1、1,血栓与止血检验的质量控制,广州市第一人民医院 徐邦牢 ,主要内容,检测系统的性能要求室内质控的有关问题血栓与止血的质量控制,一、检测系统的要求,血凝仪的试剂、校准品、消耗品配套使用： 使用非配套分析系统的实验室应按照NCCLS-EP9的要求与配套分析系统的结果进行比对，以验证分析系统的有效性。仪器使用前的评价： 验证其性能是否能达到制造商的性能要求（制造商规定的性能要求必须满足临床需要）。如：精密度、准确度、携带污染、可报告范围等。,3,“良好的系统性能源自优秀的检测系统品质”,检测方法的性能由不同的参数决定 Specificity 特异性 Sensitivity 敏感性 Detectio
2、n limit 检测范围 Linearity 线性 Precision 精密度 Accuracy 准确度,二、室内质量控制的方法及要求,5,质控品的选择：制定程序和方法，以评价质控品的质量和适用性。,质控品的浓度水平：应至少使用2个浓度水平 （含正常和异常水平）,质控项目：所有检测项目均应开展,质控频度：检测当天至少1次,室内质量控制,6,质控品均值的确定： 20个测定值，至少10天获得 （每天上下午各测一次，与上批号交叉） 试剂更换新批号或仪器进行重要调整时，应重新确定均值。,标准差： 采用前一个月或前3个月的平均标准差,制造商提供的数据仅供参考,室内质量控制,7,失控的判断规则：至少使用1
3、3s规则，多种质控规则的使用可提高误差捡出概率。,失控报告：描述失控的情况、核查方法、原因分 析、纠正措施及纠正效果的评价,质控数据的管理：原则上每月统计1次， 至少应保存2年。,血栓与止血的质量控制,实验室条件的选择：仪器的品牌好的品质才有好的质控实验结果。当然，品质也决定了产品的价格。 仪器的运行环境 应远离热源、震源，相对湿度80，最适温度15 30 ，配备UPS，电压220 V10 V。 这些因素直接影响仪器的运行状态或影响仪器的光电检测信号而影响测定结果。,8,选择配套的、系统化的产品 血凝试剂室内定值质控品校准品检测杯清洗液,9,血栓与止血的质量控制,血栓与止血的质量控制,试剂的保
4、存：试剂的运输和保存应严格限制在2 8 。 血凝检测中所使用的试剂盒，提供了根据不同反应而加入不同的凝血因子，均为生物制剂，容易受环境因素影响而降低其生物活性，甚至失去活性而丧失引起凝血反应的能力。,10,血栓与止血的质量控制,试剂的溶解：注射用水复溶；复溶过程中注意细节问题。 三步。手不能接触橡胶塞；干净的移液管，不建议用加样枪；移液管口不能接触瓶口；注射用水要分装使用；不能剧烈振摇，防止产生气泡；小于1ml不能颠倒混匀；五分钟后再手搓混匀后再放半小时再手搓混匀后，即可上机使用；不同试剂，复溶上机稳定时间有差异；超过趋定保质时间的试剂不能再继续使用；并标明复溶时间。不能反复冻融，反复冻融会使
5、试剂中的因子失活而影响测定。不同厂家不同批号的试剂不能混用。PT需放入磁棒，保证试剂能充分混匀。 根据工作量配置足够的试剂不同批号的试剂不能混用，残余的试剂不能倒入新试剂中。如测定中更换不同批号试剂要及时重新运行定标曲线。,11,血栓与止血的质量控制,及时执行定标选择配套的标准品更换新批号试剂以后每一批标本的测定，如：VIII、IX因子的测定。 或使用厂家提供的预定标曲线,12,血栓与止血的质量控制,室内质控正常及异常值两种质控品都需要做每天运行可以分装，但不可反复冻溶；快速解冻。复溶上机8小时后不能再用。同一批号的质控品至少采购半年的需求量,13,血栓与止血的质量控制,仪器的保养和维护周保养
6、、月保养、季保养、每半年大保养定时测试和校正仪器的性能温度的定期检查校正光源灯的保养或更换保持机械和滤光片、光路的清洁 确保仪器良好的运行状态。,14,血栓与止血的质量控制,先进仪器设备需要高素质人员去使用，要有工作责任心。只有对仪器原理、性能、注意事项及影响因素等方面的知识全面的了解，才能较好使用仪器，保证质控实验结果的可靠性。 有必要指定专人负责,15,血栓与止血的质量控制,正常对照血浆要求采集20份以上年龄在18岁55岁之间的健康男女个体，删除服药者。须在平静状态下采血血液经抗凝离心后，分离血浆等量混匀，分装小瓶，冻存于-80 备用或冷冻干燥。,16,血栓与止血的质量控制,抗凝剂：0.1
