1、采供血机构工作人员远程二类上岗培训,张俊玲,第二册 传染病和传染性病原体,一 、传染性病原体 二、免疫学基础三、 HIV 四、 HIV筛选试验原理五、 HIV抗体的筛检方法的选择六、抗HIV抗体筛检试验的应用七、质量保证八、其它传染性病原体,一 传染性病原体,病毒、细菌、原虫、真菌，只有前三种可经血传播，但最常见的经血传播的病原体是病毒。,病毒：由核酸、核衣壳、包膜组成；但朊病毒不含核酸、仅由蛋白质组成、此病毒侵袭神经系统和脑组织。病毒蛋白质存在于病毒包膜和核衣壳上，可被机体免疫应答来识别。,细菌：原核生物-具有清晰的细胞 结构、但缺乏真正的细胞核。许多细菌包被有荚膜，能直接引起免疫应答。,原
2、虫：属真核生物、是单细胞有机体、大多数原虫生活在水里、仅少数寄生在其它动物的身上。真核生物-有真正的细胞核（核膜、核仁）。,真菌：不同与细菌、大多数真菌能分解有 机物和废物、只有少数种类的真菌可引起人类疾病。真菌分霉菌型和酵母型（酵母菌和类酵母菌）酵母型以单细胞形式通过出芽的方式生长。霉菌可形成菌丝体，酵母菌不形成菌丝体。,近年，一种新的传染性病原体朊病毒被证实存在。朊病毒是唯一不含任何核苷酸，仅由蛋白质组成的病原体。,经血传播的传染性病原体的传播,传染性病原体是否可经血传播取决于以下三个条件；1. 病原体必须能够随血进入宿主或患者体内。2. 被感染的献血者没有任何症状。3. 病原体在血液中能
3、存活一段时间。,具备三个条件是否真的发生还取决于多种因素，如患者的免疫状态和输入的传染性病原体的数量。输血是传播传染性病原体的主要途径但不是首要途径。,二、免疫学基础,1、 免疫系统的组成; 免疫器官，免疫组织，免疫细胞，免疫分子组成。,免疫器官：中枢免疫器官骨髓、胸腺、是免疫活性细胞的产生、增殖和分化的场所 周围免疫器官脾、淋巴结、何粘膜相关淋巴组织、是免疫细胞和应答的场所。,免疫细胞： 1 .T淋巴细胞 2. B淋巴细胞 3. 第三类淋巴细胞 4. 辅助细胞,T淋巴细胞：辅助T淋巴细胞（Th）：CD4 分Th1和Th2 细胞毒淋巴细胞（Tc）：CD8,2. B淋巴细胞：是产生抗体的细胞 3
4、. 第三类淋巴细胞（大颗粒淋巴细胞）：NKc Kc LAK细胞（5%-10%） NKc杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞 Kc 识别IgG包被的细胞 LAK非特异性的杀灭靶细胞4. 辅助细胞：单核吞噬细胞系统、树突状细胞和棘细胞,免疫分子；主要是免疫球蛋白、既抗体、它属于r球蛋白。,1.抗体是由蛋白质和碳水化合物组成、是r-球蛋白、也称作免疫球蛋白2.抗体分子的基本结构是由一条重链（分子量约50000）和一条轻链（分子量约25000）组成，共有五种免疫球蛋白：IgG IgM IgA IgE IgD, 其区别在于重链成分和结构的不同。,3. IgG 占人体免疫球蛋白总量73%、4. IgM占人体免疫球蛋
