1、梅毒实验室检测 工作概况和要求,安徽省皮肤病防治所 刘姝颖 2015年11月,主要内容,梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动,监测性病病种,梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹,性病实验室在性病防治中的作用,效果评价,临床服务,疫情监测,科学研究,实验室诊断,第十一条 省、市和县级疾病预防控制机构职责组织开展本行政区域性病实验室质量管理第十三条 开展性病诊疗业务的医疗机构职责开展实验室检测质量控制,5,性病防治管理办法,梅毒控制相关政策,卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）卫生部2011年2
2、月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案国务院2012年1月13日中国预防控制艾滋病五年行动计划（21011-2015年）,梅毒控制主要措施：提高梅毒实验室检测质量加强梅毒筛查力度,主要内容,梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测血清学检测,病原学检测,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（1）暗视显微镜检查 （2）镀银染色法
3、 （3）核酸检测意义：螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清学检测方法,(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验
4、(RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等,非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月， RPR/TRUST试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结合梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒现症感染和既往感染VDR
5、L试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。,梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。,梅毒螺旋体抗原血清学试验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,梅毒
6、螺旋体抗原血清试验临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验，排除RPR 假阳性。不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。不能作为疗效观察的指标。,梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）,17,*该结果解释不适用于胎传梅毒、神经梅毒,梅毒IgM抗体（TP-IgM）,IgM抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。IgM分子比较大，所以不能通过胎盘屏障。因此若在新生儿血中检测到IgM抗体是先天梅毒的诊断依据。目前已有商品化的TP-IgM检测试剂盒，检查到IgM抗体可作为对先天梅毒临床诊断的依据，其特异性较高，但敏感性较低。因
7、此，IgM阴性，不能排除先天梅毒感染。,18,梅毒实验室检测基本策略-血清学检测,19,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验,排除试验假阳性确证梅毒螺旋体现症感染,排除治愈的既往感染者确证梅毒螺旋体现症感染,？RPR：初筛试验 TPPA：确证试验,20,21,阳性,主要内容,梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动,梅毒实验室检测基本要求,一、人员 检测技术人员需经过上岗培训。接受上岗培训内容应包括：梅毒检测相关基础知识、梅毒实验室检测技术基本实验操作要求、结果解读及临床意义、质量保证与生物安全等。二、试剂 常规血清学检测应采用经国家
8、食品药品监督管理局注册批准的试剂。因不同厂家生产的同一种试剂的敏感性和特异性存在一定的差异，建议选择临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。所有试剂须严格按要求妥善保存，并控制在有效期内使用。,23,梅毒实验室检测基本要求,三、设备及环境 实验室应根据开展的方法配备基本的仪器设备,24,不同方法所需主要仪器设备,2014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果(非梅毒螺旋体抗原血清学试验),试剂简称 敏感性(%) 特异性(%) 上海科华 97.78 99.55 北京金豪 97.78 99.55 上海荣盛 96.67 100.00 厦门英科 95.56 98.18 北京万泰 91.11 98.64,201
9、4年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果(梅毒螺旋体抗原血清学试验-ELISA),试剂简称 敏感性(%) 特异性(%) 北京华大 100.00 100.00 北京万泰 100.00 100.00 北京现代 100.00 100.00 北京金豪 100.00 99.48 珠海丽珠 100.00 98.95 潍坊三维 100.00 83.25 上海科华 99.1 100.00 北京科卫 99.1 100.00 厦门英科 98.29 100.00 北京科美(化学发光) 100.00 100.00,2014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果(梅毒螺旋体抗原血清学试验-免疫层析法),试剂简称 敏感性(%)
10、特异性(%) 杭州艾博 99.15 100.00 北京蓝十字 99.74 92.15 Determin 99.15 98.95 广州万孚 98.29 100.00 厦门英科 98.29 98.43 北京万泰 97.74 90.58,主要内容,梅毒实验室检测概述重要性常用检测方法工作要求现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动,现场核查发现的不足与问题,使用不符合要求的实验室检测方法进行诊断实验室开展项目不全，未掌握各种试验的适应症，不具备诊断条件部分医院无开展TRUST试验的梅毒水平旋转仪，或无开展TPPA的微量振荡器实验室检测方法标注有误或不规范,现场核查发现的不足与问题,部分实验室缺乏原始
11、记录或登记不规范而无法查找核实报告病例的相关数据试剂来源多，质量难以保障多数医疗机构对仪器未定期校准和记录部分检验人员培训不足，操作台无标准作业指导书实验室检验人员与临床医生、疫情管理人员沟通不够,主要建议,制定性病实验室检测的作业指导书，放置在操作台加强仪器设备的校准与维护，确保正确的运转对检验人员开展培训,加强对性病检测方法和临床结果解释的培训规范实验室检测方法规范完善检测结果信息登记,检测结果登记示例,主要内容,梅毒实验室检测概述现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动开展现况申请流程,梅毒实验室室间质评活动,关于开展梅毒血清学实验室室间质量评价工作的通知(卫办疾控2011186号)要求
12、：自2011年始在全省范围内开展梅毒血清学实验室室间质量评价 ，各地认真组织辖区内县（区）级以上医疗机构参加全省统一组织的每年两次的室间质评,督促室间质评不合格的医疗保健机构实验室进行限期整改,梅毒实验室室间质评活动,具体参评项目TP（非）、TP（特TPPA）、TP（特ELISA）、TP(ELISA-S/CO值）、TP(特除ELISA、TPPA）。省临床检验中心（www.ahccl.org）负责统一发放全省质控标本（上下半年各一次）省皮肤病防治所负责结果的收集、分析、汇总、上报及反馈工作。,首次室间质评活动,2011年11月首次梅毒血清学室间质评，全省共129家二级以上医疗机构参加梅毒血清学室
13、间质评活动，81家合格，合格率62.79%2011年我省五个国家级性病监测点的11家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价活动，7家合格，合格率63.63%,2014年室间质评,全省梅毒实验室室间质评,219家二级以上医疗机构参加，191家医疗机构合格,合格率 87.21%。国家级性病监测点的十二家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价，参与率为100%，梅毒合格率91.67%、衣原体合格率100%，淋球菌83.33%,2014年我省梅毒室间质评参加率,2014年参加率指标：85 %,85 %,2014年我省梅毒室间质评合格率,2014年合格率指标：95%,2015年室间质评,省级梅毒实验室室
14、间质评, 208家二级以上医疗机构参加，183家医疗机构合格, 合格率为87.98%国家级性病监测点的十二家医疗机构参加全国质评，参与率100%，梅毒、衣原体合格率100%，淋球菌合格率66.67%，淋球菌距离国家提出合格率达85%还有很大差距,主要内容,梅毒实验室检测概述现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动开展现况申请流程,安徽省临床检验中心网站www.ahccl.org申请参控流程,1、账户申请,安徽省临床检验中心网站参控实验室登录窗口,信息维护 使用临检中心分配账号及密码登录“参控端”，首次登录需维护实验室基础信息，注意事项：所有事项务必仔细填写，建议填写两个不同手机号，活动信息多以短信发送。,按照全省统一安排及实验室需求，本年度910月份申请次年度活动，例如2015年910月底申请2016年安徽省EQA活动。活动通知将通过信件、短信等方式通知参控实验室。,2、项目申报,专业申报注意事项： 临床感染性疾病血清学标志物系列B专业包含HIV和TP两个项目，为配合相关活动开展，临床感染性疾病血清学标志物系列B分为B1（梅毒）和B2（艾滋）两个窗口上报。项目申报时务必两个都勾选。,3、后续事宜,按照全省统一安排参与相关活动。,谢谢,
