1、血型鉴定与交叉配血,医学检验系 陈丽华,一、ABO血型鉴定,盐水凝集法玻片法试管法凝胶微柱法,检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判断血型。 常规的方法包括正向定型与反向定型正向定型：已知抗体特异性的血清检查红细胞抗原反向定型：已知血型红细胞检查血清抗体,血型鉴定原理,表示凝集，表示无凝集,对抗血清的要求,高度特异，只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集，高效价，抗A血清效价在1:128以上，抗B血清效价在1:64以上。高亲和力，15秒内出现凝集，其强度为3分钟时凝块1mm。无冷凝集素。无菌。分离血清后56，30min灭活。,ABO 血 型 鉴
2、定,1生理盐水凝集法,ABO血型抗体一般是IgM，属于完全抗体IgM抗体分子链较长，能克服红细胞表面排斥力，同时分子量较大，它能与相应抗原特异性结合，在生理盐水中发生肉眼可见的凝集现象。,ABO 血 型 鉴 定,原理,IgM抗体凝集红细胞示意图,IgM在盐水介质中产生凝集,玻片法：操作简单，不需要离心，适于大规模血型普查。反应时间长，易忽略较弱的凝集而导致定型错误。不适于反定型。,ABO 血 型 鉴 定,镜检证实,ABO 血 型 鉴 定（玻片法）,抗A血清1滴,抗B血清1滴,加5红细胞悬液1滴，混匀,连续转动玻片,15min,凝集,无凝集,抗A+B血清1滴,试管法：需时间短，适用于急诊定型。可
3、正反定型。可发现亚型或较弱抗原抗体反应，结果判断可靠，为常规检查方法。,ABO 血 型 鉴 定,正反定型结果不一致的解决办法,首先重复试验，如果仍然不符继续下列试验。重新采集新鲜血液标本，以纠正因污染或样本错误造成的不符合。多次洗涤被测红细胞和标准红细胞，除去可能会影响试验结果的血浆中或红细胞保存试剂中的化学成分。用抗A1、抗A+B检测红细胞。,ABO血型鉴定（盐水法）注意事项,如怀疑血清中有抗A1，可用数份A2红细胞标本进行检验。如果试验结果未见凝集，应将反应管至少在室温和40分别放置30min，用显微镜检查。若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型不符，可进一步做木瓜酶试验、直接抗球蛋白试验、吸
4、收放散试验等加以鉴别。,正反定型结果不一致的解决办法,ABO血型鉴定（盐水法）注意事项,2凝胶微柱法,凝胶具有分子筛效应和亲合效应亲合效应：红细胞抗原与相应抗体结合分子筛效应：低速离心后，凝集红细胞悬浮在凝胶中，而未被抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。结果观察：肉眼/血型分析仪,ABO 血 型 鉴 定,操作标准化，结果特异、准确可靠，重复性好、灵敏度高。可手工、半自动及全自动操作不足之处：需要特殊试剂和离心机成本较高。,ABO 血型鉴定（凝胶微柱法）,【原理】凝胶具有分子筛效应和亲合效应，在微株凝胶介质中红细胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合
5、的红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。【器材】微量吸样枪，一次性吸头，微柱凝胶卡专用水平离心机。【试剂】 特异性凝胶微柱卡,ABO 血型鉴定（凝胶微柱法）,【操作】（1）将被检者红细胞（不用洗涤）配成23生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶微柱卡的微管反应腔内加50L.（2）立即水平离心1000r/min, 10min.（3）观察及判断血型结果阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。（4）报告方式：同生理盐水法。,ABO 血型鉴定（凝胶微柱法）,注意事项,离心机选择：一般使用微柱凝胶卡专用水
6、平离心机。使凝集复合物不偏向一侧，特别是阴性结果不偏向管底之一侧，以免造成弱阳性假象。操作：蒋待检者的稀释后的悬红用微量加样枪分别加在A.B.D和阴性对照孔各50ul离心：为了应用不同离心半径和不同离心机进行凝胶试验，应通过试验设定每台离心机的最佳时间和速度。,ABO 血型鉴定（凝胶微柱法）,ABO血型鉴定错误可以引起严重的后果。鉴定结果错误因素主要有技术问题及ABO血型本身的问题。,二、交叉配血,交叉配血是在输血前必须做的试验。交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血无凝集才能输血。,（一）交叉配血的重要性,（二）交叉配血一些基本概念,概念：是检查供血者与受血者是否