5、白总量8%、由五个基本单位组成、是初次免疫应答的主要抗体。5. IgA占人体免疫球蛋白总量18%、由二个基本单位组成、是分泌物和粘膜中的主要抗体,6. IgE 和 IgD共占1%、IgD位于淋巴细胞表面为表面受体；IgE与过敏反应有关、位于肥大细胞和嗜碱性细胞表面,免疫系统的组成：免疫器官、免疫组织、免疫细胞 免疫分子组成。但根据其作用，免疫系统是由两部分组成、即外来蛋白的体内识别和阻止体内传染性病原体繁殖生长这两部分组成，这种免疫应答是特异性的。,免疫反应,免疫反应分体液免疫和细胞免疫细胞免疫由T淋巴细胞介导、包括辅助性T细胞和杀伤性T细胞，辅助性T细胞表达CD4、杀伤性T细胞表达CD8，体
6、液免疫（Bc）:是B细胞介导的抗原抗体反应，和免疫学检测方法有关,细胞免疫（Th）Th1 Th2 NK破坏被微生物感染的细胞和组织 Tc: LAK非特异性的杀灭靶细胞 K：识别IgG包被的感染细胞,减少输血传染传染性病原体的方法仔细选择献血员筛检捐献的血液去除血液中被感染的特殊成分用物理方法灭活感染性病原体,血液筛查就是检查传染性标志物传染性标志物：可以是病原体本身、也可以是特异性抗体.HIV和HBV 感染后，抗体的产生对机体免受再次感染有保护作用，,对献血员筛查而言，检测病原体自身比检测抗体要好。抗体的出现仅提示了一种免疫力，而非感染状态。对乙型肝炎，检测HBsAg是用于HBV 感染的筛查；
7、而对于HIV，检测HIV抗体用于献血者HIV感染的筛查,三 HIV,1. 1983年发现的HIV1；1986年西非发现HIV2，两者的包膜蛋白不同。2. 与HIVRNA相关的两种蛋白质分别是7KDa和9KDa（7P和9P），逆转录酶是P66。糖蛋白的缩写是gp.3. HIV1的包膜蛋白：P17/gp41/gp120 HIV2的包膜蛋白:P17/ gp36/gp110130.,4. 当病毒开始复制时、感染进入最后阶段、产生大量病毒粒子，以出芽的方式脱离细胞时，外面包裹一层细胞膜、形成病毒颗粒。5. HIV为逆转录病毒，其核心蛋白P24和包膜蛋白gp41最具免疫性，主要破坏免疫系统、感染CD4+细
8、胞。（CD4+细胞：帮助刺激免疫应答的Tc、 Thc、吞噬细胞）,6. AIDS相关综合征的缩写是ARC7. ARC恶性发展的预兆是：既可检测到gp41抗体又能检测到P24抗原。8. 输血是HIV传播的重要途径、但不是主要途径。,四HIV筛选试验原理,1. HIV抗体检测的基本方法：EIA（抗人球法I型、竞争法 II型、夹心法 III型）、颗粒凝集试验、特异性快速试验（颗粒凝集试验、特异性快速试验只能检测抗体）。,抗人球蛋白EIA法中的标记酶通常是辣根过氧化物酶（使底物氧化）和碱性磷酸酶（使底物去磷酸化）。竞争型EIA法的酶结合物是酶标HIV抗体 ，其浓度应低于标本中的HIV抗体最小浓度。,H
9、IV抗原检测 ： HIV抗原检测采用夹心法（抗体-抗原-抗体 ）结果判读 ： I型与夹心法 III型中、高OD值、产生颜色、表明有反应；竞争法 II型中、高OD值、产生颜色、表明无反应；Cut-off值的计算：Cut-off值=Ncm+0.2 (阴性对照的平均值),标准比率=OD值/Cut-off值，数值小于1为无反应结果； 数值大于1为有反应结果；但在竞争型EIA法中、比率= Cut-off值/ OD值。,特异性快速法：蛋白A由金黄色葡萄球菌产生，能与IgG的Fc段结合（补体结合部位）。,五HIV抗体的筛检方法的选择,灵敏度：检测出最弱阳性标本的能力（真阳性/真阳性+假阴性100%） 特异性
