1、超级延伸复合体（SEC）与Wnt信号通路在小鼠内耳干细胞再生为毛细胞过程中的作用,项目背景,内耳毛细胞损伤是导致听力损伤的重要原因之一。最理想的治疗神经性耳聋方法通过修复毛细胞和螺旋神经元突触使其再生，达到耳蜗结构和功能的修复，从而在根本上恢复听力。有研究表明，诱导干细胞转化为毛细胞是修复毛细胞损伤的一种较为可行的潜在方式。在内耳毛细胞和支持细胞中，SEC的关键组成部分AFF4,ELL3有较高水平的表达。假设SEC可以与内耳干细胞相互作用，调控内耳干细胞转化为毛细胞，从而使得已经受损的毛细胞得以再生，恢复听力功能。Wnt是一个分泌蛋白家族，它调控不同的发育过程。其信号通路对细胞的增殖、分化具有
2、调控作用。,2,耳蜗结构与功能,3,耳蜗结构图,超级延伸复合体结构和功能,4,SEC结构图,研究内容,1.通过western-blot检验耳蜗中SEC蛋白表达情况,2.通过提取内耳RNA检验耳蜗中SEC基因的表达,耳蜗中SEC基因的表达情况,耳蜗中SEC蛋白表达情况,5,研究内容,3.通过小鼠耳蜗基底膜铺片和耳蜗组织冰冻切片的免疫荧光观察小鼠耳蜗与基底膜中SEC的表达情况。4.通过细胞成球实验检验SEC与Wnt信号通路对于神经干细胞增殖分化的影响从小鼠的大脑海马区中提取出NSC细胞。将选出的NSC细胞分为5组，分别加入DMSO（control组）、低剂量Wnt激动剂、高剂量Wnt激动剂、低剂量
3、SEC抑制剂、高剂量SEC抑制剂在二氧化碳培养箱内培养细胞，一段时间后在显微镜下观察细胞成球数量已经细胞团的大小。,6,耳蜗基底膜铺片和耳蜗组织冰冻切片,aff1、aff4、ell3在基底膜表达情况,A:基底膜的毛细胞染色图（以myosin7a为染料） B:基底膜的细胞核染色图（以DAPI为染料） C:基底膜的支持细胞染色图（以SOX2为染料） D:aff4蛋白染色图 E:合成图,A,B,C,D,E,7,ell3,测量细胞成球大小,9,测量细胞成球大小方式,测量细胞成球大小,10,SEC抑制剂、Wnt激动剂作用下的细胞成球大小比较,NSC细胞成球大小,DMSO对照组成球情况,11,NSC细胞成
4、球大小,高剂量Wnt激动剂组成球情况,低剂量Wnt激动剂组成球情况,12,NSC细胞成球大小,高剂量SEC抑制剂组成球情况,低剂量SEC抑制剂组成球情况,13,NSC细胞成球数目,14,SEC抑制剂作用下细胞成球数目变化情况,结论,SEC在耳蜗中有较高量的表达提取RNAwestern耳蜗切片Wnt激动剂和SEC抑制剂可以分别促进和抑制NSC增殖成球数目成球大小,15,参考文献,1 N.G. Bauman, Ototoxic drugs exposed : the shocking truth about prescription drugs and other chemicals that c
5、an (and do) damage our ears, 2nd ed., GuidePost Publications, Stewartstown, PA, 2003.2 赵静, 张春雷, 房兴堂, 陈宏. Wnt信号通路的研究进展. 中国牛业科学, 2012,38(1): 33-37.3 E. Smith, C. Lin, A. Shilatifard, The super elongation complex (SEC) and MLL in development and disease, Genes Dev, 25 (2011) 661-672.4 尹定子, 宋海云. Wnt信号通路
6、：调控机理和生物学意义. 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology, 2011, 33(2): 103-111.5 M. Levine, Paused RNA polymerase II as a developmental checkpoint, Cell, 145 (2011) 502-511.6 郑杰夫, 任田英. 耳蜗机械学. 听力科学概论 5: 77-80.7 王恬. Wnt信号通路在小鼠内耳中的表达及对具有干/祖细胞样细胞特征的Wnt反应细胞的调控.8 翟中和, 王喜忠, 丁明孝. 细胞生物学（4版）. 北京：高等教育出版社, 2011.6: 183-185. 9 M.J. Thirman, D.A. Levitan, H. Kobayashi, M.C. Simon, J.D. Rowley, Cloning of ELL, a gene that fuses to MLL in a t(11;19)(q23;p13.1) in acute myeloid leukemia, Proc Natl Acad Sci U S A, 91 (1994) 12110-12114.,16,Q&A,17,
