1、血液常用检查,一、红细胞计数二、血红蛋白测定三、红细胞形态学检查四、白细胞计数五、白细胞分类计数六、白细胞形态学检查七、血小板计数八、血小板形态学检查,红细胞计数,一,血红蛋白测定,二,红细胞形态检查,三,第二节血液常用检查（一）,教学目标,掌握红细胞计数、血红蛋白方法熟悉红细胞形态特点了解红细胞计数、血红蛋白测定临床意义,红细胞的发育过程,造血干细胞 早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞脱核网织红细胞成熟红细胞,红系祖细胞原始红细胞,（有丝分裂）,48h,成熟红细胞,铁 铁代谢原卟啉 胆色素代谢珠蛋白 蛋白质代谢,衰老红细胞,红细胞的发育过程,120天,6,检测方法1.手工显微镜法2.血液分析仪法
2、,一、 红细胞计数,7,1.手工显微镜法（1）血液分析仪的校正 （2）适用基层医疗单位和分散就诊患者（3）费时、重复性差，准确性取决操作者技术水平 2血液分析仪法 操作简便、重复性好，适用大批量集中检测准确性取决于仪器性能及工作状态，定期校准、质控,方法学评价,手工显微镜法,8,定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。,9,改良牛鲍计数板,计数板,压线细胞的计数原则：,数左不数右，数上不数下,12,血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算,计数区域 计数细胞种类 换算方式（以细胞个数/
3、L计）,四角4个大方格 白细胞 N/410稀释倍数106四角及中央5个中方格 红细胞、血小板 N510稀释倍数106两侧计数室四角及中央 嗜酸性粒细胞、体 N稀释倍数1065个大方格共10个大方格 腔液细胞、精子,13,红细胞稀释液组成与作用,稀释液 组成 作用 备注,Hayem液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 调节渗透压、增加红细 胞悬浮性和防腐作用,高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集,枸橼酸钠稀释液 NaCl、枸橼酸钠、甲醛 NaCl和枸橼酸钠调 节渗透压 ，枸橼酸钠 具抗凝，甲醛防腐,生理盐水 生理盐水 急诊时用1%甲醛生理盐水 甲醛、生理盐水 急诊时用,14,1.准备计数板2
4、.加稀释液：2ml3.加血：10l混匀4.充池5.计数6.计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L结果报告方式：X. X1012/L,红细胞计数操作,15,成年：男性（45.5）1012/L 女性（3.55.0）1012/L新生儿： （6.07.0）1012/L,参考值,16,1.分析前质量控制患者准备、标本采集、存储温度和时间2.分析中质量控制 计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响 3.分析后质量控制结合临床资料,质量控制,血红蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 组成,二、血红蛋白测定,珠蛋白：4条，种属特异性亚铁血红素：4个，无种属特异性,亚铁血红素结构示意图,O2,
5、HbA： 22 成人占95%以上,HbA2： 22 成人约占23%,HbF(胎儿Hb)：22 成人1%以下,每个 Hb 分子由 2 条类肽链和 2 条非 类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素,HbO2(氧合血红蛋白),各种血红蛋白衍生物(据铁原子第六配位键的结合情况),Hbred(还原血红蛋白),HbCO(碳氧血红蛋白),Hi (高铁血红蛋白),SHb(硫化血红蛋白),主要成分,少量,与氧结合,未结合,与CO结合,Fe2Fe3,与S结合,21,氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法碱羟血红蛋白法叠氮高铁血红蛋白测定
6、法溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）,检测方法,一. 原理,Hb,CN,氧化,HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。,HiCN,Hi,注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化,氰化钾 0.05g高铁氰化钾 0.2g磷酸二氢钾 0.14g非离子表面活性剂 1.0 ml蒸馏水 加至1000 ml,二. 试剂,HiCN转化液(文齐液),调pH7.07.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。,氧化,调节pH,促溶,防混浊,提供CN-,三. 方法,4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出K值后计算。 KHb（g）/A,1. 5.0 ml Hb转化液
