1、血小板检查,检验系临检教研室 刘协红,目的要求,掌握 血小板计数的原理、方法、质量控制、参考值、方法学平价及临床意义。重点 血小板计数难点 血小板形态,一、概述,骨髓,外周血,（一）血小板的生成,造血多能干细胞,TPO调控,分化,原巨核细胞,颗粒巨细胞,产板巨细胞,血小板，platelet714天,1/3滞留于脾窦和脾髓的细胞间2/3位于循环池,（二）血小板的生理,血小板的平均寿命为714天，具有止血功能仅开始2天。衰老的血小板在单核巨噬细胞破坏，主要在脾破坏。脾池化：全身约有1/3的血小板滞留于脾窦和脾髓的细胞间，血小板在脾内的这种滞留现象即“脾池化”。,（三）血小板检测常用项目,血小板计数
2、 (PLT):手工单项或血液分析仪多项检测血小板平均体积(MPV)血小板分布宽度(PDW) 血小板比积(PCT),血液分析仪,二、血小板计数（手工法）,（一）原理,将血液稀释一定倍数，充入计数池内计数，计算出每一升血中血小板数。稀释液破坏RBC, 固定Pt并防止聚集。,（二）试剂1.草酸铵稀释液 草酸铵1.0g, EDTA-Na2 0.012g，蒸馏水加至100mL。2.许汝和稀释液（复方尿素稀释液） 尿素10g，枸橼酸钠0.5g，40%甲醛0.1mL蒸馏水加至100mL。过滤冰箱保存。,（三）器材 光学显微镜 血球计数板 Hb吸管 试管 采血针等,（四）操作,1.在小试管中加入plt稀释液0
3、.38mL;2.取末梢血20L加入试管中，迅速摇匀。室温放置10分钟;3.充池，静置1015分钟;4.高倍镜下计数中央大方格中四角及正中共5个中方格内的plt数。,（五）计算,血小板数/L=5个中方格内血小板数（N） 51020106/L =N109/L（六）结果报告 PLT: 109/L,（七）注意事项,全部用具和稀释液要特别清洁，防尘、防菌，以免计数时误认。针刺要深，吸血及稀释动作要快，防聚集。同时做多项检查时，优先采plt计数之血。充池前应充分摇匀，充池后需静置10分钟以上待plt全部下沉后再计数。1h内完成。,（八）方法学平价,草酸铵法对RBC破坏力强，使视野清晰，plt形态清楚，是全
4、国临床检验操作规程推荐方法。由于Plt体积小，易粘附、聚集及破坏等，结果不甚理想。复方尿素法优点是plt胀大易辨认，但不能完全溶解RBC，且尿素易分解，试剂保存时间短。,血液分析仪法可同时测MPV、PDW等多个指标，快速，临床适用。但不能鉴别红细胞碎片、灰尘等与plt大小相似之物，故计数误差大。当直方图出现变化时，应用显微镜计数法校准。,流式细胞仪法：用血小板单克隆抗体染色标记血小板，根据荧光强度和散射光强度，用独立的流式细胞仪检测可得到准确性极高的血小板数。流式细胞仪法式目前血小板计数参考方法。,相差显微镜法：相差显微镜下，血小板立体感增强，有助于识别血小板，还可照相后核对计数结果，作为手工
5、法血小板计数的参考方法。,（九）参考值 （100300）109/L,（十）质量保证,原则是：避免血小板被激活、破坏，避免杂物污染。 1.检测前：采血要顺畅，抗凝剂选用合适，储存时间适当； 2.检测中：手工法计数要定期检查稀释液质量，仪器法要质控合格；,3.检测后：（1）用同一份标本制备学血涂片染色精简观察血小板数量、大小、分布情况，并注意有无异常增多的红、白细胞碎片。（2）用参考方法核对。（3）同一份标本2次计数误差要10%。,（十一）临床意义,生理变化：新生儿婴儿，出生后3个月达成人水平;晨间午后，春季冬季，毛细血管7.5m。见于ITP、巨大血小板综合征、脾切除等。（2）小血小板：直径1.5
6、m，主要见于缺铁贫、再障等。,巨大血小板,2.形态异常,（1）幼稚形：颗粒少。（2）老年形:边缘不规则，颗粒粗，呈离心分布，有空泡。（3）病理幼稚形：体积大，胞质淡蓝，几乎无颗粒。,（4）病理刺激形：体积增大，形态不一，胞质呈淡蓝/紫红，颗粒多而大小一致。（5）退化形：大小、形态不一，有大空泡，无颗粒或颗粒聚集。正常人异常plt10%才有意义。,（6）血小板卫星现象：血小板粘附、围绕于中性粒细胞（或偶尔粘附于单核细胞）的现象。偶见于EDTA抗凝血血涂片中，导致血液分析仪PLT减少。（7）血小板“粘附”红细胞,3.分布异常,（1）plt单个散在，不聚集：见于血小板无力症、再障、ITP等。（2）plt过度聚集：见于原发性plt增多症，骨髓纤维化等。,
