1、抗酸染色法,1.用接种环取患者痰标本，在载玻片上作成薄而均匀的涂片。2.干燥、火焰固定。3.石炭酸复红染色8-10分，水洗。4.滴3%盐酸乙醇脱色0.5-1分，水洗。5.碱性美兰复染1分，水洗。6.吸干，油镜检查。结果：抗酸菌-红色 非抗酸菌-蓝色,填空题,20.金黄色葡萄球菌除引起化脓性感染外，还可引起（）（）（）（）。21.A群链球菌引起的疾病主要有（）（）（）三大类。22.A群链球菌引起的化脓性感染主要特点是（病灶容易扩散与周围组织界限不清）（脓液希薄），是因产生（透明质酸酶）（链激酶）（链道酶）的缘故。23.预防破伤风应接种（），治疗破伤风应注射（）。,单选题,44.鉴别金黄色葡萄球菌
2、与表皮葡萄球菌的主要依据之一是测定：杀白细胞素，耐热核酸酶，肠毒素，透明质酸酶，红疹毒素45.引起医院内交叉感染最常见的细菌是：结核杆菌，肺炎球菌，痢疾杆菌，金黄色葡萄球菌，乙型溶血性链球菌,46.最常见的化脓性球菌是：金黄色葡萄球菌，乙型溶血性链球菌，绿脓杆菌，肺炎球菌，埃希氏菌属47.葡萄球菌导致的全身感染是：病毒血症，毒血症，脓毒血症，白血病，贫血病,48.医务人员携带率最高的病原菌是：金黄色葡萄球菌，淋球菌，乙型链球菌，脑膜炎球菌，破伤风杆菌49.在无芽胞细菌中抵抗力最强的是：金黄色葡萄球菌，淋球菌，乙型链球菌，脑膜炎球菌，破伤风杆菌,50.破伤风杆菌致病的最重要条件是：芽胞抵抗力强伤
3、口的厌氧环境细菌侵袭力强痉挛毒素毒性强细菌分布广泛,51.毒性最强的外毒素是：破伤风痉挛毒素肉毒毒素白喉外毒素葡萄菌肠毒素霍乱弧菌肠毒素,第8章 性传播细菌,1、掌握淋病奈瑟菌的生物学性状、致病性。2、熟悉梅毒螺旋体、沙眼衣原体的生物学性状、致病性。3、了解溶脲脲原体的致病性。,性传播疾病（STD）,病毒：生殖器疱疹（HSV-2）、尖锐湿疣（人乳头瘤病毒HPV）、AIDS、部分病毒性肝炎。细菌：淋病、阴道炎、腹股沟肉芽肿衣原体：性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎支原体：非淋菌性尿道炎、非淋菌性宫颈炎螺旋体：梅毒真菌：生殖器念珠菌病,第一节 淋病奈瑟菌,淋病：1879年 德国Albert Neiss
4、er 国内第一大性病 2030岁高锋,一、生物学性状形态染色肾形，成双排列，革兰染色阴性。脓汁标本中存于中性粒细胞内慢性淋病多分布在细胞外有菌毛，无芽胞和鞭毛，部分菌株有荚膜,培养 专性需氧营养要求高：巧克力色血平板根据菌落大小，分T1、T2、T3、T4、T5型高度自溶性，不易保存抗原构造菌毛蛋白抗原 脂多糖抗原（LOS）：缺少“O”抗原外膜蛋白抗原：PI、PII、PIII P：主要外膜蛋白，分A、B、C、D等16个血清型,抵抗力和耐药性抵抗力弱，对冷、热、干燥、消毒剂敏感对青霉素等多种抗生素敏感易产生耐药性,二、致病性,（一）致病物质菌毛 及荚膜增强细菌与易感细胞的粘附及抗吞噬作用（T1、T
5、2） 脂多糖 辅助细菌的粘附与侵入抗原性改变，逃避宿主免疫。,IgA1蛋白酶 破坏IgA1，使细菌粘附。外膜蛋白：PI：破坏中性粒细胞PII：参与细菌粘附PIII：抑制抗菌抗体活性,淋病传染源：感染者，人类是唯一宿主传播途径：性传播 间接感染临床表现：男性-前尿道炎女性：尿道炎、宫颈炎。尿痛、尿频、尿道流脓、宫颈脓性分泌物新生儿淋病奈瑟菌性结膜炎：产道感染,（二）所致疾病,三、微生物学检查法,标本 泌尿生殖道、眼结膜脓性分泌物直接涂片镜检 分离培养与鉴定 巧克力色培养基,四、防治原则,取缔娼妓，加强性病知识的教育无特异性预防方法 新生儿：1%硝酸银滴眼对患者应早期用药，彻底治疗耐药者：壮观霉素
6、、头孢三嗪,第二节 梅毒螺旋体（T.pallidum） 螺旋体（spirochaete）：是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。 致病分类 1.疏螺旋体 2.密螺旋体：苍白亚种、地方亚种、极细亚种 3.钩端螺旋体,密螺旋体1、苍白密螺旋体苍白亚种：梅毒螺旋体地方亚种：地方梅毒螺旋体极细亚种：雅司密螺旋体2、品他密螺旋体：品他病,一、生物学性状（一）形态与染色 细长、两端尖直、8-14个螺旋，运动活泼 镀银染色法 - 棕褐色，G。（二）抵抗力 极弱：不耐热、干燥，体外迅速死亡，4、3d无感染性，对消毒剂、抗生素（青霉素）敏感,二、致病性（二）所致疾病：梅毒 1、获得性梅毒：
