1、Amoeba and flagella 阿米巴和鞭毛虫,. Entamoeba histolytica (E. histolytica) 溶组织内阿米巴 . Giardia lamblia (G. lamblia)兰氏贾第鞭毛虫 . Trichomonas vaginalis (T. vaginalis)阴道毛滴毛虫 . Leishmania donovani (L. donovani)杜氏利什曼原虫,Purpose and Requirements,.Master morphological features of trophozoite and cyst of Entamoeba hist
2、olytica and Giardia lamblia; Master movement characteristics of trophozoites; .Master morphological features and movement characteristics of Trichomonas vaginalis; .Familiar with differtiations of E. histolytica cyst and other non-pathogenic amoebae cyst; .Familiar with iodine stain for cyst; .Under
3、standing Balantidium coli; .Understanding morphological features of amastigote of Leishmania donovani and sandfly. .,1.独立观察玻片标本 No.原-1至No.原-4：2.示教内容学习： 1）图片及视频示教： 2）镜下示教标本： 3.完成实验操作：直接涂片法观察活动的阿米巴滋养体；直接涂片法观察活动的阴道毛滴虫；碘染色法观察包囊 4.完成实验报告：,本次课学习任务,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,拿到玻片标本后请马上检查核对是
4、否有漏、重复或破损，有问题的请马上举手报告老师！,No.原-1: 溶组织内阿米巴包囊、结肠内阿米巴包囊、微小内蜓阿米巴包囊、布氏嗜碘阿米巴包囊Cyst of E. histolytica, E. coli, E. nana, I. buetschliiNo. 原-2: 蓝氏贾第鞭毛虫滋养体 G. lamblia trophozoite (仅双号同学有，2个同学共用1张)No. 原-3: 蓝氏贾第鞭毛虫包囊 G. lamblia cystNo. 原-4: 阴道毛滴虫滋养体 T. vaginalis trophozoite,注意：在观察玻片标本前，先将显微镜光线调到最强！本次课只使用10倍镜和油镜
5、；,No. 原-4:阴道毛滴虫滋养体T. vaginalis trophozoite,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,先10倍镜下调出焦距平面，然后转油镜下观察细微结构,要求拍照,姬姆萨染色法(Giemsa staining method),No. 原-3:蓝氏贾第鞭毛虫包囊 G. lamblia cyst,Steined with iron-hematoxylin,. Cyst wall : . Axostyle : . Median body : . Nucleus :,1.Observation of glass slide No.原
6、-1至No.原-4,先10倍镜下调出焦距平面，然后转油镜下观察细微结构,要求拍照,No. 原-2:蓝氏贾第鞭毛虫滋养体 G. lamblia trophozoite,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,先10倍镜下调出焦距平面，然后转油镜下观察细微结构,要求拍照,姬姆萨染色法(Giemsa staining method),No. 原-2:蓝氏贾第鞭毛虫滋养体 G. lamblia trophozoite,Steined with iron-hematoxylin,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原
7、-4,先10倍镜下调出焦距平面，然后转油镜下观察细微结构,要求拍照,No. 原-1:溶组织内阿米巴包囊、结肠内阿米巴包囊、微小内蜓阿米巴包囊、布氏嗜碘阿米巴包囊Cyst of E. histolytica, E. coli, E. nana, I. buetschlii (铁苏木素染色),E. histolytica cyst溶组织内阿米巴包囊,要求拍照：未成熟包囊,先10倍镜下找出焦距平面，然后转油镜下观察细微结构,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,E. coli cyst 结肠内阿米巴包囊,1.Observation of glass s
8、lide No.原-1至No.原-4,No. 原-1:溶组织内阿米巴包囊、结肠内阿米巴包囊、微小内蜓阿米巴包囊、布氏嗜碘阿米巴包囊Cyst of E. histolytica, E. coli, E. nana, I. buetschlii,E. nana cyst 微小内蜒阿米巴,Very small, 6-12um, oval, only 4 nuclei,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,No. 原-1:溶组织内阿米巴包囊、结肠内阿米巴包囊、微小内蜓阿米巴包囊、布氏嗜碘阿米巴包囊Cyst of E. histolytica, E. co
9、li, E. nana, I. buetschlii,I. buetschlii cyst 布氏嗜碘阿米巴,Stained with Iron-hematoxylin,Stained with Iodine,1.Observation of glass slide No.原-1至No.原-4,No. 原-1:溶组织内阿米巴包囊、结肠内阿米巴包囊、微小内蜓阿米巴包囊、布氏嗜碘阿米巴包囊Cyst of E. histolytica, E. coli, E. nana, I. buetschlii,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Stained with Iron-hematoxylin