7、含有不相合的抗原和抗体成分的试验，主要是检查受血者血清中有无破坏献血者RBC的抗体。供血者红细胞与受血者血清反应（主侧交叉配血） 受血者红细胞与供血者血清反应（次侧交叉配血）,献血者 受血者红细胞 红细胞血清 血清,主侧,次侧,交叉配血目的,发现ABO血型鉴定的错误。,发现不规则凝集素。如冷凝集素。,发现其他血型抗体和一些不规则抗体。,（三）交叉配血方法,1、室温盐水配血法（只能检出IgM型血型抗体）2、聚凝胺法3、抗人球蛋白法4、蛋白酶法5、微柱凝胶法,方法选择原则,无输血及妊娠史者，只需作盐水配血。,有输血史，妇女有原因不明的流产史及新生儿溶血病者，应用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝胺介质法。,
8、有多发性骨髓瘤，进行性结核，肝损伤，输过右旋糖酐的病人，为避免假阳性，作抗人球蛋白配血。,1、室温盐水配血法,【原理】天然IgM类血型抗体与对应红细胞在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞（主侧）以及受血者红细胞与供血者血清（次侧）之间有无凝集的现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的现象。,交 叉 配 血,判断配血是否相合ABO同型配血，主、次侧均无溶血及凝集，血型相合，可以输血；主、次侧任何一管发生溶血或凝集，不可输血，应查找原因。异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，需查找原因,交
9、 叉 配 血（盐水凝集法）,报告方式（1）受血者xxx（X型）血清供血者xxx（X型）红细胞 凝集与否及强弱程度（2）供血者xxx（X型）血清受血者xxx（X型）红细胞 凝集与否及强弱程度（3）受血者xxx与供血者xxx配血是否相合,交 叉 配 血（盐水凝集法）,主侧配血管,次侧配血管,DC1滴,PS1滴,PC1滴,DS1滴,1000r/min,离心1min,观察上层液有无溶血,轻摇试管,肉眼观察有无凝集,有凝集（复查）,无凝集,镜检证实,交叉配血盐水介质法操作示意图,【注意事项】,1.如果对患者的输血史或妊辰史不明，必须使用48h内的标本。2.不能使用溶血标本。3.配血后，受血者/供血者的全
10、部标本须于26冰箱保存7d以备复查。,交 叉 配 血（盐水凝集法）,【方法学评价】,本法简易、经济、快速，缺点是仅用于检查ABO血型系统的IgM血型抗体是否相配，不能检出不相配的IgG血型抗体。,交 叉 配 血（盐水凝集法）,2、聚凝胺介质配血法（MPT）,【原理】：聚凝胺是带有高价阳离子的多聚季氨盐，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，减少细胞间排斥力，缩小了其间之距离，出现非特异性凝集。低离子强度溶液降低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。枸橼酸盐解聚液可消除聚凝胺的正电荷，使非特异性凝集消散，但IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的特异性凝集不会散开。,
11、主侧配血管,次侧配血管,Dc1滴,PS1滴,PC1滴,DS1滴,主侧、次侧配血管,凝集,不凝集：试剂无效,交叉配血凝聚胺介质法操作示意图,低离子溶液0.6ml,混匀,加凝聚胺2滴，混匀15s,弃去上清,1000r/min,离心1min,加解聚液2滴,镜检判断配血是否相合,1分钟,【方法学评价】,聚凝胺介质法可加快凝集反应速度，使原来在盐水介质中不能凝集红细胞的抗体发生凝集，提高反应灵敏度，能检测IgM、 IgG等引起溶血反应的几乎所有规则与不规则抗体，适用于各类输血患者的配血。故该法具有快速、灵敏、结果可靠、能捡出完全抗体及不完全抗体等优点。,交 叉 配 血（MPT）,【方法学评价】本法是确定
