCITYTESTINGWITHCOMMUNITIESMICROCOSMSMESOCOSMSANDWHOLESUSTEMMANIPULATIONSJREVENVIRONCONTAMTOXICAL1996,147456923陈声贵，许木启,杨向平等原生动物在活性污泥中的作用J生态学杂志,2002,213475124LIN
13、XIAOFENG,SONGWEIBOREDESCRIPTIONOFTHEMARINECILIATE,CERTESIAQUADRINUCLEATAPROTOZOACILIOPHORAFROMQINGDAO,CHINAJJMARBIOLASSUK,2004,84,1625SONGWEIBO,CHENSHAO,YIZHENZHEN,LILIQIONG,ETALTHEMORPHOLOGY,MORPHOGENESISANDSSRRNAGENESEQUENCEOFANEWMARINECILIATE,DIOPHRYSAPOLIGOTHRIXSPECNOVCILIOPHORAEUPLOTIDAJSCIENCEDIRECT,2009,45,385026刘春龙,李忠秋,孙海霞纤毛虫对反刍动物瘤胃内环境指标、营养物质代谢的影响的研究J家畜生态,2004,2535760
