1、毕业论文开题报告食品质量与安全葡萄酒中木塞污染物检测方法研究一、选题的背景与意义葡萄酒是以葡萄为生产原料，经过酵母发酵、陈酿而成的低浓度饮料酒。由于生产所用原料及工艺的不同，从而使得葡萄酒品种繁多、琳琅满目；又由于其独特的工艺，使得葡萄酒之中的大部分营养素相互融合、调和，从而构成了葡萄酒独特的风味及较高的营养价值。葡萄酒中富含糖分，酒石酸，苹果酸，花色素，单宁，矿物质，酯类，不仅具有人体生长发育所需要的原料物质、产能物质，而且还含有调节人体生理机能的功能性物质。葡萄酒的保健功效以及独特的风味使得葡萄酒越来越受到大众的青睐，葡萄酒产业在我国发展迅速，我国已是葡萄酒进出口和消费大国。然而葡萄酒的品
2、质对葡萄酒产业的发展具有重要影响。而木塞污染是影响葡萄酒品质的主要原因之一，所谓的木塞污染与存在的2,4,6三氯酚（TCP），2,3,4,6四氯酚（TECP），五氯酚（PCP）以及2,4,6三氯苯甲醚（TCA），2,3,4,6四氯苯甲醚（TECA），五氯苯甲醚（PCA）等物质有关。这些物质的存在以及相互之间的转化会使葡萄酒带有一股霉味，泥土味，从而影响到葡萄酒的风味和品质。研究表明，在每升干白葡萄酒和气泡酒中最低可检测到NGL的TCA，而在红葡萄酒中的含量一般认为10NGL的TCA即会影响到风味和品质。而国内只有对于TCA的相关报道，对于其它几种物质的相关检测方法尚未有报道。国外虽然对于这几种
3、物质的检测报道也相对较少，但已有的文献报道采用的是气相色谱法，气相色谱串联质谱法，所用的前处理包括液液萃取、固相萃取（SPE）、顶空固相微萃取（SPME）、搅拌棒萃取（SBSE）等。所以在各种方法整理研究基础上，提出了固相萃取气相色谱法检测其中的除了TECA之外的五种物质，同时应用顶空固相微萃取气质联用法检测进行方法的比较，并且优化两种方法的条件，得到最优的实验方案。这项研究对于我国葡萄酒木塞污染物的检测能力得提高从而进行品质上对进出口葡萄酒的把关具有重要意义，所以研究具有良好的应用前景。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容以葡萄酒中木塞污染物为主要研究对象，前处理采用固相萃取，顶空固
4、相微萃取，检测采用GCECD，气质联用法等，对葡萄酒中木塞污染物的检测方法进行研究并优化其条件。1选择氯酚的衍生方法，提高萃取效率；2选择GCECD检测，优化色谱条件,标准曲线的绘制；3固相萃取法氯酚和氯苯甲醚标准品溶液检测流程设计，优化实验条件，基于基质效应的影响，对葡萄酒样品检测的实验条件进一步优化；4顶空固相微萃取条件和质谱条件的优化；5标准曲线的绘制，回收率与精密度的测定；6检测限的测定；7实际葡萄酒样品中木塞污染物的检测分析。拟解决的问题1、氯酚衍生方法的选择2、色谱条件对于标准品检出的影响，确定最优的色谱条件3、固相萃取与GCECD检测路线的条件优化4、顶空固相微萃取条件和质谱条件
5、的优化三、研究的方法与技术路线1资料检索以葡萄酒、木塞污染物、氯酚、氯苯甲醚、气相色谱等为检索词，检索中国期刊全文数据库（19892010）、万方数据库（19892010）和维普数据库（19892010），以WINE、CHLOROPHENOL、CORK、GASCHORMATOGRAPHY等为关键词检索ELSEVIER期刊SCIENCEDIRECT19892010查找相关文献。选取了2,4,6三氯酚（TCP），2,3,4,6四氯酚（TECP），五氯酚（PCP）以及2,4,6三氯苯甲醚（TCA），五氯苯甲醚（PCA）作为研究对象,选取WATERS200MGOASISHLB小柱作为固相萃取之用，聚二
6、甲基硅氧烷萃取头为固相微萃取之用。2固相萃取与GCECD联用测定氯酚和氯苯甲醚21氯酚和氯苯甲醚的分离纯化与色谱条件的优化211研究提高氯酚萃取率的方法查阅文献选取氯酚衍生方法，初步选取乙酰化来衍生三种氯酚，拟定衍生条件常温下，加入2ML5K2CO3溶液（作为乙酰化催化剂）之后加入200L乙酸酐,振摇1MIN,静置衍生20MIN。衍生完成之后加入1ML正己烷，振摇1分钟静置分层之后吸取上层正己烷放置对应试管，再重复提取一次之后取两次的混合提取液进样，GCECD检测进行保留时间的位置确定。212GCECD色谱条件的优化气相色谱法选用的GCECD系统是安捷伦6890系列气相色谱仪配置电子捕获器。不
