1、实验室生物安全管理及备案要求,中南大学湘雅医院检验科 刘文恩,内容,生物安全介绍实验室生物安全相关术语实验室生物安全规范/标准病原微生物分类实验室生物安全防护水平生物安全柜分类及工作原理级生物安全柜级生物安全柜级生物安全柜,生物安全实验室操作技术规范生物安全实验室运行基本规范生物安全柜的使用规范实验室仪器设备的使用规范感染性材料的操作与防护规范危险化学品的使用与管理放射性核素的使用与管理其他实验室危害的控制生物安全备案要求及流程,实验室生物安全 BioSafety,转基因生物安全,生物多样性,食品安全,生物恐怖,生物安全,实验室生物安全,致病性感染微生物的检测、研究（正确使用）防止危害公共卫生
2、,实验室生物安全公共卫生事件回顾,1967年德国马尔堡病毒实验室感染事件2001年10月美国发生炭疽恐怖事件，造成人员伤亡和世界范围的社会恐慌2003年9月新加坡国立大学研究生在环境卫生研究院实验室中感染SARS病毒。2003年12月一名台湾的SARS研究人员在实验室感染SARS病毒。2004年4月安徽、北京先后发现新的SARS 病例，经证实分别来自于在中国疾病预防控制所实验室受到SARS感染的两名工作人员。,教训：,加强实验室生物安全建设，防止无意或故意造成的公共卫生危害事件,实验室生物安全规范/标准（国际）,世界卫生组织出版，2003美国CDC资助,世界卫生组织出版，1997,美国CDC出
3、版，1999,实验室生物安全规范/标准（国内）,实验室生物安全通用要求 (GB19489-2004)国家标准微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 (WS- 233-2002)卫生行业标准病原微生物实验室生物安全管理条例2005国务院 动物病原微生物分类名录 2005 农业部高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法2005 农业部高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范2005,实验室生物安全规范/标准（国内）,人间传染的高致病性病原微生物实验室和实验活动生物安全审批管理办法 2006 卫生部 人间传染的高致病性病原微生物名录2006卫生部 可感染人类的高致病性病原微生物菌
4、（毒）种或样本运输管理规定（卫生部第45号令）2005卫生部医疗机构临床实验室管理办法 卫生部湖南省病原微生物实验室和实验活动生物安全审批管理办法 2006湖南省卫生厅,实验室生物安全相关术语,悬浮于气体介质中粒径一般为0.001m-1000m的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态分散体系。,气溶胶 Aerosols,一切微生物和生物活性物质，包括病毒、支原体、衣原体、细菌、真菌、寄生虫、基因重组活性物质等。,生物因子,可使人、动物或植物致病的生物因子。,病原体,由病原体造成的伤害发生概率及其严重性的综合因素,生物危害biohazard,对实验微生物和毒素可能给人或环境带来的危害所进行的评估,微生
5、物危险度评估,实验室人员处理致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、个体防护设备，严格遵守标准化的工作及操作程序和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染。,生物安全防护,根据微生物危险度评估结果，综合考虑微生物危险度等级、实验操作和实验室安全防护设施等因素确定的防护水平。,生物安全防护水平BSL,避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施,实验室生物安全,实验室生物安全相关术语,实验室生物安全相关术语,处理危险性微生物时，可同时保护工作人员、实验室环境以及实验品，避免因操作过程中可能产生的致病气溶胶和溅出物感染的箱形
6、空气净化安全装置。,生物安全柜,通过微生物危险度评估，达到安全防护的实验室。,生物安全实验室,一种一次性的，具有延伸/皱褶介质的高燥型过滤器，对于0.3m微粒的过滤效率不低于99.99%，且对大于或小于0.3m微粒过滤效率更高。,高效过滤器,病原微生物的分类： 几个标准的分类比较,危险度等级,实验室生物安全手册（第三版）实验室生物安全通用要求(GB 194892004 )病原微生物实验室生物安全管理条例,实验室生物安全病原微生物的分类,注：病原微生物实验室生物安全管理条例,病原微生物的分类,危险度,根据:动物病原微生物分类名录和人间传染的高致病性病原微生物名录,实验室生物安全 BioSafet