7、性接触传播 I期：无痛性硬下疳（传染性极强） II期：梅毒疹，淋巴结肿大，有时累及骨、眼、中枢神经系统，传染性强 III期：皮肤粘膜溃疡性坏死灶、内脏器官 肉芽肿样病变，以神经梅毒、心血管梅毒、梅毒瘤常见，传染性小。,2.先天性梅毒：垂直传播 流产、早产、死胎， 梅毒儿：锯齿牙、马鞍鼻、间质性角膜炎、先天性耳聋 3.输血后梅毒：发热、皮疹等II期特征,四、防治原则 性安全教育 青霉素治疗：早期（确诊后） 足量（480万u2） 坚持（7-10d）,单选题,52.引起性病的细菌是：肺炎球菌，链球菌，淋球菌，葡萄球菌，脑膜炎球菌53.预防新生儿淋病性眼结膜炎最好采用：氯霉素眼药水，利福平眼药水，红霉
8、素眼药膏，黄胺药眼药水，1%硝酸银眼药水,细菌学复习,第一节 微生物 微生物(microorganism)：是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。,概 述,真核细胞型微生物细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器完整。如真菌。原核细胞型微生物细胞核的分化较低，仅有原始核，无核膜、核仁；细胞器不完整。如：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。非细胞型微生物无典型的细胞结构，只能在活细胞内生长繁殖。如病毒。,微生物的种类（三型八大类）,第1章 细菌的基本性状第一节 细菌形态与结构,一、细菌的大小
9、与形态：（一）大小测量单位：微米(m) ， 1 m=1/1000mm 球菌：直径：1m 杆菌：长 ：23 m宽 ：0.30.5m 螺形菌:与杆菌相似,基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特殊结构：鞭毛、菌毛、芽胞、荚膜,二、细菌的结构,革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较,意义：由于细胞壁结构的不同，导致两类细菌在染色性、抗原性、致病性及药物敏感性方面有很大差异。青霉素对革兰阳性菌敏感，对革兰阴性菌不敏感。,革兰染色法,（1）步骤：先用结晶紫初染，再加碘液媒染，后用95%乙醇脱色，最后用稀释复红或沙黄复染。（2）结果判定：紫色为G+菌；红色为G-菌（3）实际意义：鉴别细菌：可将细菌分成两大类：
10、G+菌和G-菌选择治疗用药：大多数 G+菌对青霉素敏感， G-菌对青霉素不敏感，对链霉素敏感。与细菌致病性有关：大多数 G+菌以外素素致病， G-菌以内毒素致病。,第二节 细菌的生长繁殖与代谢,1、掌握细菌生长繁殖所需的条件；细菌合成代谢产物及其医学意义。2、熟悉细菌生长所需营养物质、繁殖方式和速度。3、了解细菌的分解代谢和细菌的生化反应；细菌的变异现象。,一、细菌的营养与生长繁殖,（一）营养物质1、水：占菌体的80%。2、碳源：是细菌的组分和能量来源。3、氮源：组成细菌蛋白质、酶和核酸的成分。4、无机盐类：磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、锰、锌、铜等。5、生长因子：某些细菌生长所必需而自身不能合
11、成的物质，包括维生素、嘌呤和嘧啶等。,（二）细菌的生长繁殖,1、细菌生长繁殖条件：（1）营养物质：（2）酸碱度：大多数最适PH为7.27.6（3）温度：最适生长温度是37（4）气体：二氧化碳和氧气。将细菌分为：专性需氧菌：结核分枝杆菌微需氧菌：幽门螺杆菌兼性厌氧菌：大多数病原菌专性厌氧菌：破伤风梭菌,2、细菌生长繁殖的方式与速度（1）细菌个体繁殖： 细菌以简单的二分裂方式进行繁殖。 繁殖一代所需时间约20-30min。 个别细菌较慢，如结核分枝杆菌为1820小时。（2）细菌群体的生长繁殖 ：生长曲线 迟缓期 (lag phase)：14小时内。 对数期 (logarithmic phase)：
12、生长最佳期，性状典型。 稳定期 (stationary phase)：细菌数稳定。 衰亡期 (decline phase)：细菌数减少，性状衰退。,细菌群体的生长繁殖,二、 细菌的新陈代谢（一）分解代谢和生化反应1. 糖发酵试验2. V-P试验3. 甲基红试验4. 枸橼酸盐利用试验5. 吲哚（靛基质）试验,原理：各种细菌因含有不同的分解糖类的酶，所以分解糖的能力各不相同，而且代谢产物也 不同。有的分解某些糖产酸产气，有的则只产酸不产气，借此可作为鉴别细菌的依据。方法：1.将大肠杆菌、伤寒杆菌分别接种于5种糖发酵管。2.置37度恒温培养箱18-24h。不分解：， 产酸：+， 产酸产气： 葡萄糖
