1、输血科知识培训,XXX人民医院检验科XXX,一 复习：有关血型的简单知识与概念血型是人体血液的一种遗传性状，各种血液成分包括红细胞、白细胞、 血小板及某种血浆蛋白在个体之间均具有抗原成分的差异，受独特的 遗传基因控制。由若干个相互关联的抗原抗体组成的血型体系，称为血型系统。血型被认为是指各种血液成分的遗传多态性标记。“免疫血液学”在临床医学、人类学、遗传学、法医学、考古学等方面的应用日趋广泛， 尤其是在输血、器官移植、骨髓移植等临床实践中发挥着重要作用。,人类最重要的几个血型系统红细胞血型系统 ABO血型系统 Rh血型系统其他血型系统 白细胞抗原系统 血小板抗原及抗体 血清蛋白成分的抗原特异性
2、,血型抗原与抗体的几个特性,A或B抗原在胚胎期及出生时便能检出，但敏感性较低，到20岁左右时 才达高峰。抗原性终身不变，但到老年敏感性有所下降。ABO血型系统抗体有免疫抗体和天然抗体之分。 抗体有抗A和抗B两种。 人在出生前尚未产生抗体，出生后3-6个月才开始出现，至青春期达高 峰。产生抗体的功能可延续终身，但其效价随着年龄增长而逐渐降低。 天然抗体可能是由一种无觉察的抗原刺激而产生。 血型抗体是免疫球蛋白，免疫性抗体主要是IgG，天然抗体主要是IgM。,ABO血型分型原则,血型鉴定前的准备,一、标本的采集 1.红细胞悬液标本 门诊血型常用手指血做正定性。但现在已经不提倡了。采集EDTA-K2
3、抗凝的静脉血离心，取红细胞用生理盐水洗涤配制红细胞悬液：2红细胞悬液用于抗体效价的测定； 5 红细胞悬液用于血型鉴定、交叉配血试验， 2.血浆或血清标本,血型及配血标本的要求,护士根据送检单的要求，双人核对采集标本。采集后立即送检。输血科工作人员注意核对接收标本两个小时内要完成血型的检验。配血标本要三天内的。标本要保存七天。,ABO血型鉴定方法,血型鉴定抗原+抗体反应正向定型（direct typing）: 已知特异性抗体（标准血清） 检测红细胞上的未知抗原 反向定型（indirect typing): 已知血型的标准红细胞 检测血清中的未知抗体,ABO血型正、反向鉴定及结果判断,鉴定ABO血
4、型常用方法,1. 生理盐水凝集法 盐水介质原理：Ag+Ab AgAb,用生理盐水为介质，检测的是IgM性质抗体 玻片法试管法,正定型血型鉴定操作程序图（玻片法）,血型鉴定,试管法,1、每个被检者准备小试管1支，贴好名签，加入等渗盐水1ml。从毛细血管采血配成5%的红细胞悬液，注意血液不能凝结。2、每个被检者准备小试管3支，分别贴上A、B标签，并标上姓名，按标签分别加抗A、B抗体2滴。3、两管各加被检红细胞悬液1滴混匀。4、放在离心机内，用10003000转/分，1分钟，观察现象。,加被检红细胞悬液,加试剂抗体血清,离心,相对应的抗原抗体反应,观察结果,镜下的凝集与非凝集,反向定型,一、用途：当
5、没有合适的标准血清，或用标准血清鉴定出现可疑结果时，可用此法核对。二、标准红细胞悬液的配置：分别取已知敏感性高的标准A、B、0、三型 人的红细胞红洗涤三次，配成5%的红细胞悬液（若无标准红细胞，可用5个A型，2个B型，2个O型人红细胞，分别按型混合，代作已知标准红细胞）三、方法1、从被检者静脉，制成血清或血浆。2、试管的准备，同标准血清鉴定法3、在A管放标准A型红细胞1滴，B管放标准B型红细胞1滴，在O型管放标准o型红细胞1滴。4、各加被检血清2滴，分别混匀，离心后判断结果同前。,ABO血型正、反向鉴定及结果判断,在特殊环境，没有标准血清和标准红细胞，仅知一个A型（或B型）人时，若用血液，怎么
6、来鉴定人的血型？,问题,2.微柱凝胶技术,微柱凝胶技术是液相技术与固相技术的巧妙组合，是凝胶过滤技术、离心技术、红细胞凝集试验技术（特异性抗体抗原反应）的完美结合。通过对凝胶种类的选择和凝胶浓度的调节来控制分子筛孔径大小,使分子筛只允许游离红细胞通过,从而达到分辩凝集红细胞和非凝集红细胞的目的。微柱凝胶技术是目前最易大规模推广、最适于常规试验的最好血型血清学试验技术。,微柱凝胶技术原理,当抗原抗体反应时红细胞发生凝集（包括已致敏的红细胞通过抗人球蛋白的桥连作用发生的凝集），在一定的离心力作用下，凝集的红细胞不能通过凝胶间隙而留在凝胶分离柱上层或分散在凝胶分离柱中，此为阳性反应；而未凝集的红细胞
7、在离心力的作用下可通过凝胶间隙而沉积于凝胶分离柱的底部，此为阴性反应。,微柱凝胶种类,（一）中性胶（又称空白胶，仅含有葡聚糖凝胶）：用做检测IgM抗体与相应抗原红细胞的反应。如ABO反定型。（二）特异性胶（如加入过抗-A、抗-B、抗-D等特异性抗体的凝胶）：利用包被的抗体检测相应抗原。（三）抗球蛋白胶（包被了单特异性或多特异性抗人球蛋白试剂的凝胶）。用于检测IgG抗体与相应抗原红细胞的反应。,微柱凝胶法做ABO、Rh血型实例,红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质中发生凝集发应,ABO、Rh血型鉴定质量控制,1、技术上的失误假阴性抗体试剂与红细胞比例不对应。红细胞悬液过淡。离心速度、时间不够。忽略