7、血20ul,混匀,静置5min。,2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化 液调零，测定吸光度“A”。,3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直 接计算Hb浓度。,氰化高铁血红蛋白测定法,25,血红蛋白浓度计算公式：Hb(g/L)=A540HiCN/4464458/1000251 =A367.7A540HiCN：测定管吸光度44：毫摩尔消光系数64458/1000：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数,三. 方法,4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方 法绘制标准曲线，或求出K值后计算。 KHb（g）/A,1. 5.0 ml Hb转化液血20ul,混匀,静置
8、5min。,2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化 液调零，测定吸光度“A”。,3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直 接计算Hb浓度。,氰化高铁血红蛋白测定法,Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 150 0.385 200 0.523,K=Hb/A = 500/1.301 = 384.32,Hb=K A,氰化高铁血红蛋白测定法,1.KCN为剧毒药品，防污染。2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中。 否则CN-下降，结果偏低。3.分光光度计应定期校正并使用 配套的比色杯。4.标准曲线或K值应定期校正。,四. 注意事项,氰化高铁血红蛋白测定法,29,血红蛋白,S
9、DS-Hb,SDS,540nm,血红蛋白浓度,吸光度,十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法,方法学评价,HiCN法,SDS-Hb法,优点：操作简便；显色快，结果稳定。,缺点：氰化钾有剧毒； 高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； HbCO转化慢。,参考方法,优点：操作简单；结果稳定；无公害。,缺点：摩尔消光系数未确定； 破坏白细胞； 质量差异大 。,次选方法,如何采用SDS-Hb法进行血红蛋白测定？,1.HiCN法绘制标准曲线,2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制,1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法 测定吸光度，并求出其Hb浓度。,2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。,3)以4
10、份标本Hb浓度为横坐标，SDS-Hb法测得 的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。,32,分析前质量控制：同红细胞计数分析中质量控制技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正HiCN转化液：棕色玻璃瓶HiCN参考液：关键质控物：室内质控分析后质量控制：同红细胞计数,质量控制,33,成年：男性：120160gL； 女性：llO150gL。新生儿：170200gL。老年(70岁以上)： 男性：94122gL；女性87112gL。,参考值,34,轻度贫血，成年男性Hb120g/L， 成年女性110g/L；中度贫血90g/L；重度贫血60g/L；极度贫血30g/L。,临床意义,35,三、
11、红细胞形态检查,红细胞大小、形态、染色和内涵物的是否异常,1显微镜分析法 采用人工显微镜法血涂片染色观察， 是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。 2计算机图像分析 建立统计模型，以正常红细胞形态 为参比、作出分析， 可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。3. 血液分析仪法 提供红细胞数量及其他相关参数，对异 常结果报警， 但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。,检测原理和方法学评价,1.有合格的血液细胞形态检验人员 2.选择细胞分布均匀区域进行镜检 3.注意完整规范的检查顺序 低倍镜 细胞分布和染色 油镜 细胞形态,是否存在其他异常细胞 4减少人为影响因素 全片浏览,质量保证,38,39