7、y,管理规范操作规程,建筑构造实验室设计,个人防护设施,生物安全柜等设备,微生物危险度评估(1-4级),实验室生物安全防护水平(BSL1-4),微生物种类,感染数量,离心,气溶胶化,基因技术,标本浓度,环境稳定性,感染途径,宿主,有效治疗,临床报告,实验室感染,生物安全实验室,基础实验室：一级生物安全水平 (BSL1),实验室实例：基础教学实验室微生物实例：枯草杆菌、大肠埃希氏杆菌K12无须特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。安全设施：开放实验台，无需安全设施，但应由适当的消毒设备。每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实
8、验室工作服分开设置。实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。实验室中的橱柜和实验台应牢固。橱柜、实验台彼此之间应保持一定距离，以便于清洁。实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。,P1,生物安全实验室,基础实验室：二级生物安全水平 (BSL2),实验室实例：初级卫生服务；诊断、研究。诊断和卫生保健实验室（以公共卫生、临床或医院为基础的）必须设计成二级或以上生物安全水平。微生物实例：伤寒沙门氏菌、乙型肝炎病毒、结核分支杆菌、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒开放实验台，有
9、洗手池（靠近出口）在生物安全柜中进行可能发生气溶胶额操作程序。配有高压蒸汽灭菌设备必要时配备个人防护的机械密闭设备门可保持关闭并贴上适当的危险标志有可靠稳定的应急供电系统,P2,生物安全实验室,防护实验室：三级生物安全水平 (BSL3),专门特殊的诊断、研究实验室，密闭型微生物实例：布鲁氏菌属、拉沙热病毒、荚膜组织胞浆菌选址：应在建筑物中自成隔离区（如出入控制）或为独立建筑物 在BSL2基础上增加特殊防护服、准入制、定向气流。配备II级或III级生物安全柜，形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜内进行生物安全柜放置在远离离污染区入口和频繁走动的位置应有非手控的水槽实验室与公共通
10、道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，实验室内先行高压灭菌以清除污染。,P3,生物安全实验室,最高防护实验室：四级生物安全水平 (BSL4),危险病原体单位，高度密闭型病原体实例：埃波拉病毒、口蹄疫病毒、SARS病毒选址：实验室应建造在独立建筑物内或建筑物中独立 的完全隔离区域内，该建筑物应远离城区。配备II级或III级生物安全柜，正压服形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜内进行处理废弃物前，实验室内先行高压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽,P4,实验室生物安全防护水平及实验室分类,BSC: 生物安全柜；GMT: 微生物操作规
11、范,生物安全柜 (BioSafety Cabinet, BSC),生物安全,柜,实验室最基本的安全防护设备：,生物安全柜(BSC) 发展史,1940S-50S,1960S,实验室人员安全威胁推动生物安全柜的发展和改进，I-BSC 保护操作者、环境,生化技术和无菌技术的应用，促使样品保护的生物安全柜产生。,1970S,2000-2002-2005-2007,创新节能型生物安全柜,I-BSC,II-A,HEPA,HEPA+层流技术,II-B,III-BSC,HEPA过滤效率更高,NSF49首次描述三种用于操作病原微生物的BSC,2002年，NSF49获美国标准化委员会认可,细胞培养和微生物体系致癌
12、物研究，推动B型BSC发展,EN12469:2000,中国生物安全柜标准YY0569:2005,风速显示表,生物安全柜分类及工作原理,气体流速排风系统构造,欧洲标准,美国标准,生物安全柜分类及工作原理 I 级,HEPA过滤器,早期木制的 I 级生物安全柜,提供人员和环境保护可用于操作放射性核素挥发性有毒化学试剂多用于密闭的设备,如离心机小型发酵罐或伴随有潜在产生大量气溶胶的过程中使用.由于不保护样品，目前较少使用,全部直接排出,不保护,50年代，随着HEPA过滤器的研究和应用，以及对实验室生物安全的要求而发展起来,生物安全柜分类及工作原理 II级,60年代，随着无菌技术及实验对象保护的要求而发