10、,E. histolytica trophozoite,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Amastigote (Leishman-Donovan body ) 无鞭毛体(利杜体),Amastigotes parasitize in mononuclear cell-macrophage (单核-巨噬细胞)of human,2. 示教内容学习:,Sandfly(白蛉),驼背、眼大、多毛、翅竖,1）图片及视频示教：,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Balantidium coli trophozoite 结肠小袋纤毛虫滋养体,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Ba
11、lantidium coli trophozoite 结肠小袋纤毛虫包囊,Round or near-round, diameter 40-60um,知识花絮: 染色方法,1 铁苏木素染色(Iron-hematoxylin staining method) 主要用于各种阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊的鉴定，具有操作简单，现象明显的特点，呈墨蓝色。2 碘液染色(Iodine staining method) 可以使真核细胞的细胞核呈黄褐色，所以,加碘液可以用来观察细胞核。 3 姬姆萨染色法(Giemsa staining method) 姬姆萨染液(天青色素、伊红、次甲蓝的混合液)的染色法。
12、 最适于血液涂抹标本,用以染血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色，呈祡红色。4 瑞氏染色法(Wrights staining method) 用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法。瑞氏染色液是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。5 瑞氏-姬姆萨染色法(Wright-Giemsa staining method) 主要应用于血液和骨髓涂片染色，它是利用Romanowwsky Stain技术原理改良而成的。标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，各类细胞呈现不同的着色，红细胞呈浅红色，白细胞的核着色非常明显，易于对
13、白细胞进行分类。6 苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法 简称HE染色方法，是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Iodine stain 碘液染色法,2. 示教内容学习:,1）图片及视频示教：,Iron-hematoxylin stain 铁苏木素染色法,2）镜下示教：请拿上实验指导移步到示教显微镜，观察时请勿移动视野！,.溶组织内阿米巴滋养体和包囊 E. histolytica trophozoite and cyst.结肠内阿米巴包囊 E. coli
14、 cyst .微小内蜒阿米巴包囊 E. nana cyst .布氏嗜碘阿米巴包囊 I. buetschlii cyst .蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊 G. lamblia trophozoite and cyst .阴道毛滴虫 T. vaginalis trophozoite .杜氏利什曼原虫利杜体 Amastigote (Leishman-Donovan body) .白蛉 Sandfly .结肠小袋纤毛虫滋养体 Balantidium coli trophozoite .结肠小袋纤毛虫包囊 Balantidium coli trophozoite,2. 示教内容学习:,3.Operatio
15、n and observation 操作和观察,.直接涂片法观察活动阿米巴滋养体和碘染色法观察包囊：操作前先看“碘液染色法”视频；取1张载玻片，先用吸管吸取阿米巴培养基，在载玻片左右各滴1滴，然后在其中1滴另滴加1滴碘液（如右图），加盖玻片，先10镜下观察，然后转40倍镜观察；用过的载玻片请放到指定的铝锅内！,3.Operation and observation 操作和观察,.直接涂片法观察活动的阴道毛滴虫：用吸管吸取阴道毛滴虫培养基，滴1滴玻片上，加盖玻片即可，先10镜下观察，光线稍弱，然后转40倍镜观察；用过的载玻片请放到指定的铝锅内！,3）提交实验报告方法： 双击“教师机”图标打开文件
16、夹“上传” 打开你本人所在组别对应的文件夹，如“1组”粘贴实验报告。,2）实验报告命名格式：学号姓名-4，例如 20070001张三-4,3.实验报告要求及提交：,1）本次实验报告内容: 要求 4 张图片溶组织内阿米巴未成熟包囊 E. histolyticaI mmature cyst 蓝氏贾第鞭毛虫滋养体 G. lamblia trophozoite 蓝氏贾第鞭毛虫包囊 G. lamblia cyst 阴道毛滴虫滋养体 T. vaginalis trophozoite,离开实验室前做好以下工作：,1. 清点玻片标本，按顺序摆放整齐并放到指定地方；2. 清理桌面，包括清理垃圾、将油瓶、擦镜液和
17、擦镜纸归位，摆放整齐；3. 本次课特别强调用擦镜纸沾擦镜液擦干净油镜头和高倍镜头！ 4. 整理好显微镜、电脑关机；5. 将凳子收入桌子下面；5. 值日生留下做实验室清洁工作。,1.简述溶组织内阿米巴的致病机制。 2.如何用病原学方法诊断急性阿米巴痢疾病人？检查时应注意什么？ 3.阴道毛滴虫是怎样传播的，如何进行防治？ 4.蓝氏贾第鞭毛虫滋养体引起腹泻的原因？ 5.简述黑热病的贫血机制。,课后思考：,患者，女，28岁，浙江宁波人，已婚，患者自农村来沪做保姆已有2年，自觉劳累后腰酸，白带多，有时伴黄色带有泡沫伴黏液，阴道经常瘙痒，时闻腥臭味，月经正常，但经量较大。妇科检查：外阴部有红肿，子宫颈糜烂
18、度，阴道涂片查到大量阴道毛滴虫，还有红细胞、白细胞和上皮细胞，遵医嘱服灭滴灵并外用栓剂后，症状好转，但年终探亲返回后症状又出现，再次服药后得以痊愈。,问题：1阴道毛滴虫传播的因素有哪些？ 2. 患者后来为何又有症状出现？患者应如何防治？,课后讨论 Case 1,患者，女，6岁，因“腹泻9天，发烧、腹痛及脓血便7天”入院，发病前8天有跌入粪坑史。查体：体温38，全腹有轻压痛，腹中部可触及移动的肠样肿块，入院数日后大便呈果酱色，腹痛加重，2日后出现全腹痛伴肌紧张，剖腹探查，见右下腹有一炎性肿块，盲肠坏疽,有3cm2cm的穿孔灶，阑尾已坏疽脱落。术后采用抗阿米巴治疗，因治疗无效，术后46小时死亡。尸检：腹腔右侧有散在小脓肿20余处，结肠、空肠、回肠均可见溃疡，以结肠为甚且深，在黏膜下找到阿米巴滋养体。,问题：1这小孩是如何感染溶组织内阿米巴的? 2. 典型的阿米巴痢疾患者有何症状？粪便有何特点? 3. 溶组织内阿米巴病变的部位多发生在何处？为什么会引起肠穿孔？,课后讨论 Case 2,