7、分流进样，进样体积为L，载气为氮气。色谱柱DB5。进样口温度250，检测器温度300。初步拟定色谱柱升温程序50保持MIN，15MIN1提高到150，然后以5MIN1加热到220，最后以20MIN1提高到300保持6MIN。22氯酚和氯代茴香醚标准品溶液检测实验路线优化实验条件22标准品溶液配制分别取20L，50L，100L的1PPM的氯酚和氯苯甲醚混标，做好编号之后，用超纯水（PH35,HCL调节PH）定容5ML。222HLB小柱的活化与标准品溶液过柱5ML甲醇，5ML超纯水PH35先后过柱进行活化。活化完直接添加标准品溶液进行过柱，再用3ML超纯水PH35对试管进行淋洗之后,淋洗液再次过柱
8、,最后用5ML超纯水PH35淋洗HLB小柱。抽滤10MIN。223洗脱初步拟定洗脱条件3ML甲醇，2ML正己烷依次进行洗脱。224衍生进样依照211提出的衍生方法对223得到的5ML提取液进行衍生之后，取上层正己烷进样到GCECD，色谱条件如212进行分析检测。23标准曲线的绘制与仪器精密度的测定分别取20L，50L，100L的1PPM氯酚和氯苯甲醚混标，按照预选取的衍生方法进行衍生之后取上层正己烷直接进样分析检测，绘制标准曲线，并通过进一步实验确定线性范围。用50L1PPM的氯酚和氯苯甲醚混标重复进样5次，测试仪器精密度。24优化酒样检测实验条件由于酒样与模拟的标准品溶液在实验过程中会有所差
9、异，尤其是葡萄酒中色素以及其他一些物质容易对检测产生基质效应，所以在实际酒样检测中实验条件需要进一步优化。在优化酒样检测实验条件之后，对实际葡萄酒检测过程中的回收率，相对标准偏差和检测限进行分析。3顶空固相萃取条件优化和质谱条件的优化优化萃取时间、温度、盐浓度、PH值等条件。初步选取条件如下纤维头100M的聚二甲基硅氧烷（PDMS），萃取时间为10MIN，萃取温度选择55，10ML酒样中加3G盐，PH值酒样不作改变。前处理氯酚衍生依照211。同时，对质谱条件进行优化，确定特征性离子以及在气质联用中6种木塞污染物的保留时间。然后绘制标准曲线，对方法的回收率，相对标准偏差，检测限进行测定。技术路线
10、四、研究的总体安排与进度2009年9月2010年11月1、实验前的准备工作查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2、文献整理，实验方案的确定，完成开题报告2010年10月2011年月1、开展实验；2、优化实验方案中的各条件；3、获得实验过程中的各类数据。2011年3月2011年5月1、整理和补充相关数据，整理实验结果；2、撰写论文初稿。3、论文定稿。五、主要参考文献1鲍建民葡萄酒的营养成分及保健功能J酿酒,2006,33349502张燕,冯韶辉,白忠勤,朱济义对葡萄酒质量安全的探讨J酿酒科技,2010,7193991023ALMUDENAMARTNEZURUUELA,ISAACRODR
11、GUEZ,RAFAELCELA,ETA1DEVELOPMENTOFASOLIDPHASEEXTRACTIONMETHODFORTHESIMULTANEOUSDETERMINATIONOFCHLOROANISOLESANDCHLOROPHENOLSINREDWINEUSINGGASCHROMATOGRAPHYTANDEMMASSSPECTROMETRYJANALYTICACHIMICAACTA,5492005固相萃取条件的优化SPEGCECD方法的建立GCMSMS条件的优化顶空固相微萃取条件的优化HSSPMEGCMSMS方法的建立标准曲线的绘制，精密度，回收率，RSD，检测限的测定葡萄酒中木塞污
12、染分析检测应用氯酚衍生条件的优化GCECD条件的优化取2份100ML葡萄酒酒样其中1份作加标样查阅文献资料1171234邓晓军,郭德华,李波等葡萄酒中痕量木塞污染物的顶空固相微萃取一气相色谱串联质谱法检测J分析测试学报,2008,2712L37513785SINAPRAK,ZIYAGUNATA,JOSEPHPIERREGUIRAUD,ETA1FUNGALSTRAINSISOLATEDFROMCORKSTOPPERSANDTHEFORMATIONOF2,4,6TRICHLOROANISOLEINVOLVEDINTHECORKTAINTOFWINEJFOODMICROBIOLOGY,2420072