13、展起来,分类：美国NSF 49: 2000标准：II-A1, II-A2; II-B1, II-B2欧洲EN12469:2000标准：对II级生物安全柜没有具体细分,使用情况：美国：II-A2 & II-B2 生物安全柜广泛使用欧洲：主要为II级生物安全柜（30%外排）欧洲使用的 II 级生物安全柜与美国 II-A2型生物安全柜几乎等同II 级生物安全柜为目前使用最广泛的生物安全柜，应用于P1, P2, P3实验室；主要针对无菌的动物组织,细胞培养与病毒繁殖,生物安全柜分类及工作原理 II级A型,30% 外排,A1型生物安全柜,A,前窗进风 0.38m/sE,背面正压污染区样品要求：非挥发性有
14、毒的化学物质；非挥发性放射性核素,60年代，随着无菌技术及实验对象保护的要求而发展起来,生物安全柜分类及工作原理 II-A2,30% 外排,0.5 m/s,背面负压污染区,70%循环,排风HEPA,送风HEPA,风机,样品要求：适合1-3级危险度微生物，微量有毒挥发性化学物质或放射性核素,A2型生物安全柜,A,前窗进风 0.5m/sE,背面负压污染区样品要求：微量/少量挥发性有毒的化学物质痕量挥发性放射性核素连接套管,套管连接外排系统或管道连接外排系统，可将外排系统引入室外，而不是直接外排到实验室内,生物安全柜分类及工作原理 II-B 型,源于美国国立癌症研究所 (NCI)专为生物体外操作有毒
15、化学物质而研制,增加HEPA过滤器不保护样品,层流技术实验对象保护,II-A2连接套管时可操作有微量挥发性有毒化学物和痕量放射性核素的样品,双重防护：生物、化学（细胞培养和微生物体系的致癌物质）实验对象保护挥发性有毒化学物和放射性核素,必须连接硬管，有应急电源以确保正常运转，成本相对A型高,生物安全柜分类及工作原理 II-B1,送风HEPA过滤器,排风HEPA过滤器,送风HEPA过滤器,侧面上升气流,底部双风机,允许少量挥发性有毒化学物质、痕量放射性核素,70%外排,生物安全柜分类及工作原理 II-B2,送风HEPA过滤器,允许挥发性有毒化学物质和放射性核素,100%外排,适合 P3 实验室,
16、生物安全柜分类及工作原理 II-B2,样品要求：允许少量挥发性有毒化学物质和放射性核素适合危险度1-3级微生物；可进行致癌物、抗肿瘤药物和低放射水平同位素实验,生物安全柜分类及工作原理 II-B2,通过中央空调补充实验室气体，此类实验室费用较高,非爆炸性化学烟雾和气体(100%),中央空调,连接硬管,外置风机,生物安全柜分类及工作原理 III 级,双开口灭菌器,全封闭负压系统，针对4级高危险度微生物,手套式,生物安全柜与通风橱、超净工作台的区别,通风橱,有害气体,超净工作台,BSC改进,水平或垂直层流只保护样品,保护操作者,保护环境：排风系统增加HEPA过滤器,保护样品：经HEPA过滤器的空气
17、循环到工作台面,生物安全柜与通风橱、超净工作台的主要区别,实验室生物安全的目的,保护：主要操作人员辅助操作人员实验室支持人员被实验对象周围环境,提高生物安全意识至关重要,所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸；熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常熟悉；应掌握各种感染性物质操作的一般准则
18、和技术要点。,实验室的生物安全技术规范,生物安全实验室运行基本规范生物安全柜的使用规范实验室仪器设备的使用规范感染性材料的操作与防护规范危险化学品的使用与管理放射性核素的使用与管理其他实验室危害的控制,生物安全实验室的运行规范,生物安全1级（BSL-1） 生物安全2级（BSL-2）,实验室的进入,未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿童不得进入实验室工作区域。可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不允许进入实验室或动物房。,实验室的进入,BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，生物安全的级别、实验室负责人姓名、紧急联系电话、以及进入
