1、血细胞分析仪器,血细胞分析仪,一、血细胞分析仪分型 半自动 全自动 工作站 光电型 激光型 电阻抗型等 二分群 三分群 五分群 +网织红,二、电阻抗基本原理 根据血细胞的非传导性的性质，以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，这一原理的应用实现了血细胞计数的自动化，此方法称为库尔特原理,血细胞分析仪,电阻抗基本原理,电阻抗基本原理,电阻抗法白细胞分群从电阻抗的原理可以看出不同体积的白细胞通过小孔时，产生的脉冲大小不同，而不同类型的白细胞(如淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞)经溶血作用后有明显的差异，因此根据脉冲的大小，即可人为地将血中的白细胞分成几群,电阻抗法,白细
2、胞分类原理经过溶血剂处理后的白细胞根据体积大小可以初步确认其相应的种类：第一群小细胞群)是淋巴细胞(LYM)，第二群是单个核细胞区(MONO)，也被称为中间细胞(MID)；相当于粒细胞的细胞群(GRAN)位于第三群(大细胞群)35-90fl的颗粒被计数为淋巴细胞，90-160fl的颗粒计数为单个核细胞，160fl以上的颗粒计数为粒细胞,红细胞计数原理,原理同白细胞检测，红细胞通过小孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高低代表单个脉冲细胞的体积,血红蛋白测定原理,被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白的衍生物，进入血红蛋白
3、测试系统，在特定波长(一般在530550nm）下比色，吸光度变化与液体中血红蛋白含量成正比,血小板测定原理,血小板随红细胞一起在一个系统中进行检测根据不同的阈值、计算机分别给出血小板与红细胞数目,检测流程,血细胞分析仪检测结果,直方图分析,红细胞直方图白细胞直方图血小板直方图,（一）红细胞直方图在贫血中的应用 1.小细胞性贫血（1）RDW正常：轻型地中海贫血 （2）RDW轻度增高：缺铁性贫血 （3）RDW明显增高，两个细胞峰，小细胞峰明显左移：铁粒幼细胞性贫血、缺铁性贫血经治疗有效,正常红细胞,小红细胞大小不均,2.大细胞性贫血(1) RDW正常，细胞主峰明显右移：溶血性贫血白血病前期再生障碍
4、性贫血巨幼细胞性贫血(2) RDW轻度增高，红细胞峰明显右移，基底增宽：叶酸、维生素B12缺乏性巨幼细胞性贫血。(3)RDW明显增高，红细胞峰明显右移，出现两个峰： 巨幼细胞贫血，叶酸、维生素B12治疗初。,巨红细胞且大小不均,巨幼细胞性贫血治疗有效,3.正细胞性贫血 （1）RDW正常：慢性病急性失血骨髓纤维化骨髓发育不良(2) RDW轻度增高：血红蛋白异常骨髓纤维化（3） RDW明显增高： 早期或混合性营养不良,（二）白细胞直方图临床应用直方图只能提示白细胞比例变化或可能出现异常细胞，故要求用显微镜复查血涂片。 1.中性粒细胞增高(淋巴细胞相对减低) 嗜中性粒细胞增多淋巴细胞减低症,正常白细
5、胞,淋巴细胞减少和中性粒增多,（二）白细胞直方图临床应用直方图只能提示白细胞比例变化或可能出现异常细胞，故要求用显微镜复查血涂片。 2.中性粒细胞减低（淋巴细胞比例增高）婴幼儿再生障碍性贫血嗜中性粒细胞缺乏症淋巴细胞增多症传染性单核细胞增多症慢性淋巴细胞白血病,淋巴细胞增多和中性粒减少,3.嗜酸性粒细胞或单核细胞 淋巴细胞与单核细胞之间区域异常。可能存在：异型淋巴细胞、浆细胞，原始细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞等。 4.急性白血病 白血病细胞在某一区域出高大细胞峰，同时有报警。5.慢性白血病 在单个核细胞区和嗜中性粒细胞区左侧范围有一高大的细胞峰。,原始、幼稚白细胞增多,中间细胞（单个核细胞
6、）,单个核细胞（中间细胞）,（三）血小板直方图临床应用 1. 红细胞碎片 可干扰血小板直方图2. 血小板聚集 直方图峰左侧起点较高MCV和RDW正常，可排除小红细胞干扰3. 小红细胞干扰 峰右侧离横坐标较高，呈脱尾状。4. 小血小板 峰左移，MPV偏小。血涂片可见较多小血小板。,血小板直方图,大血小板增多,联合检测型血细胞分析仪,一、容量、电导、光散射（VCS） 体积 电阻抗 血细胞计数、体积测量 电导性 电磁探针 内部结构 光散射 激光器 颗粒的构型、质量,Coulter maxm,容量、电导、光散射（ VCS）检测,VCS 计数技术可使血细胞未经任何处理，在与体内形态完全相同的自然状态下得
