1、T细胞亚群结果的解读,山东省聊城市人民医院ICU 吴铁军,淋巴细胞分化图,按T细胞所处的活化阶段 初始T细胞（naive T cell） 效应T细胞（effector T cell） 记忆性T细胞（memory T cell）按T细胞表面受体（TCR）分类 + T细胞 + T细胞,按T细胞CD4和CD8分子表型 CD4+ T细胞 CD8+ T细胞 按T细胞的功能分类 Th（辅助T细胞） TS（抑制T细胞） Tr（调节T细胞）,T淋巴细胞的分类方法,外周血中各亚群占淋巴细胞总数的比例,60-80%,27-51%,15-44%,T淋巴细胞,CD4T淋巴细胞,CD8T淋巴细胞,淋巴细胞监测注重数量、
2、比例、功能相结合,血液分析常规检测,依据白细胞、淋巴细胞比例及计数绑定机体免疫状况，无法精确判断。,T淋巴细胞亚群比例检测,临床常用，但较片面,T淋巴细胞亚群数量,观察免疫细胞数值变化，评估免疫状况，通常采用流式细胞仪法，特别针对CD4的检测，已成为“金标准”。,功能、数量、比例结合,更精确评估机体免疫状态,1,2,3,4,目前临床主要可以做以下项目的检测,淋巴细胞亚群(T+B+NK)的比例和计数T细胞亚群(CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值）MHLA-DR（单核细胞HLA-DR)CD4CD25Treg（调节细胞）及Th17细胞（我们工作）,目前国内绝大多数医院没有开展淋巴细胞
3、计数项目,(BD)健康中国人参考范围,CD4+、 CD8+ T淋巴细胞的计数方法一（FCM),取100l全血，加三种不同荧光素标记的鼠抗人CD3、CD4、CD8McAb，阴性对照。加红细胞裂解液，溶血，离心，弃上清。用PBS洗1次，PBS重悬细胞，上机检测。FCM分析 电子计算机自动计算出阳性细胞百分率及总细胞计数。,简单、快速、相对精确,CD3+T细胞正常范围为：50-84%CD4+T细胞正常范围为： 27-51% CD8+T细胞正常范围为： 15-44%CD19+B细胞正常范围为：5-18%与血细胞计数仪联用，得出各淋巴细胞百分比后乘以淋巴细胞数量，得出各淋巴细胞的绝对浓度。,CD4T淋巴
4、细胞的计数方法二（推算）,不精确、繁琐,省钱,举例如下,患者血常规中淋巴细胞计数为0.63 109 /L,淋巴细胞比例测定结果CD3 为64.9%,CD4为32.5%,CD8为31.1%,CD3细胞计数为0.63109/L64.9%0.41 109 /LCD4细胞计数为0.63109/L32.5%0.20 109 /LCD8细胞计数为0.63109/L31.1%0.19 109 /L,推,算,单核细胞人类白细胞抗原DR（ CD14/HLA-DR）,CD14为LPS复合物受体,主要分布在单核细胞，HLA-DR为活化标志。CD14/HLA-DR可反映人体细胞免疫功能，30%提示免疫麻痹。也有人认为
5、HLA-DR浓度如果连续两天低于8000AB/C可认为存在免疫麻痹。广泛应用于临床。,T淋巴细胞亚群研究,研究逐年增多,淋巴细胞亚群变化的常见临床意义,CD4淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（SLE）、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等CD4CD8比值异常： 比值降低：一般被称为“免疫抑制”状态，常见于免疫缺陷病、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、白血病、某些病毒感染等 比值增高：表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD
6、8较移植前明显增加，则可能发生排异反应,15,The shift from a pro-in-flammatory to an anti-inflammatory immune response predominant at the systemic level likely occurs before 24 h after diagnosis of shock.,脓毒症休克期存在免疫麻痹,存在免疫麻痹的Septic患者死亡率大大增加,100名septic患者,28天死亡,无免疫麻痹,免疫麻痹,脓毒症休克患者T淋巴细胞凋亡、存在免疫紊乱,存活与死亡Septic中T淋巴细胞亚群的变化,一项对院内
7、感染的老年脓毒症患者的前瞻性对照研究,Injury, Int. J. Care Injured (2007) 38, 13461357,严重多发伤患者免疫细胞的变化特点,CD4/CD8降低,MHLA-DR降低,T细胞及单核细胞凋亡增加,烧伤患者早期外周血淋巴细胞亚群的变化特点,烧伤患者白细胞低于正常组早期CD3、CD4、CD8细胞计数 均明显下降。HLA-DR表达降低。CD4/CD8比值下降。,CD4T细胞亚群新分类：Th1 、Th2 、Treg 、Th17,我们的研究,抗炎细胞Treg及其分泌的抗炎介质IL-10；促炎细胞Th17及分泌的促炎介质IL-17、IL-6在人体的炎性免疫稳态中发挥
8、重要作用。,23,中国呼吸与危重监护杂志, 2010, 09(04): 416-418.,结论一：脓毒症患者中Treg明显升高，表明抗炎反应的增强,24,结论二：在脓毒症患者中Th17表达明显升高,吴铁军,亢翠翠, 中华急诊医学杂志, 2012, 21(04): 378-380.,脓毒症组,对照组,脓毒症患者中Th17表达明显升高，提示促炎反应的增强。,25,重症脓毒症患者淋巴细胞增殖能力低下、凋亡,淋巴细胞Ag-NoR在健康组中的表达,淋巴细胞Ag-NoR在Sepsis组中的表达,吴铁军，张丽娜 中国呼吸与危重监护杂志, 2010, 09(04): 416-418.,脓毒症组,对照组,重症脓毒症患者存在免疫麻痹,中国急救医学杂志, 2011, 31(9): 836-838.,CD14+单核细胞人类白细胞抗原-DR(HLA-DR) 表达情况,对照组,脓毒症组,27,T淋巴细胞亚群的研究越来越多某种T细胞亚群过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，主要用于了解恶性肿瘤、免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是处于什么状态。 T细胞亚群的表达受多种因素影响 常“变幻莫测”，因此T细胞亚群的解读应细胞比例结合计数和功能状态，连续动态监测更有意义。严重脓毒症存在免疫紊乱，T淋巴细胞的凋亡，与预后有一定关系。创伤等应激状态同样导致免疫紊乱。,总结,谢 谢！,