19、实验室的特殊要求。,实验室的进入,实验室的门应保持关闭。 工作人员进入动物房应当经过特别批准。 与实验室工作无关的动物不得带入实验室。,工作人员的防护要求,1.在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。,工作人员的防护要求,2.在进行可能接触到血液、 体液以及其他具有潜在感 染性的材料或感染性动物 的操作时，应戴上合适的 手套。手套用完后，应先 消毒再摘除，随后必须洗 手。3.在处理完感染性实验材料 和动物后，以及在离开实 验室工作区域前，都必须 洗手。,工作人员的防护要求,4.为了防止眼睛或面部受到 喷溅物的污染、碰撞或人 工紫外线辐射的伤害,必 须戴合适的安全眼镜、面 罩（面具）或其他
20、防护设 备。,工作人员的防护要求,5.严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。6.不得在实验室内穿露脚趾的鞋。7.禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。,办公室,工作人员的防护要求,7.禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。8.在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。,有关操作的指导原则,严禁用口吸移液管, 严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。,有关操作的指导原则,应限制使用注射针头和注射器；不要打碎注射器、弯曲注射针头、用后装上针头套、重复使用针管或针头；不要把针头或利器放在办公室的垃圾收集处，可使用利
21、器收集器收集；不要用手直接接触破碎的玻璃；,有关操作的指导原则,可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜中进行处理高浓度或大容量感染性材料均必须在生物安全柜中进行,有关操作的指导原则,实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。,实验室工作区的管理原则,实验室应保持清洁
22、整齐，严 禁摆放和实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作 台面的污染。若发生具有潜 在危害性的材料溢出应立即 清除污染。所有受到污染的材料、标本 和培养物在废弃或清洁再利 用之前，必须先清除污染。,实验室工作区的管理原则,感染性材料的包装和运输应遵循国家和或国际的相关规定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。,生物安全管理的指导原则,实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手册。实验室应能提供常规的实验室安全培训（每年都要进行相关培训），并且建立制度。实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或
23、/和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备有可供取阅的安全或/或操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。,生物安全管理的指导原则,应当制订节肢动物和啮齿 动物的控制方案。如有必要，应为所有实验 室人员提供适宜的医学评 估、监测和治疗，并建立 健康档案（保留基线血清 样品和必要的预防接种）。,生物安全3级（BSL-3）,标准的微生物操作规程 与BSL-1和BSL-2相同,生物安全3级（BSL-3）,特殊的规程1. BSL-3的使用应符合病原微生物实验室生物安全管理条例的有关规定。2. 张贴在实验室入口门上的
24、国际生物危害警告标志，应注明生物安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域的所有特殊条件，如免疫接种状况等。3. 实验室防护服应为长袖、背面开口的隔离衣或连体衣，应穿着鞋套或专用鞋。实验室防护服不能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。最好使用一次性连体防护服。,生物安全3级（BSL-3）,特殊的规程 4.开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他类似的防护设施中进行。 5.有些实验室操作,或在进 行感染了某些病原微生物的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。,生物安全3级（BSL-3）,特殊的规程6.实行双人工作制，严禁任何人单独在实验室内工作。7.实验记录未经可靠消
