1、毕业论文开题报告食品质量与安全重组铁蛋白的活性研究一、选题的背景与意义铁是人体生理代谢必需元素之一，也是不可缺少的营养元素。缺铁对儿童的智力、身体发育，免疫功能，消化吸收功能均有较大影响。缺铁性贫血是世界上最普遍的营养缺乏症，会损坏免疫系统，降低人的生理和心理机能，也会阻碍大脑认识能力的发育。据估计，全球约有30的人口受缺铁的痛苦。在以稻米等植物性食物为主食的发展中国家，缺铁的影响程度更大，有近半数的5岁以下儿童和超过一半的孕妇患有铁缺乏症。铁蛋白是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的铁储存蛋白，是动植物生长发育的储存铁的共同来源。当细胞内二价铁离子含量高时，铁蛋白通过它的亚铁氧化还原中心，在
2、氧气的帮助下，将其催化氧化生成无毒的三价铁储藏在它的内部，1分子铁蛋白最多可储存4500个三价铁，这个特点是铁蛋白与其它酶最大的不同之处；当细胞需要铁时，铁蛋白在还原剂的帮助下，将三价铁还原为二价铁离子从其内部释放出来，以供其它蛋白质合成利用，所以铁蛋白在细胞内具有去除二价铁离子的毒性以及调节铁代谢平衡的双重作用，同时它还参与细胞RNA代谢的调节。有研究认为该蛋白是解决动物和人类全球饮食缺铁的有效方法。纽虫是一类生活在浅海潮间带的无脊椎动物，在世界各地都有分布，它具有柔软、能伸展、无分节的身体，以及一个极具特征性的捕食器能够翻转的吻。研究表明其铁蛋白有较强的结合铁的能力，因此通过基因工程技术导
3、入铁结合蛋白基因来提高食品铁含量以改良其营养品质将具有十分重要的意义。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容1、重组铁蛋白的获取（1）IPTG诱导重组蛋白的表达，SDSPAGE检测表达的情况；（2）大量表达蛋白并检测该蛋白为可溶性还是包涵体形式存在；（3）镍柱纯化蛋白得到实验用的蛋白；2、重组铁蛋白的活性研究（1）蛋白复性使蛋白恢复天然构象；（2）重组铁蛋白对铁的吸收能力；（3）重组铁蛋白亚铁氧化酶活性研究。拟解决的主要问题1、熟悉菌株的活化和IPTG诱导表达的过程与方法；2、掌握SDSPAGE法检测表达蛋白；3、检测快速表达蛋白的存在形式可溶性还是包涵体形式，若为包涵体形式，则需复性；
4、4、铁蛋白对铁吸收能力的检测方法；5、亚铁氧化酶活性检测方法。三、研究的方法与技术路线四、总体安排与进度20101011查阅文献，了解实验总体步骤与方法；20101112完成重组铁蛋白的原核表达和蛋白检测，并大量表达蛋白；20101220101进行蛋白纯化和复性，计算得到结果；重组铁蛋白的原核表达SDSPAGE检测表达蛋白大量表达蛋白蛋白纯化（镍柱纯化）蛋白复性（使蛋白恢复天然构象）检测、计算分光光度计计测量蛋白溶液的吸光值活化菌株IPTG诱导表达2010220104重组蛋白活性研究；2010520106完成论文和答辩。五、主要参考文献1STEVEND,AUSTFERRITINASASOURC
5、EOFIRONANDPROTECTIONFROMIRONINDUCEDTOXICITIESTOXICOLOGYLETTERS,VOLUMES8283,DECEMBER1995,9419442袁小红，杨星勇，罗小英等豌豆铁蛋白的纯化及其抗血清的制备J中国生物化学与分子生物学学报，200256146183王群力，孔波，黄河清铁蛋白纳米蛋白壳结构与功能研究新进展J化学进展，2004，1645165194朱王飞，钱胜峰铁与人体健康J膳食指南，2004347495杜莉利，李太武，等可口革囊星虫PHASCOLOMAESCULENTA铁结合蛋白基因的研究J海洋与湖沼，2008，3932522556白霞，周金
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