13、712806巢猛,刘建明,陈明SPEHPLC法侧定水中2,4,6三氯酚和五氯酚J供水技术,2008,2（3）57587齐尚忠分光光度法测定水质中五氯酚的含量J山西化工,2007,27440418周延生,王晓,王兴民气相色谱法测定土壤中的五氯酚J环境监测管理与技术,2009,21345479陈砚朦,钟淑婷,甘凤娟等超高效液相色谱串联质谱分析生活饮用水中2,4滴、2,4,6三氯酚和五氯酚的方法研究J2008,18122463246610阮勇纺织品中五氯酚残留量检测方法的研究J上海纺织科技,2009,372404211MRIU,MMESTRES,OBUSTO,JGUASCHDETERMINATION
14、OFTOTALCHLOROANISOLESINDIFFERENTKINDSOFCORKSTOPPERSJ563200631031412傅得锋,徐豫青用五氟苄基溴对五氯酚进行衍生化的方法J刑事技术，2002,6151613王学东，熊珺等环境中五氯酚残留检测方法的优化研究J华中师范大学学报,2006,40454054314SINSA,VSALVAD,EANTICDEVELOPMENTOFSOLIDPHASEEXTRACTIONANDSOLIDPHASEMICROEXTRACTIONMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFCHLOROPHENOLSINCORKMACERATEANDW
15、INESAMPLESJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,10472004152015刘红,曾建勇,温贤有,陈坚文固相萃取技术及其影响因素J现代农业科技,2010,1135116高巍,武中平,徐春祥等固相萃取技术研究进展J江苏食品与发酵2006,126（3）172117刘春红固相微萃取技术及其在国内食品领域中的应用J生命科学仪器,2009,82232718胡国栋固相微萃取技术的进展及其在食品分析中应用的现状J色谱,2009,2711819高会云,何娟,刘德仓固相微萃取萃取头的研究进展J分析仪器,2007,21620张岱,王方,王伟等顶空固相微萃取气相色谱质谱联用技术比较赤霞珠干化
16、葡萄和干化葡萄酒香气成分J食品与发酵工业,2010,36216817121卫晓红,李燕,张燕,王锟固相微萃取气相色谱法测定葡萄酒及软木塞中2,4,6三氯苯甲醚TCAJ酿酒科技,2010,1904929522罗煊,李德美,于静等顶空固相微萃取气相色谱质谱法分析葡萄酒中马味物质J食品与发酵工业,2009,35712813223ALMUDENAMARTNEZURUUELA,JOSMARAGONZLEZSIZ,CONSUELOPIZARROOPTIMISATIONOFTHEDERIVATISATIONREACTIONANDSUBSEQUENTHEADSPACESOLIDPHASEMICROEXTRAC
17、TIONMETHODFORTHEDIRECTDETERMINATIONOFCHLOROPHENOLSINREDWINEJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,1048200414115124徐媛,刘文民,赵景红,关亚风固相萃取搅拌棒萃取气相色谱分析海水中的多环芳烃J分析化学,2005,33101401140425杨丽丽,王方,张岱等搅拌棒吸附萃取气质联机分析SBSEGCMS在葡萄酒香气分析中的应用J食品与发酵工业,2009,35415315726AZALACAIN,GLALONSO,CLORENZO,ETA1STIRBARSORPTIVEEXTRACTIONFORTHEANALYSISOFWINECORKTAINTJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,10332004173178