25、毒不得带出实验室。通常使用传真进行原始记录的传输。8.工作人员应开展健康监测。应收集并妥善保存工作人员的基线血清。,生物安全4级（BSL-4）,标准的微生物操作规程 与BSL-1、2和3相同,生物安全4级（BSL-4）,特殊的操作规程 在进入实验室之前以及离开实验室时，必需更换全部衣服和鞋；工作人员要求接受人员受伤或疾病状态下紧急撤离程序的培训； 必须建立实验室工作人员与实验室外面的支持人员之间的常规情况和紧急情况的联系方法。,生物安全柜的使用规范, 产品的保护； 操作者保护； 环境保护。,生物安全柜的作用,生物安全柜的操作要点,1. 在开始工作前把本次工作所有器材放入BSC；2. 打开BSC
26、，让气体流动5-10分钟；3. 用薄纸检查操作口的气流方向是否向内；4. 直线方向进入BSC，其内的操作要缓慢而规则；5. 操作完成后对移出BSC的器材进行必要消毒；6. 对BSC内部进行消毒处理；7. 让BSC再运转5-10分钟；8. 关机。 禁止在BSC内使用酒精灯,1. 生物安全柜内应尽量少放仪器和物品，只摆放本次工作所需的物品；2. 器材预先放入BSC，不要放在前排的气道网架上，也不要阻塞后面气口处的空气流通。,物品摆放与污染预防措施,物品摆放与污染预防措施,3. 操作时废物袋或废物盘应放置在BSC内；污染的吸管、器材在移出BSC前要消毒；4.洁净物品和使用过的污染物品要分开放在不同区
27、域，操作应从清洁区到污染区的方向进行，以免交叉污染；,class II型生物安全柜操作面器材放置平面图,物品摆放与污染预防措施,5. 在安全柜内的操作都要在工作台中央或后部进行，操作者不要频繁移动及挥动手臂以免破坏定向气流；6. 尽量减少操作者背后人员的走动以及快速开关房间的门，以防对生物安全柜的气流造成影响；7. 禁止将工作用纸放在生物安全柜内。,物品摆放与污染预防措施,生物安全柜内感染性材料溢洒的处理,1. 当发生少量溢洒时，应用吸水纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所有物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。2. 若发生大
28、量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。,实验室仪器设备的使用规范,仪器相关危险,吸管和移液器的使用,1. 为防止感染，严禁用嘴吸液，应使用机械移液装置。2. 所有的吸管都应该有棉塞以减少对移液器或吸球的污染。建议使用带有滤芯的吸头。 在BSL-2及以上级别实验室中，最好避免使用玻璃吸管。,吸管和移液器的使用,对于感染性材料不能用吸管吹打来达到混匀的目的，操作时吸管应放入操作液面下
29、的三分之二处，以防止产生气泡和气溶胶。从吸管吹出液体时也不要太用力，吸管内的液体应自动流出，不要强制性排出预留液.污染的吸管应立即浸没在含有适宜的消毒剂的防破碎的容器里。在处理之前，应浸泡足够长的时间。盛装废弃吸管的容器应放在生物安全柜里，而非外面。严禁用带有注射针头的注射器吸液。为防止从吸管滴落的感染性物质发生扩散，工作台表面应放一块具有吸收性能的材料，使用后应按感染性废弃物予以处理。,离心机的使用,离心机的分类,离心分类,转头转速 （ rpm ),微速离心 15,00低/高速离心 2,00020,000超速离心 120,000,离心机的使用, 所有的离心机应处于正常的工作状态并具有合格的机
30、械性能，要根据厂家的说明书进行操作。 离心机应放到适宜的位置和高度，以使工作人员能看见离心桶并便于进行各项操作。 用于离心的离心管和标本容器应该根据厂家要求选用，最好使用塑料制品，而且在使用前应检查有无破损。必须在安全柜内打开盖子。,离心机的使用, 使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。 应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机
