1、体 外 分 析 技 术,体外分析技术,In vitro analysis techniques：是指离体的组织、血液或体液等作为生物样本，在人体外进行的、分析样本成分或其含量的检测技术。,特点：超微量分析的灵敏度，高强度的特异性以及简便快速的方法领先于其他定量分析技术。,重点讲述,第一节 放射免疫分析,免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。,第一节 放射免疫分析,基本原理,标记抗原（Ag*）和非标记抗原（Ag）与限量抗体(
2、Ab)竞争性结合。Ag*和Ag与Ab亲和力相同。,基本原理,Ab限量，Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab结合位点，二者通过竞争方式与Ab结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成规律性。,第一节 放射免疫分析,基本原理,以Ag*Ab复合物为B，未结合的Ag*为F，则B/F或B/(BF)与Ag的量变存在着函数关系，由此可的制作该反应的标准曲线 。,第一节 放射免疫分析,基本试剂,抗原抗体复合物,分离方法,双抗体法沉淀法双抗+沉淀吸附法固相分离法,第一节 放射免疫分析,放射免疫测量仪器,第一节 放射免疫分析,室内质量控制,1.零标准管结合率2.非特异性结合率
3、3.最低浓度管和最高浓度管差4.标准曲线连线回归的参数5.E25、E50、E756.质控品7.质控图,第一节 放射免疫分析,RIA质量控制常用指标,灵敏度,精密度,特异性,准确度,稳定性,多次重复测定结果的一致性,最小可检出量,测定值与真实值符合程度,抗体特异性，交叉反应少,有效期保持原有性能不变,评价标准品与被测物的免疫活性,第一节 放射免疫分析,第二节 免疫放射分析,基本原理,将过量的标记抗体与抗原结合，分离结合的标记抗体与未结合的多余的标记抗体，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原的量呈正相关。,第二节 免疫放射分析,特点：1以标记抗体作为示踪剂2反应动力学：标记抗体是过量，非竞争性，全
4、量反应，反应速度快。3灵敏度明显高于RIA，约为RIA的10100倍。4标准曲线工作范围宽。5特异性高。6稳定性好。,第二节 免疫放射分析,第三节 非放射性免疫分析,第三节 非放射性免疫分析,基本原理：指酶标记抗原或酶标记抗体进行的抗原抗体反应，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。,酶免疫标记技术（ELISA）,第三节 非放射性免疫分析,基本原理:以荧光素标记抗体或抗原作为示踪剂的一种新的免疫分析技术，其原理与ELISA相似。该法既可对液体中的抗原和抗体定量，也可对组织切片中的抗原、抗体进行定性和定量。一般以镧系元素作为荧光标记（示踪剂）。,荧光免疫分析（FIA）,第三节 非放射性免疫
5、分析,基本原理：利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统，借以定量检测抗原或抗体的方法，发光物质可直接作为抗原抗体的标记物，也可以游离形式用于催化剂（酶）和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。,化学发光免疫技术（CLIA ）,第三节 非放射性免疫分析,化学发光免疫技术（CLIA ）,第三节 非放射性免疫分析,第三节 非放射性免疫分析,ECLIA 是目前最先进的标记免疫测定技术，是继RIA、ELISA、FIA、CLIA以后的新一代标记免疫测定技术，具有敏感、快速和稳定的特点。直接以Ru(bpy)32+标记，反应时标记物直接发光，ECLIA 与普通化学发光的主要差异在于是电启动发光反应，循环及多次发光，因此ECLIA反应易精确控制，重复性极好。,电化学发光免疫技术（ECLIA ）,第三节 非放射性免疫分析,第三节 非放射性免疫分析,放免与非放免标记分析技术性能比较,第四节 体外分析技术临床应用,第四节 体外分析技术临床应用,第四节 体外分析技术临床应用,1.放射免疫分析的基本原理是什么？其与免疫放射分析的主要区别点有哪些？2.常见的非放射免疫分析方法有哪些？,思考题,Thank You!,