12、不完全抗体最可靠的方法，但操作较繁琐，需多次洗涤，需要时间长，试剂较贵，故始终未能成为临床常规的配血方法。,交叉配血（抗人球蛋白法）,交叉配血试验的临床意义,1进一步验证受血者和供血者血型鉴定是否正确，发现ABO系统的不规则抗体，以避免血型鉴定错误而导致的输血后的严重溶血反应。,2发现其他的血型抗体 受、供血者如果ABO血型相同，但其他血型不同时，在交叉配血时也可出现凝集，为避免异型血输入后的溶血反应，在目前许多实验室都不能进行稀有血型鉴定的情况下，全靠交叉配血发现这些血型的不同及免疫抗体的存在。,3.当受血者一次输血超过16002000m1，或在48小时内输入5L或更多血时,称为大量输血,这
13、时就需要多个供血者的血液,在配血时不但受血者和供血者之间要交叉配血,多个供血者之间也应互相交叉配血,为保证受血者的安全，要求主侧、次侧及献血员之间交叉配血均不凝集时，方可输血。,4.在急诊配血时, 对急需情况可采用试管法配血，在15min内发血。对特急情况应立即发给O型浓缩红细胞或低凝集价的O型全血。然后尽快复查血型和配血，如表现有配血禁忌，应立即通知负责医师及时处理。,交叉配血试验的注意事项,1用于交叉配血的病人（受血者）血液标本应该是抽取的新鲜血，供血者的标本是刚从血袋剪下来的原已加热封闭两端小管的血液。 2采用试管法作交叉配血试验，最好不用玻片法。,3用生理盐水洗涤红细胞去除血浆，预防纤
14、维凝块的形成。4配血管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应同时还有补体参与，是配血不合的严重情况，应十分重视。,5盐水配血试验阴性，但有反复输血史或妊娠史的受血者，应加酶法、抗人球蛋白法等配血。 6为确保输血的安全，应输同型血。,三、血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,（一）责任性错误 血型鉴定和交叉配血的技术并不复杂，因配血错误而导致输入不合血液的事故中，大多数是因为不严格执行操作规程或操作过程中精神不集中所致，因此为杜绝责任性错误首先应该熟悉操作规程并严格执行。,（二）假 阴 性1.标准血清不符合要求2.被检红细胞抗原性减弱3.红细胞悬液浓度配置不当4.将溶血反应误认为不凝集5.血型物质的
15、中和作用,（三）假 阳 性 1.红细胞呈缗钱状排列 2.冷凝集 3.全凝集与多凝集 4.类B抗原 5.自身免疫性温性抗体,冷凝集,冷凝集素是指冷反应型抗红细胞抗体，这些自身抗体只能在低温时与红细胞膜相关抗原结合。疑为存在冷凝集时，正定型采用经37度生理盐水洗涤的红细胞3次，反定型采用患者经4度放置1hr后分离的血清，将反应管放37度水浴5min后观察结果。交叉配血存在冷凝集现象时，仍然认为交叉配血是相合的，可以输血。但需提醒临床保温输血。,红细胞呈缗钱状排列,某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相对或绝对性增高，使红细胞成钱串状排列，外观类似凝集，真与假的区别是在镜下观察
16、时，假凝集红稀薄成钱串状排列，形状基本完整，加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串状排列消失，而真凝集加等渗盐水红细胞不会散开。,全凝集或多凝集现象,正常人红细胞上有T抗原，血清中有抗T，但因红细胞表面存在的唾液酸使T抗原无活性，如果红细胞被细菌污染，细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，可与多数人血清凝集称为多凝集，如与所有人血清都凝集称为全凝集。出现这两种现象时可用多份AB型血清加以证实，因此种现象与AB型血清也发生凝集，应重新抽血。,交叉配血试验中的不配合问题,首先应考虑受血者和供血者的血型鉴定是否有错。必须重新鉴定血型，必要时进行Rh血型鉴定及抗体筛选。,其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未知的同种抗体存在。,交叉配血试验中不配合的处理,2、与多个献血者配血不合，如为盐水介质配血法，应考虑 ABO血型鉴定是否有错。必须重新鉴定血型 ABO亚型不合，做亚型及不规则抗体的鉴定。非特异性凝集。如冷凝集。,如为抗人球蛋白配血不合，应考虑Rh或其他系统免疫性抗体的存在，应做Rh血型鉴定并用系列标准RBC检测病人血清，确定抗体性质。,1、与个别同型献血者不能配合，可另选同型献血者进行配血。,
