1、毕业论文开题报告水产养殖三种致病弧菌对大黄鱼血液生理生化的影响一、选题的背景与意义大黄鱼（PSEUDOSCIAENACROCEA）隶属于石首鱼科，为我国特有的海洋鱼类，广泛分布于黄海南部至南海北部海域，现已成为我国养殖量最大的海水鱼类。但是随着大黄鱼养殖业的蓬勃发展，各种病虫害的发生也越来越频繁。近年来浙江、福建等各省网箱养殖的大黄鱼经常发生一种皮肤溃烂病。患病大黄鱼前期症状不明显；中后期主要症状为鱼体表脱鳞、溃疡，吻部充血，有的鱼吻部断裂，烂鳍、烂尾。解剖发现后可见肝脏肿大、有块状斑、略带土黄色；肾肿；肠空，无食物，有少量液体。发病流行时间主要为610月份，78月份为高峰期，发病水温在222
2、8之间，一般死亡率为3040，最高可达80以上。大黄鱼皮肤溃疡病的发生很大程度上制约了大黄鱼养殖业的健康发展，并给养殖户造成了很大的经济损失。许多学者已对网箱养殖大黄鱼溃疡病的病原菌进行了分离鉴定等研究，结果表明引起该病的病原菌主要是溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌及费氏弧菌等。鱼类作为低等脊椎动物，免疫体系虽包括非特异性免疫和特异性免疫，但抗体免疫和特异性细胞免疫远没有高等脊椎动物的复杂，特别在感染各种病原体初期，抗体尚未形成更多地是依赖于先天性的非特异免疫。目前在大黄鱼养殖生产中，细菌性疾病的主要控制方法仍然以抗生素和化学药物使用为主。这些药物虽然具有一定的预防和治疗作用，但是存在着药物残
3、留、产生细菌耐药性、破坏机体功能、破坏微生物菌群平衡等严重的负面影响。在水产品的安全问题日益引起社会关注的今天，如何进行养殖疾病的无公害防治是摆在养殖业者和相关科研人员面前一个急需解决的问题。在药物防治的替代措施中，使用免疫增强剂和疫苗是很有潜力的无公害防治方法。因此，从免疫学角度进行水产养殖病害防治研究，通过提高鱼体非特异性免疫机能从而提高其抗病能力，减少疾病的发生,已成为水产动物疾病预防与控制研究领域的热点。现阶段关于大黄鱼免疫功能的基础研究较薄弱，而非特异性免疫是鱼类抵御外来病原微生物入侵的第一道防线。因此研究感染病原菌对大黄鱼非特异性免疫功能的影响无论从理论上还是对鱼类的免疫保护均具有
4、重要意义，且为将来各类免疫增强剂的筛选以提高大黄鱼的自身免疫抗病力奠定了基础。有关大黄鱼溃疡病非特异性免疫功能的影响研究很少，仅有的报道也是针对一种病原菌的感染后分析，尚未见有关引起该病症的不同病原菌之间的毒力差异及对大黄鱼免疫功能影响的差异性比较研究。本实验通过人工感染引起大黄鱼溃疡病的多种弧菌后，测定大黄鱼多项非特异性免疫指标的变化，并进行比较研究，对丰富大黄鱼免疫防御机制的理论基础和免疫防治具有重要意义。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容1人工感染三种致病弧菌对大黄鱼的血液生理变化影响的研究（包括红、白细胞计数、白细胞分类计数及NBT阳性细胞计数）2人工感染三种致病弧菌对大黄鱼
5、的血液生化指标变化影响的研究3人工感染三种致病弧菌对大黄鱼的血淋巴细胞吞噬能力影响研究拟解决的主要问题1大黄鱼非特异性免疫机能指标的确定。2各免疫指标之间相互关系的探索。三、研究的方法与技术路线（一）研究方法以腹腔分别注射副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌和灭菌生理盐水，0D，1D，2D，4D，7D，10D，13D，16D，20D后从4组各取6尾大黄鱼，尾静脉取血后，按以下方法进行相关指标测定。1三种致病弧菌对大黄鱼的血液生理变化影响的研究（包括红、白细胞计数、白细胞分类计数及NBT阳性细胞计数）参考赵维信1992的方法进行红细胞和白细胞计数，参考王军等2001的方法进行白细胞分类计数，参考AN
6、DERSON等1992NBT阳性细胞计数。2三种致病弧菌对大黄鱼的血液生化指标变化影响的研究4静置过夜取血清在奥林巴斯OLINPASAV1000生化自动分析仪上完成各项生化指标的测定。3三种致病弧菌对大黄鱼的血淋巴细胞吞噬能力影响研究参考王军等2001的方法进行大黄鱼吞噬细胞吞噬功能的测定，分别计算吞噬百分比和吞噬指数。4数据处理每项指标取三次平行测试取平均值。采用ONEWAYANOVA分析和独立性T检验的方法进行数据分析处理。（二）技术路线四、研究的总体安排与进度2010年3月2010年6月1实验前的准备工作，文献资料查阅，开题报告和论文综述；2撰写试验计划，仪器、药品的准备和各种实验材料的
7、准备，熟悉基本的实验操作。2010年6月2011年2月1各项试验研究阶段；2翻译外文文献。2011年2月2011年4月1补充相关数据，整理试验结果；2撰写论文初稿；3论文定稿，答辩。五、主要参考文献1金珊,王国良,赵青松,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的流行病学研究J水产科学,2005,24117192林克冰,周宸,刘家富,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的病原菌J台湾海峡,1999,18303423473王军,鄢庆枇,苏永全,等免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响J海洋科学,2001,25944464肖克宇,邓时铭,向建国,等水产动物免疫与应用M北京科学出版社,20071391905鄢庆
8、枇,张俊杰,邹文政,等人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能的影响J水产学报,2007,312251256三种致病弧菌后对大黄鱼血液生理生化指标的影响人工感染副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌，设立对照组查阅文献、设计实验；大黄鱼三种致病弧菌的选定、非特异性免疫指标的选定血液生理指标研究（红细胞、白细胞、白细胞分类、NBT阳性细胞计数）血液生化指标研究血淋巴细胞吞噬能力的研究6吴志鹏,王三英三联疫苗对大黄鱼常见细菌性疾病免疫保护的实验研究J厦门大学学报自然科学版,2004,4311151187赵维信鱼类生理学M北京高等教育出版社,19922122158ANDERSONDP,MORITOMOT,GROO
9、THRNEUTROPHIL,GLASSADHERENT,NITROBLUETETRAZOLIUMASSAYGIVESEARLYINDICATIONOFIMMUNIZATIONEFFECTIVENESSINRAINBOWTROUTJVETIMMUNOLIMMUNOPATHOL,1992,304194299BENLIACK,YAVUZCANHYBLOODPARAMETERSINNILETILAPIAOREOCHROMISNILOTICUSLSPONTANEOUSLYINFECTEDWITHEDWARDSIELLATARDAJAQUACULTRES,2004,351388139010MACKINTOSHJA,VEALDA,BEATTIEAJ,ETALISOLATIONFROMANANTMYRMECIAGULOSAOFTWOINDUCIBLEOGLYCOSYLATEDPROLINERICHANTIBACTERIALPEPTIDESJJBIOLCHEM,1998,2731161396143