7、出检测结果。首先在标本中加入只作用红细胞的溶血剂使红细胞溶解，然后加入抗溶血剂起中和前溶血剂的作用，使白细胞表面、胞质及细胞大小等特征仍然保持与体内相同状态，接受VCS三种技术同时检测,检 测 原 理,体积（V）测量使用的是电阻抗法，脉冲峰大小决定细胞体积，脉冲的数量决定于细胞数量电导性（C）根据细胞壁能产生高频电流的性能采用高频电磁探针，测量细胞内部结构，细胞核、细胞质的比例，细胞内质粒大小和密度光散射（S）在1070对每一个细胞扫描分析，提供细胞结构（核分叶、核形态），特别是对细胞颗粒的构型和质量的鉴别,三维分析技术,将检测过的8,192个细胞分布到一个以V、C、S为三维坐标的空间内，显示
8、出细胞群特征。高智能的计算机软件分析细胞群的位置、相对密度、轮廓和大小。三维坐标的数据分析位点多过16106个。,联合检测型血细胞分析仪,二、电阻抗、射频、细胞化学嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统淋巴、单核和粒细胞检测系统幼稚细胞检测系统,SE-9000,淋巴、单核和粒细胞检测系统,采用电阻抗与射频联合检测直流电及射频两种电流直流电不能透过细胞浆，仅能测量细胞大小，而射频可透入细胞内，测量核大小及颗粒的多少，因此细胞进入小孔时产生两个不同的脉冲信号脉冲的高低分别代表细胞的大小(Dc)和核及颗粒的密度(RF)，以DC信号为横坐标，RF为纵坐标，就可根据两个信号作为一个细胞定位于二维的细胞
9、散射图,幼稚细胞检测系统,原理 幼稚细胞膜上脂质较成熟细胞少，在细胞悬液中加入硫化氨基酸，结合在幼稚细胞上的氨基酸较成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂，成熟细胞溶解，而幼稚细胞不受破坏,三、多角度激光散射、电阻抗 检测细胞在多个角度的散射光的强度，反映细胞的大小、核形、核质比以及颗粒的性质,联合检测型血细胞分析仪,SF-3000血细胞分析仪,多角度激光反应,细胞分类原理 采用半导体激光及流式原理从两个角度分析白细胞，低角度（16）散射光分析白细胞体积大小，高角度散射光（820）分析白细胞的内部结构,内部,1-6,8-20,四、激光与细胞化学检测原理 Bayer ADVIA 120利
10、用激光散射和过氧化物酶染色技术白细胞计数及分类嗜碱性粒细胞/分叶核粒细胞测量红细胞/血小板测量血红蛋白测量,联合检测型血细胞分析仪,ADVIA 120,过氧化物酶通道,嗜碱细胞分叶核通道,嗜碱细胞/分叶核通道白细胞分类原理图1.噪音 2.幼稚细胞核 3. 单个核白细胞 （单核细胞、淋巴细胞） 4.嗜碱性粒细胞 5. 可疑嗜碱性粒细胞 6.饱和度 7.多核白细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞）,血小板检测原理,网织红细胞检测原理,四、方法学评价 （一）仪器类型和特点 1.单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点 （1）检测参数：红细胞、白细胞、血小板 （2）白细胞分类 （3）直方图 （4）报警(flag)功
11、能：文字、图标,2. 综合光学电学技术血液分析仪特点 （1）检测参数：红细胞白细胞血小板网织红细胞幼稚细胞,（2）白细胞分类五分类，准确性较三分群血液分析仪高。 （3）直方图和散点图：红细胞直方图白细胞直方图血小板直方图白细胞分类散点图。（4）报警功能：文字、图标,3.自动化程度 操作过程：半自动、全自动储存信息：质量控制：质量控制软件、显示质控图形至今，血液分析仪还只能用作健康人血液筛检之用，尚不能完全代替显微镜功能。,(二)仪器性能评价（ICSH） 1. 可比性 (comparability) 指血液分析仪测定结果，与常规方法所测结果相比较。显微镜法是血细胞检验基础。P0.05有可比性。P
12、0.05无可比性结论：计数细胞越多、选用吸管、计数盘越多，计数结果接近真值。实际工作中，镜检法很难达到此要求。,经严格校正的血液分析仪：计数细胞多操作步骤标准化精确性高（ CV可2%）准确性较高,2. 准确性 (accuracy) 准确性是指测定结果与真值一致性的程度。3. 总重复性( overall precision ) 指同一份标本多次测量的结果接近的程度。重复测定1份抗凝静脉血10次，计算CV值。,4.精密度 (precision) 批内（within- batch）精密度：同一批样本重复测定结果的评价。批间(between-batch)精密度：对两批或两批以上样本重复测定结果的评价。 携带污染率(carry over)：连续测定1份高值样本3次（i1、i2、i3）再测定1份低值样本3次（j1、j2、j3） 携带污染率（%）（j1-j3）/（i3-J3）,精确度和准确度,5. 线性范围 指测定值与稀释倍数是否呈比例关系。线性关系范围越宽越理想。P 0.01, 非线性相关。 P 0.05，未偏离线性。,（三）影响直方图变化的因素 1.仪器因素血细胞体积大小仪器阈值孔电压 2.试剂因素稀释液：导电率、渗透压、离子强度溶血剂：种类、浓度、用量和溶血时间,3.操作人员技能：高素质技术培训上岗前要仔细阅读随机手册掌握ICSH推荐的仪器性能评价方法全程质量控制,