10、：避免假阳性或非特异性阳性结果的能力（真阴性/真阴性+假阳性100%）。 质控品：质控品中不能含有那些可能干扰实验的防腐剂，叠氮钠可能EIA法中的辣根过氧化物酶时候失活。,六抗HIV抗体筛检试验的应用,筛检结果处理：初试阳性标本用特异性快速法一般只重做一份，而颗粒法和EIA均做双份。,七质量保证,1. 对质量体系而言，最本质的是各种程序文件化。2. SOP初稿由各岗位工作人员起草，负责人审核。3.质量审核的目的在于质量控制工作的完整性和质量体系得有效性。,八其它传染性病原体,（一） HBV（二） HCV（三） 梅毒（四）疟疾（五）恰加斯病（又称为南美洲锥虫病）,（一）、HBV 27nm的HBV
11、壳体核心含有病毒核酸和DNA聚合酶、其具有传染性；而22nm的球形颗粒或管状小颗粒只含有病毒蛋白、其没有传染性。,HBV-1 病毒结构模式图,HBV-1病毒的增值过程,HBV感染后的血清变化,HBV血清标志物,对血清标志的基本认识,二HCV感染与检测,HCV-1 病毒结构：至今尚未培养成功，三维结构不清，使用反义病毒学推出。,HCV-2 临床病理,丙肝实验室诊断及临床意义,（三）、梅毒,梅毒 密螺旋体属T-苍白球细菌传染病（G-），梅毒螺旋体对温度非常敏感、4保存24-48小时后、传染危险基本上消除。,密螺旋体,人类密螺旋体属病原体主要有四种统称： 1. 苍白球（梅毒） 2. 细弱密螺旋（雅司
12、病）局限在热带T-苍白球亚类 3.品他螺旋体（品他病） ：主要在 中美和南美洲流行 4.（Bejel病）：非洲及中东的非性传 染病,梅毒临床分期,一期损伤粘膜淋巴系统一般分三期： 二期损伤皮肤和细胞膜、传染性最 强。 三期损伤神经系统合心血管系统,梅毒检测： 非特异性：RPR(用正常牛 心类脂质作抗原)、USR 特异性：TPHA、FTA-ABS （用梅毒螺旋体作为抗原）螺旋体是革兰氏染色阴性，细胞壁中的外层细胞膜含有抗原性蛋白,（四）、疟疾,1. 疟原虫有二个宿主：人和按蚊2. 疟原虫在二个宿主的生命循环 人类宿主内的生命循环： 孢子虫肝细胞（滋养体裂细胞裂殖子）释放入血红细胞（滋养体裂细胞裂
13、殖子）部分形成雌雄配子体（雌雄配子体在血液中存活6-12小时）,能引起疟疾的疟原虫有四种： 间日疟原虫 卵型疟原虫 三日疟原虫 恶性疟原虫通常只有由恶性疟原虫引起的疟疾是致命的,（四）、恰加斯病（又称为南美洲锥虫病）,1.克鲁斯锥虫引起的、属于有鞭毛的原生动物2.克鲁斯锥虫在人类宿主的血液中不能增殖3.锥鞭体在昆虫中的肠内以短膜型鞭毛虫形式增殖,有关概念,（一）、病原体1、能引起输血传播的病原体有：病毒、细菌、原虫。2、最常见的经输血传播的病原体是病毒。,（二）、病毒,1、朊病毒是唯一的不含任何核苷酸仅由蛋白质组成的病原体。2、DNA是由碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶）、磷酸和核糖组成