12、,正常红细胞,双凹圆盘形大小均一，平均7.2m (6.7-7.7m)；淡粉红色，Hb充盈良好，中央部位为生理性淡染区，大小约为直径的13；胞质内无异常结。,40,外周血红细胞形态变化,红细胞大小异常 小、大、巨、大小不均红细胞性状异常 球、椭圆、靶、口、镰、棘、钝锯齿、泪滴、裂片、形态不整血红蛋白充盈度与着色异常 低色素、高色素、嗜多色、着色不一红细胞内异常结构 嗜碱性点彩、豪焦小体、卡波环、寄生虫 、疟色素红细胞排列异常 缗钱状形成、自凝现象有核红细胞,1.红细胞大小异常 (1)小红细胞： 指直径小于6m的红细胞。提示血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。(2)大红细胞：指
13、直径大于l0m的红细胞，常见于巨幼细胞性贫血，也可见于溶血性贫血、恶性贫血等。,(3)巨红细胞：指直径大于15m的红细胞。最常见于巨幼细胞性贫血 。(4)红细胞大小不均：指同一患者的红细胞之间直径相差一倍以上。大者红细胞直径可达12m，小者直径仅2.5m。常见于严重的增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为明显,2红细胞形态异常 (1)球形细胞：该红细胞在血液中为球形，而在涂片上则显示细胞中心着色深浓，体积较小，有球形之立体感。 (2)椭圆形细胞：红细胞呈椭圆形、杆形，两端钝圆，长轴增大，短轴缩短。见于遗传性椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正
14、常人血液中约占l，但不超过15。,(3)靶形细胞：红细胞中心部位和细胞周缘染色较深，其间为不染色的苍白区环，形如射击之靶 。常见于各种低色素性贫血，尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病，也见于阻塞性黄疽、脾切除后状态。 (4)口形细胞：红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈扁平状，颇似张开的口形或鱼口。常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引起的贫血，也可见于乙醇中毒、某些溶血性贫血及肝病患者等。正常人偶见(4)。,(5)镰形细胞：红细胞外形呈镰刀状、线条状。镰状细胞贫血(HbS-S，HbS-C)和镰状细胞特性(HbA-S)的血标本，在缺氧的条件下，有大量镰细胞。(6)棘形细胞：红细胞表面有针尖状突
15、起，其间距不规则，突起的长度和宽度可不一。多见于遗传性或获得性-脂白缺乏症，可高达7080%；也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。,(7)新月形红细胞：红细胞残缺不全，体积大，状如新月形，直径约20m 。见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。(8)泪滴形细胞：成熟红细胞形如泪滴或梨状。多见于贫血、骨髓纤维化症时，偶见于正常人。,(9)缗钱状形成：红细胞表面电荷发生改变，而使其互相连接如缗钱状。(10)裂红细胞：为红细胞碎片或不完整的红细胞。见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。正常人血涂片中裂片细胞小于2%。,(11)红细胞形态不整 指
16、红细胞形态发生各种明显改变，出现不规则的奇异形状，如豆状、梨形、蝌蚪状、麦粒状和棍棒形等。此种细胞在某些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。,3染色异常 (1)正常色素性：见于正常人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。 (2)低色素性：红细胞的生理性中心浅染区扩大，提示其血红蛋白含量明显减少。常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞性贫血、某些血红蛋白病。,(3)高色素性：中心淡染区消失，着色较深，胞体成红色，胞体大。最常见于巨幼细胞性贫血。 (4)嗜多色性：它是刚脱核而尚未完全成熟的红细胞，故其细胞体积较大。多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃。尤见于溶血性
17、或急性失血性贫血。,4红细胞内出现异常结构 (1)嗜碱性点彩红细胞：指在瑞氏染色条件下，成熟红细胞或幼红细胞的胞质内出现形态不一的蓝色点状物，即核糖核酸(RNA)，属于未完全成熟红细胞，其颗粒大小不一、多少不等。常作为铅中毒诊断筛选指标。,(2)豪焦小体(H-Js body)：成熟红细胞或幼红细胞的胞质内含有一个或多个直径为l2m的暗紫红色圆形小体。可见于巨幼细胞贫、血脾切除术后、无脾症、脾萎缩、脾功能低下、红白血病和某些贫血患者。 （3）卡波环(Cabotring)：红细胞的胞质中出现的紫红色细线圈状结构，呈环形或8字形。 可见于白血病、巨细胞性贫血、增生性贫血、铅中毒或脾切除后。,(4)有核红细胞 即幼稚红细胞。 溶血性贫血 急、慢性白血病 骨髓纤维化 脾切除后,