31、腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。,离心机的使用,对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。 -大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上级别实验室尤其要注意。 -微型离心机则可放在安全柜内离心 -如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。 -所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。,搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用, 使用的管子、盖子、杯子或瓶子都应该保持完好，无裂隙、无变形。盖子、垫圈应恰好配套，保持完好。 在混匀、振荡和超声
32、波破碎过程中，器皿内的压力会增大，含有感染性材料的气溶胶可能会从容器和盖子间的空隙逸出。推荐使用塑料的，特别是聚四氟乙烯（PTFE）器皿。,当使用匀浆器、振荡器和超声波破碎仪时，应有防护装置，或在生物安全柜里操作。使用涡旋振荡器时，必须在生物安全柜内操作，并且操作的容器必须为密闭的，以避免产生气溶胶和发生液体溅洒。在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。操作人员使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。,搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用,组织研磨器的使用,使用玻璃的研磨器时，应戴上手套，手里再垫上一块柔软的纱布后操作。塑料（PTFE）的研磨器更安全。组织研磨器应该在生物安全柜里操作和
33、开启。,冰箱和速冻器的使用和保养,冰箱、低温冰箱和固体干冰盒要定期除霜和清扫。其中所有的安瓿、冻存管等在贮存过程中已破裂的要及时拿走。在清扫的过程中应配戴面部保护装置并戴手套，清扫后，抽屉内表面应消毒处理。所有保存在冰箱里的容器等，都应该有清楚的标签，并且标签上有内容物的科学命名、贮存日期和贮存人姓名。无标签的和过期的材料应高压灭菌后丢弃。对于冰箱内的储存物应有详细的目录。严禁将易燃液体保存在冰箱里，冰箱的门上应张贴这方面的注意事项。,冻干机的使用,对于高致病性病原微生物应在BSL-3或以上级别实验室进行冻干。冻干机排出的气体要经过HEPA过滤并将排出管道插入装有消毒液的容器中。对于冻干高致病
34、性病原微生物产生的冷凝水应收集入消毒液容器中并高压灭菌处理。冻干机的机舱恢复到室温后用适宜的消毒液擦拭。,五、感染性材料的操作与防护规范,实验室内标本的安全操作,（一）标本容器用于装盛感染性标本的容器可以是玻璃的，但为了保证安全，最好采用塑料制品（根据实际需要而定）。标本的容器应当坚固，不易破碎，盖子或塞子盖好后不应有液体渗漏。所有的标本都应存放在容器内。容器应正确地贴上标签以利于识别，标签上应有样品名称、采集日期、编号等必要的信息。样品的有关表格和/或说明不要绑在容器外面，而应单独放在防水的袋子里，以防止发生污染而影响使用,(二)标本的实验室内运输 为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全
35、，在实验室内运输标本时，应使用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器的支架，将标本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封口处最好有一个衬圈，以防止发生渗漏。,实验室内标本的安全操作,使用防漏的运输容器,实验室内标本的安全操作,(三)标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域进行。对于病原已知的按国家规定可在BSL-2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低应在一个专用区域或房间接受，并在生物安全柜内打开外包装，操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩和眼罩、手套。按国家规定需要
36、在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标本，应按国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内打开，并采取相应的防护措施保证安全。不应在普通的BSL-1实验室接受标本。,实验室内标本的安全操作,(四)标本包装的打开接收并打开标本包装的人员应受过防护培训（尤其是处理破裂的或渗露的容器）并应知道所操作标本的潜在的健康危害，操作时要采取合适的防护措施。所有标本应该在生物安全柜里打开包装，同时备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄漏。打开包装前应先仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，要登记详细的报告单并记录处置方法。接受标本应由