7、09mol/L（3.2%）枸橼酸钠 国际血液学标准化委员会推荐，因为V因子和因子在此抗凝剂中更为稳定。另外，用枸橼酸钠抗凝的血浆做APTT试验，其对肝素敏感性远远高于草酸盐抗凝血浆。抗凝剂:全血=1:9一定要准确，抗凝剂在血标本中的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，而影响实验结果。收集管：硅化玻璃管或塑料管，最好使用真空法商业采集管，不推荐使用注射器,17,血栓与止血的质量控制,采集过程：加压：使用止血带或不太紧的血压带，时间不超过1分钟最佳采集状态：病人处于休息，平静状态；静脉穿刺没有造成明显损伤,18,血栓与止血的质量控制,标本采集舍弃第一毫升血或不使用第一管血确保血液迅速均匀地流动抽出的静
8、脉血必须立即轻微上下颠倒3-4次，保证与枸橼酸钠充分的混合,19,血栓与止血的质量控制,离心离心应当在采血后尽快的进行（500l，有盖；冷冻的过程应当是尽可能的快；-20 对短期储存来说是足够了；超过一个月则-80 较理想；冷冻过的标本必须在+37 解冻15min；不允许反复冷冻,24,三、血凝仪之间的比对试验,25,条件：同一个系统（仪器、试剂）凝血实验不同系统为什么不能比对？ 不同仪器的检测原理不同 凝血反应为瀑布式，对不同试剂敏感性不一 无调节系数（凝血反应没规律性）,解决方法：建立各自的参考区间、验证等。,血凝仪之间的比对试验,26,实验方案：准备10份新鲜血浆样本，浓度覆盖生物参考区
9、间，整个实验应在2h内完成。在基准仪器和比对仪器上检测这10份样本，计算比对仪器和基准仪器之间的结果偏差百分比。,要求：以CLIA88允许范围的1/2作为合格 （以相对稳定的仪器作为基准机） （PT、APTT:15%，FIB:20%),27,参考范围的验证,试验方案：测定40份（男女各半）健康 人员新鲜血样本。要求：判断检测结果是否落在本室设定 的参考区间内（95以上）。,采血顺序,血培养凝血管血清管 肝素抗凝管血常规管血糖管,美国BD公司推荐多管采集顺序,凝血管总是放第二，当只有一只凝血管时建议先采集一只空管丢掉再采集凝血管。 因为，当针头进入血管前要经过组织，此时组织液易进入针管。血液混入
10、组织液后即刻启动外源凝血途径。,真空管“死腔”所致APTT偏差探讨,死腔：是指标本采集后管内尚留有的空间,血小板激活途径：与异物表面接触或死腔中气体,尽管管壁被硅化，仍有激活血小板的可能,血小板激活后释放：血小板第四因子（PF4),PF4功能：中和肝素 使监测肝素指标的APTT缩短,死腔在实际工作中存在的常见问题：,抗凝比例,标本的贮存,全血需在实验室规定的时间内离心并分离血浆； 若标本不能在4小时内检测，需分离出血浆并转移至洁净干燥的符合要求的试管中加盖保存于28。,当天不能检测的样本需在-20条件下保存，两周内完成检测； -70条件下的保存期限可达6个月。,将试管置于室温下时，试管口应加塞
11、否则将会因CO2的散失而导致pH值的改变。如果不能在4小时内完成所有试验，冷冻贮存少量血浆（0.51ml，最好在-70，或者当贮存时间较短时，可以置于-20条件下），在试验前将血浆于37下快速融化。如果只贮存了少量血浆，每次试验只融化一只试管内的血浆，这样就不会造成浪费。,标本的贮存,抗凝剂 枸橼酸钠，0.109mol/L 抗凝剂与血液比例严格按1：9 当Hct增高55%或25%时，用如下公式换算： 抗凝剂的用量（ml） =0.00185全血量（ml）100-Hct(%),特别要注意的是Hct增高的标本,抗凝剂,与草酸钠相比，有如下几点优越性：首先是因子和因子在枸橼酸钠中更为稳定，在一个研究中
12、发现，因子活性在标本被解冻后15分钟开始下降；另外，用枸橼酸钠抗凝的血浆做APTT试验，其对肝素的敏感性远远高于草酸盐抗凝血浆。当APTT试验用于监控接受肝素治疗的患者时，这一点显得非常重要。,六、凝血结果复查规则 PT 超过对照 3 秒 APTT超过对照 10 秒 FIB 低于1.5 g/L 而原发病正常者,重新抽血！,常见凝血异常的疾病抗凝治疗（口服华发令、高分子肝素）溶栓治疗、肝病、血液病、DIC,危急值的报告,目的：保证将检验危急值及时报告给临床，以便采取及时、有效的治疗措施，保证患者的医疗安全。 血栓与止血的危急值: FIB0.8g/L PT 20s 3P：阳性 APTT 80s PLT 20x109/L,36,谢谢大家！,