14、的脱氧核糖核酸。RNA是由碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶）、磷酸和核糖组成的核糖核酸。3、病毒感染相应的宿主细胞后，可被机体免疫应答的物质是病毒核酸。 4、病毒的结构：病毒核酸、病毒衣壳（病毒核心）、包膜（病毒外衣）。5、窗口期：潜伏性感染后，机体内不能检测到相应的抗体,(三)、细菌,1、细菌是由细胞核、细胞器、细胞壁极其附属结构（荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢）组成。2、细菌感染人体后产生的病变通常是由细菌产生并释放病毒而导致的。,3真核细胞微生物：有核膜、核仁、多个染色体，由DNA和组蛋白组成。（真菌、原虫）4原核细胞微生物：仅有原始核，无核膜和核仁，仅为单个裸露的DNA分子。（细菌）5非
15、细胞性生物：由单一的DNA或RNA和蛋白质组成，必须寄生在活的易感细胞内生长繁殖。（病毒）,(四)、原虫和真菌,1、原虫是单细胞有机体。2、真菌是一种具有典型细胞核的真核细胞微生物。 a.酵母菌： 单细胞真菌，不形成菌丝， 真菌分为 b.类酵母菌：但类酵母菌可有假菌丝 c.霉菌：多细胞真菌，有菌丝和孢子,血型血清学,一、血液中主要成分的功能及其在数学中的意义二、ABO的抗原抗体反应及其影响因素三、 ABO血型系统的正反定型，对献血者和患者鉴定四、RH血型系统 五、配血试验重要性六、血型鉴定和配血试验的原理,血型血清学,一、血液成分与功能全血是由细胞和血浆组成，1、红细胞： 其入血后寿命约120
16、天、随后被网状内皮系统降解清除，红细胞内的血红蛋白在输血工作中用已知浓度的硫酸铜溶液测定、男性用密度为1.052、女性用1.050的硫酸铜溶液。血红蛋白男135-170g/L 女120-160g/L,粒细胞2.白细胞： 淋巴细胞 单核细胞 白细胞是有核细胞且平均寿命很短，粒细胞平均3-5天，单核细胞离开循环系统后寿命只有几天,中性粒细胞 50%-70% 粒细胞 嗜碱性粒细胞1%-5% （其功能是抵御炎症感染） 嗜酸性粒细胞 0%-1%,淋巴细胞：大部分由淋巴组织和胸腺产 生 20%-40% 主要是针对外源性抗原及病毒性 感染,单核细胞： 8% （清除外源性物质如细菌、这一 过程称为吞噬）3.
17、血小板：正常成人含量约10-30万、血小板离体后如保存适当、可保存5天,血清和血浆： 血清是凝固红细胞的上清液； 血浆是抗凝血的上清液。凝血激活途径：内源性（表面接触）、外源性（组织损伤 ）,二、血型免疫学基础,1. IgG和IgM的区别（都能激活补体、最适PH值6.5-7.5） IgG（73%）不完全抗体、能通过胎盘、与红细胞在盐水中不凝集、但可致敏红细胞、最适反应温度37、。如HR血型抗体 IgM（8%）完全抗体、不能通过胎盘、与红细胞在盐水中凝集、最适反应温度4、。如ABO血型抗体，平均寿命10天,2. 抗原与抗体比例最适细胞浓度是2-5%3. 抗人球蛋白试验 抗人球蛋白试验分三阶段；第
18、一致敏与包被、第二阶段洗涤、第三阶段加入抗人球蛋白。4. 补体 5630分钟可将其灭活,三、ABO血型系统,1. 1900年Landsteiner发现了ABO血型2. ABO血型鉴定、必须进行细胞与血清两组试验、即正定与反定、反定时用O细胞的目的是证实是否有不规则抗体3. 新生儿ABO血型只作正定4. A抗原亚型1911年发现A1 A2两种亚型、A2 和A2B的血清中有可能有抗A1抗体。,5. 抗AB和抗A常用抗AB来确定弱A和B抗原这种抗A和抗B的混合物与弱A和B抗原亲和力强，抗AB在患者的红细胞鉴定中部需要，但建议用于献血者简单。6. 直接抗人球蛋白试验：测定细胞表面致敏的抗体7. 间接抗
