1、实验六病毒的观察与培养真菌的培养方法与形态观察,医学微生物学实验,实验内容：1.病毒的观察：形态观察及生长状况观察2.病毒的培养3.真菌的培养、形态观察（真菌的单染法）和浅部真菌病临床标本检查,1.病毒的观察（1）病毒的形态观察（2）病毒的生长状况观察,病毒的形态结构,痘病毒 脊髓灰质炎病毒 鼻病毒,上为模式图，下为电子显微镜下观察结果,烟草花叶病毒 狂犬病毒 噬菌体,上为模式图，下为电子显微镜下观察结果,（2）病毒的生长状况观察病毒在细胞中生长繁殖的指标：1) 细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）: 有些病毒在细胞内增殖时可引起细胞发生特有的形态学变化（细胞病变），称
2、为细胞病变效应（CPE ）。2）包涵体 (inclusion body)：3）红细胞吸附：4）干扰现象：,正常细胞,细胞病变效应CPE,示教：病毒感染细胞CPE/正常细胞,Negri body in a neuron,示教：病毒包涵体,2.病毒的培养,病毒的培养方法包括： （1）动物接种 （2）鸡胚培养 （3）细胞培养,（1）动物接种,（2）鸡胚培养：目前主要用于流感病毒的分离培养。,（3）细胞培养：将人或动物离体组织块或分散的活细胞，模拟体内的生理条件在试管或培养瓶内加以培养，使之生存和生长，称为组织培养。目前一般所指的组织培养多指单层细胞培养。 是目前最常用的方法。常用的细胞有：原代培养细
3、胞：采用机械或胰蛋白酶等处理离体的新鲜组织器官，制成分散的单个细胞悬液，加入生长液后，分装于培养管中培养，活细胞贴壁生长繁殖，数天后形成单层细胞，称原代细胞培养。 二倍体细胞株：原代细胞经过多次传代仍能保持二倍体特性，称为二倍体细胞株。 传代细胞系或株：来源于肿瘤细胞或细胞株在传代过程中变异的细胞系，是能在体外无限传代的细胞系。,动物细胞原代培养过程图,示教：原代细胞培养录像,3.真菌的培养与形态观察（1）真菌的培养方法（2）真菌的形态观察（3）浅部真菌病临床标本检查,（1）真菌的培养,真菌的营养要求不高；常用沙保弱培养基(Sabouraudsmedium)：蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。温度
4、：2228，但某些深部感染的真菌为37。pH：4.06.0生长速度:较慢,可出现三种菌落：（1）酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形，表面光滑、湿润、柔软而致密、乳白或奶油色。（2）类酵母菌落：菌落表面同酵母型菌落，在菌落根部有假菌丝伸向培养基内生长，乳白色。（3）丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状，绒毛状或粉末状、菌落中央有皱褶，外围有放射状沟，多为茶褐色。,白假丝酵母(血平板),黄曲霉,示教：酵母、类酵母型菌落和丝状真菌菌落,小培养法：小培养法是采用真菌培养板或普通载玻片进行真菌培养。培养物可直接于显微镜下检查，也可经染色后观察。,（2）真菌的形态观察,单细
5、胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。,烟曲霉,白假丝酵母,真菌的单染法（白假丝酵母菌）实验步骤：制片（同革兰染色）染色：滴加结晶紫（或碱性亚甲蓝）染色1min，水洗，吸干，油镜观察。,（3）浅部真菌病临床标本检查浅部真菌病临床上极为常见，包括手癣、足癣、甲癣、头癣、体癣和股癣等，其在检查方面多采用直接镜检。示教：皮肤真菌,实验材料：白假丝酵母菌一管/小组，结晶紫1瓶/小组，玻片1个/人,实验报告内容 真菌的单染实验原理、实验步骤、实验结果绘图和结果分析。,实验课考试：考试内容细菌的单染注意事项 无菌操作、制片、染色、显微镜使用请每人准备一张空白纸，在左上角写上本人姓名和学号。,