8、观察溶血现象，因溶血也是阳性反应。,假阳性离心速度过大或离心时间过长。使用了受到细菌污染的抗体试剂和盐水。使用不干净的试管等。,造成假阳性或假阴性的人为原因：标本张冠李戴。未加入或使用了失效的试剂。操作者不能正确识别和解释试验结果。人为的书写错误。,2、被检人血清标本的问题婴儿及老年人，46月婴儿血清中ABO抗体很弱疾病影响引起假凝集或弱凝集。治疗措施的影响,3、被检者红细胞的问题红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱如弱A、弱B亚型和白血症或恶性肿瘤患者红细胞获得性异常，如O型或A型病人因肠道细菌感染使红细胞上获得类B抗原细菌污染,正反定型结果不一致的解决办法,首先重复试验，不符则继续做下列试验。
9、（1）重新采集献血员和受血者的新鲜血液标本（2）多次洗涤被测红细胞和标准红细胞（3）用抗A1、抗AB检测红细胞。（4）如怀疑血清中有抗A1，可用数份A2红细胞标本进行检验。（5）如果试验结果未见凝集，应将正向及反向试验至少在室温在40放置30min，用显微镜检查核实。（6）若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型不符，可进一步做木瓜酶试验、直接抗球蛋白试验、吸收放散试验等加以鉴别。,二、 Rh血型 （Rh Rhesus monkey的缩写）,2、主要类型,Rh阴性：RBC上无Rh（D）抗原,Rh阳性：RBC上有Rh（D）抗原,1、系统组成： (1)抗原：RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe 主要成
10、分为多肽链 (2)抗体：抗-D、抗-C 、抗-c 、抗-E 、抗-e 性质：IgG性质 (3)基因：RHD和RHCE基因,3、特点（1）绝大多数为IgG抗体 Rh阴性者接受Rh阳性血后通过免疫产生免疫性抗体。（2）抗体可通过胎盘 其抗原性强弱依次为D、E、C、c、e，以D抗原性最强。 我们称含D抗原的红细胞为Rh阳性，不含D抗原的为Rh阴性。我国人中Rh阴性者甚为少见。 （3）天然抗体极少。抗D抗体最常见 Rh抗体有完全抗体和不完全抗体两种。完全抗体在机体受抗原刺激初期出现，一般属IgM型，分子量大，不能通过胎盘，存留时间短。机体继续受抗原刺激，则出现不完全抗体，属IgG型，分子量小，可通过胎
11、盘，存留时间长，常在完全抗体出现后出现，引起新生儿溶血病。,4、Rh血型的鉴定仅用抗D血清进行鉴定，粗略地分为Rh阳性和阴性两类。鉴定方法 完全抗体：生理盐水凝集试验 不完全抗体：胶体介质法、木瓜酶法、抗人球蛋白法等,5、Rh血型系统的临床意义Rh血型系统所致的溶血性输血反应：第一次输血不必考虑Rh血型，第二次输血需考虑Rh血型是否相同。新生儿Rh溶血病：Rh-的母亲 若输过血，怀孕后其孕儿为Rh+者，孕妇的抗Rh的抗体，可通过胎盘导致胎儿溶血。第一次孕儿为Rh+，胎儿的RBC因某种原因(如胎盘绒毛脱落)进入母体，或分娩时进行胎盘剥离过程中血液挤入母体,孕妇体内产生抗Rh的抗体。第二次妊娠时,
12、孕妇体内的抗Rh的抗体，通过胎盘导致胎儿溶血。,6、Rh血型鉴定方法：盐水法：单克隆IgM抗D，化学结合抗D凝聚胺法：抗球蛋白法：经典法，改良法酶法：菠萝酶，木瓜酶。微柱凝胶法：,7、临床意义（1）Rh阳性和Rh阴性输血（2）RhHDN（3）中国人RH基因多态性,二、抗体筛查（卡式）,三、交叉配血试验1.交叉配血实验 分别将供血者的RBC与受血者的血清及供血者的血清与受血者的RBC进行的配合试验2.交叉配血实验的意义（1）检验血型鉴定是否有误。（2）检验血清中是否有不规则抗体。 （3） “交叉配血”是保证输血安全的关键措施。,交叉配血试验主要方法,根据性质分：（1）盐水配血试验（2）凝聚胺配血
13、试验（3）抗人球配血试验（4）特殊配血试验等（酶法、特殊介质配血等）根据方法分（1）试管法（2）卡式（3）全自动,红细胞,红细胞,血清,血清,（主侧）,（次侧）,（供血者）,（受血者）,交叉配血试验示意图,两侧均无凝集反应，可以输血。主侧有凝集反应，绝对不能输血。次侧有凝集反应，一般不宜输血。,结果判读,配血方法的选择1、生理盐水法：无输血史及妊娠史2、间接抗人球蛋白法：有反复输血史及妊娠史，尤其是有输血反应史、生育过新生儿溶血病婴儿的妇女。大量输血时须同时做供血者之间的交叉配血实验。,交叉配血的方法,均不凝集：配血相合主侧凝集：配血不合主侧不凝，次侧凝集：只在应激情况下少量缓慢，或使用洗涤RBC.,卡式交叉配血试验,4、输血原则受血者与供血者的ABO血型及RhD相同。已孕妇女和反复输血病人，须做抗体筛查。交叉配血实验,谢 谢！,