37、2人进行。,避免感染性物质扩散的方法,为避免接种物从接种环上脱落，微生物接种环直径应为2-3mm并且完全闭合，柄的长度不应超过6cm以最大限度减少抖动。 应该使用密闭的微型电加热灭菌接种环，以免在开放式的灯火焰上灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次性的、无需灭菌的接种环。,避免感染性物质扩散的方法,小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。 要高压灭菌和/或丢弃的废弃的标本及培养物应放在防渗漏的容器里，如实验室用的医疗废物专用袋，这些袋子是耐高压的。放入废弃物容器前，标本的顶部应标明是安全的（如用高压标签）。 应对实验室进行定期的终末消毒,避免感染性物质吸入或接触的规范,在微生物学的实验操作中释放的
38、较大颗粒和小液滴（直径大于5m）会很快落在操作台表面以及操作者的手上，为了避免污染，操作者应戴一次性手套。实验人员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。严禁在实验室里吃东西、喝东西以及储存食品和饮料。,避免感染性物质吸入或接触的规范,实验室内不许咬笔、嚼口香糖。实验室内不许化妆和配戴隐形眼睛。在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应该保护面部、眼睛和嘴。,避免传染性物质接种的规范,要尽力避免由破裂的或有缺口的玻璃器皿引起的传染性物质的意外感染。尽量以塑料器皿代替玻璃器皿。应用塑料吸管替代玻璃吸管。锐器皿如皮下接种针（针头）、玻璃吸管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此锐器要小心操作。为减少注射
39、器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可以用简单的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代替注射器和针头）。必须使用注射器和针头时，要采用锐器保护装置。,血清分离的实验技术规范,操作时要戴手套及配戴眼睛和粘膜保护装置。只有良好的实验室技术才能避免溅出和气溶胶产生，或将这种可能性降至最低。吸取血液及血清时要小心，不要倾倒，严禁用嘴吸液。吸管用后应完全浸没在适当的消毒液里，并且在处理之前，或洗刷及灭菌再利用前要浸泡足够长的时间。带有血凝块的废弃标本管等，加盖后应当放到适当的、防渗漏的容器中，以备高压和/或焚烧。应备有合适的消毒液，用以随时清除溅出物及溢出物。,开启装有冻干传染性物质安瓿的技术规范
40、,首先消毒安瓿的外表面。安瓿里如果有棉塞或纤维塞，应先用砂轮在安瓿外表面的棉塞或纤维塞中部挫一划痕。于划痕处打破安瓿以前，先在手里垫一块酒精浸透的棉花再握住安瓿，以免扎伤或/和污染手部。不同的操作根据国家有关规定执行。轻轻地移去安瓿顶部并将其按污染物处理。如果棉塞或纤维塞仍然留在安瓿上，则用灭菌镊子将其除去。向安瓿内缓慢地加入液体以重悬内容物，避免产生泡沫。,含有感染性物质的安瓿的储存规范,含有感染性物质的安瓿不要浸入液氮，因为破损的或密封不好的安瓿在移动时可能会破裂或爆炸。如果要求以非常低的温度保藏，安瓿也只应保存在液氮上面的气相中。否则，传染性物质应该保存在低温冰柜或在干冰中。实验室人员在
41、从冷藏处拿出安瓿时，要配戴手和眼睛保护装置。通过这种方式贮存的安瓿在从冷藏处拿出时应对外表面进行消毒。,对血液、体液、组织和排泄物的防护规范,（一）标本的收集、贴标签及运输应始终坚持标准的防护措施;所有的操作都要戴手套完成。从病人或动物身上采集血液应由受过训练的人员来完成。进行静脉采血时，应以专用的一次性安全真空采血器代替常规的针头和注射器，这样可使采集到的血液直接流入有塞子的运输管和/或培养管，并且针头用后可以自毁。管子应放在适当的容器里以备运往实验室和在实验室内运输。标本表格应放在防水的袋子或信封里。,对血液、体液、组织和排泄物的防护规范,（二）标本管或标本容器的打开标本管应该在生物安全柜