19、人球蛋白试验：测定游离在血清中的抗体,A2和A2B的人血清中有可能有抗A1，但通常很弱。A2人血清有抗A1占2%， A2B的人血清中有抗A1占25 %,四、Rh血型系统,。,RH系统不象ABO系统，它有六个基因，称为：Cc,Dd,Ee;五种抗原称为Cc,D,Ee。d基因不产生抗原。,1. RhDu型的献血员作为Rh阳性看待、RhDu型的病人作为Rh阴性性看待。2. 不完全D和RhDu型不同、不完全D是部分抗原丢失、可产生针对丢失部分抗原的抗-D抗体；而RhDu型是细胞上D抗原数量低于正常。,五、配合性试验和发血,患者用血选择1.为大量输血的患者选血、大量输血是指患者在24小时内输了超过自身血容
20、量的血液、在输了12单位血后，可以输注未经交叉配合的血液，但三天后仍需输血必须进行交叉配合。,2. 给婴儿或新生儿选择全血或红细胞悬液、一般用不超过7天的、最新鲜的血液。血液选用与母婴配合Rh血型合适的血液（由于婴儿血清中存在母亲的血型抗体如母亲为O型，婴儿为A型，则选用O型的红细胞加AB型血浆）；在换血的情况下选血的原则有赖于换血的原因。RhD新生儿溶血病患儿换血、则用RhD阴性血；ABO新生儿溶血病患儿换血、则用低效价O型血；其他任何新生儿黄疸患儿换血、可选用ABO、Rh与婴儿同型的血液或Rh同型的。,3. 不规则抗体筛选：不规则抗体筛选多用抗人球蛋白试验、筛选细胞有双细胞筛选R1R1O型
21、CDe/CDe, R2R2cDE/ cDE, 三细胞筛选R1R1 、R2R2 、 RRO型cde/cde.,4. 输血反应：发热反应 过敏反应 溶血反应,溶血反应：血管内溶血：在循环系统内红细胞溶解，伴有黄疸和血红蛋白症，这种反应主要是由IgM型抗体引起。血管外溶血：由吞噬细胞造成红细胞破坏，由IgG型抗体引起。,血型鉴定和配血试验,血型鉴定方面注意两个问题，一个是抗血清：污染和效价降低，污染导致假阳性、效价降低导致假阴性一个是标本：除了污染、还需要考虑纤维蛋白的影响。,。,假凝集：除了试剂和标本的污染外，这种现象通常出现在白蛋白/球蛋白比例不正常的血清中。如果是假凝集、加一滴高渗盐水（1.5
22、%）凝集散开，而正凝集不会散开。华通胶也会引起假凝集（钱串状凝集），可用37盐水洗涤就可以。,自身抗体和冷抗体,自身抗体和冷抗体：影响ABO反定型。这种现象用37孵育。 冷抗体非常强时、 37孵育会引起溶血。,红细胞免疫抗体的测定,1.盐水法2.酶（木瓜酶）法3.抗人球蛋白法（间接法）：致敏、洗涤、 加抗人球蛋白试剂 致敏; 洗涤:盐水的PH值必需在6.57.5之间。4.直接人球蛋白法：溶贫、输血反应、新生儿溶血，测体内致敏的红细胞抗体。,反应强度：用1 4标记、L表示溶血鉴定试验的红细胞：血型鉴定使用的红细胞需要用盐水洗涤，凝结血洗涤一次、抗凝血需洗涤两次。3%红细胞的制备：1滴压积红细胞加30滴盐水。,最后，提一下有关核酸检测、根据卫生部的要求，采供血机构对献血者血样除了现在的酶免项目外，还增加核酸检测，核酸检测对标本和环境的要求比较高，如果不严格按规范操作，检测结果容易出现假阴性或假阳性，出现假阴性是受RNA酶的影响，乙肝核酸是DNA，而丙肝和艾滋的核酸是RNA，因此丙肝和艾滋更易受RNA酶的影响。,谢谢,