42、里打开。必须戴手套。推荐使用眼部和粘膜保护装置护目镜或面罩（头盔）。防护服外应再戴一个塑料围裙。打开标本管的塞子时，应在手里先垫上一块纸或纱布再握住塞子，防止溅出。,用于显微镜观察的薄膜和涂片的操作,用显微技术检测固定并染色的血液、痰和排泄物等标本时，可能并未杀死涂片上的所有微生物和病毒，所以这些涂片等物品应用镊子来操作，妥善保存，并且在丢弃以前要消毒和/或高压灭菌。,对组织标本的操作,应使用福尔马林固定。应避免进行冰冻切片。如果必须进行的话，应罩住冷冻机，操作者戴防护面罩。消毒时，仪器的温度至少应升至20。,消 毒,推荐使用次氯酸盐和高级消毒剂进行消毒。一般新配制的次氯酸盐溶液有效氯含量应为
43、1g/L，但用于消毒溢出的血液，有效氯含量则应为5g/L。戊二醛可用于表面消毒。,对可能含有朊病毒的材料的预防措施,朊病毒病为人畜共患症,最早于200年前发现羊瘙痒病(Scrapie), 后来发现CJD（克雅病）、Kuru，1986年发现疯牛病。人和动物中已知有近20种可传播性海绵脑病（TSE）。 朊病毒病在人类主要有以下5种： 1. 库鲁病(Kuru); 2. 克-雅氏症（CJD）; 3. 由疯牛传染的变异型克-雅氏症(nvCJD); 4. 吉斯特曼-斯召斯列综合症(GSS); 5. 致死性家族性失眠综合症(FFI),朊病毒病的共同病理特点,这些病的共同特点是：中枢神经系统进行性退行性海绵样
44、变，其标志性四大神经病理特征是： 1. 空泡变性或海绵样变（Spongifor changes）; 2. 神经元丢失(Neuron loss); 3. 星形细胞增生（Astrocytosis）; 4. 淀粉样斑沉积(Amyloidosis); 朊病毒病在临床上潜伏期很长（5-50年），一旦发病6个月至1年全部死亡，表现为进行性痴呆，共济失调，震颤。,朊病毒的特殊性质,耐受蛋白酶的消化和常规消毒作用，只有强碱(1-2N NaOH)，高压消毒(13,2小时)才能灭活；不含核酸，用常规PCR无法检测超长的潜伏期（平均20年），发病前无法检测和诊断；变异和跨种族感染，具有大量的潜在感染来源，主要为牛、
45、羊、鹿等反刍动物，未知的潜在储存宿主可能很广，传播的潜在危险不明，很难预测和控制；受感染器官多已知主要为脑髓，但潜伏期中除神经系统以外，各种器官组织均有感染性；感染途径多已知有消化道（食入）、神经、血液均可感染。100%病死率，缺乏治疗药物，无法研制预防疫苗。,朊病毒的操作要点,因为朊病毒的抵抗力很强，因此一旦发生污染其清除是很困难的，故操作朊病毒的实验室应使用专用的设备，而不要和其它实验室共享设备。所有的操作都应在生物安全柜里进行。在操作过程中产生的危险因素主要有气溶胶、意外吸入及皮肤的割伤或刺伤。因此，在操作的过程中，必须穿一次性的实验室保护服（罩衫和围裙）和戴手套（病理学操作者要在两层橡
46、胶手套之间戴钢网手套）。使用一次性的塑料器皿取代玻璃器皿。处理标本时不应使用组织处理机，可代之以塑料的广口瓶和大口杯。,消毒处理,组织学样品： 96%甲酸处理 1h；废弃物 ：134137高压灭菌18min或3min6个循环后焚烧处理；废液 ：含有效氯20g/L（2%终浓度）的次氯酸钠处理1h；安全柜和其他表面：含有效氯20g/L（2%）的次氯酸钠处理1h；安全柜内可用甲醛熏蒸；器械：含有效氯20g/L（2%终浓度）的次氯酸钠中浸泡1h；,六、危险化学品的使用与管理,危险化学品的分类（八类）,爆炸品压缩气体和液化气体易燃液体易燃固体、自燃物品和预湿易燃物品氧化剂和有机过氧化物毒害品放射性物品腐
47、蚀品,危险性化学试剂安全管理,化学实验室样品种类繁杂，从样品受理、交接、搬运、保管、检测、留样、处理等应有序运行，确保样品的安全。1.样品交接2.检测过程中样品的管理3.样品搬运4.样品保存留样复测样品5.样品处理,危险化学品使用的管理,1.采购审批要求 危险性化学试剂使用单位申请购买危险性化学试剂时,持剧毒化学品购买凭证、准购证申请表、剧毒化学品购买凭证、准购证、剧毒化学品公路运输通行证。2.使用程序（1）计划（2）采购（3）管理（4）领用,危险化学品使用的管理,3.贮存要求一般有机试剂均要求存放于阴凉、干燥、通风、避光处,适宜温度在25以下。为防止沾污,料架必须经常清扫。其它一般无机试剂品种繁多、因性质稳定，不易变质的可按元素周期表系、族或无机分类办法排列存放。,危险化学品的暴露途径与中毒急救指南,皮肤接触：脱去污染的衣服，紧急喷淋，必要时 尽快就医眼睛接触：提起眼睑大量水流冲洗15min，必要 时就医吸入接触：迅速撤离现场到空气新鲜处；呼吸停 止时进行人工呼吸；呼吸困难时输氧。食入：立即就医,