13、乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖大肠杆菌 /-伤寒杆菌 + - + + -,1.糖发酵试验,2. V-P试验,原理：某些细菌，如产气荚膜杆菌可分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧，生成中性的乙酰甲基甲醇，可在碱性环境中被氧化为二乙酰，二乙酰再与培养基蛋白胨中精氨酸等所含的胍基结合，生成红色化合物，为V-P试验阳性。方法：1.分别将产气杆菌和大肠杆菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基内。置37度恒温箱培养18-24h。2.取出后分别加入VP试剂各1ml摇匀。静置5-15分观察结果。,VP试验,大肠杆菌：产气杆菌：+,3. 甲基红试验,原理：某些细菌如大肠杆菌，可分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸和乳酸等，
14、使培养基的PH值下降至4.5以下。加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应。若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、酮、醛、气体和水时，则培养基的酸碱度仍在PH值6.2以上。加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。,葡萄糖,丙酮酸,甲基红试剂,红色,（阳性）,甲基红试验,方法：1.分别将大肠杆菌和产气杆菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中。置37度恒温培养箱18-24h。2.取出后，分别滴加甲基红试剂2-3滴，混匀观察。,甲基红试验,大肠杆菌：+产气杆菌：,4. 枸橼酸盐利用试验细菌在枸橼酸盐作为唯一的碳源的培养基 中生长 指示剂溴麝香草酚兰由淡绿变为深兰（阳性）大肠杆菌： - 产气杆菌：+,枸橼酸利用试验,大
15、肠杆菌：产气杆菌：+,5. 吲哚（靛基质）试验,色氨酸,色氨酸酶,对二甲基氨基苯甲醛,玫瑰吲哚（红色）,大肠杆菌：+ 产气杆菌：-,（阳性）,吲哚,吲哚试验,大肠杆菌：+产气杆菌：,IMVC试验：I: 吲哚试验 M: 甲基红试验 V: V-P试验 C: 枸橼酸盐利用试验,大肠杆菌产气杆菌伤寒杆菌,I M V C,+ + - - - - + + - + - -,（二）细菌合成代谢产物及其医学意义1、毒素及侵袭性酶,（1）毒素：病原菌合成的对人和动物有毒性的物质。内毒素：是G-菌细胞壁的脂多糖，当菌体裂解后释放。外毒素：G+菌和少数G-菌合成并分泌到菌体外的蛋白质。（2）侵袭性酶：是细菌产生对人体
16、有损伤作用的酶,2、热原质（致热原）,（1）概念：是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。（2）化学成分：脂多糖（LPS）（3）特点：耐高温，不被高压灭菌法所破坏。（4）医学意义：在制备和使用生物制品或注射用药液时应严格无菌操作。,3、色素（pigments）,（1）水溶性色素 菌落有颜色，可向周围扩散。如：铜绿假单胞菌产生的绿色色素。（2）脂溶性色素：不溶于水，仅菌落显色，不扩散。如：金黄色葡萄球菌的金黄色素。 （3）意义：可用于鉴别细菌,4、抗生素（antibiotics）,是某些微生物代谢过程中产生的一类能杀死其它微生物或肿瘤细胞的物质。抗生素大多由放线菌和真菌产生。意义
17、：用于治疗敏感菌引起的感染性疾病。,5、细菌素（bacteriocins）,某些细菌产生的抗菌蛋白。作用范围狭窄，仅对亲缘关系密切的细菌有杀伤作用。如：大肠埃希菌产生的大肠菌素。意义：用于细菌分型。,6、维生素（vitamin）,有些细菌合成维生素，供自身需要，并分泌到环境中。如：大肠埃希菌合成维生素B、K，供人体吸收利用。意义：治疗维生素缺乏症。,三、细菌的人工培养,（一）培养基（culture medium）：人工配制的适合细菌生长繁殖的营养物制品。分类：按用途分为：基础培养基营养培养基选择培养基鉴别培养基厌氧培养基,厌氧罐,按物理性状分为：-液体培养基（肉汤培养基）-固体培养基（加入1.
18、52.5%琼脂)-半固体培养基(加入0.30.5%琼脂),(二)细菌的生长现象,1、液体培养基:混浊生长:大多数细菌沉淀生长:链球菌表面生长:形成菌膜,细菌在液体培养基中的生长情况,2、固体培养基：菌落：单个细菌繁殖形成的肉眼可见的细菌集团。类型：光滑型（S型）、粗糙型（R型） 粘液型（M型）菌苔：培养基表面的一层培养物。,细菌在固体培养基中的生长情况,3、半固体培养基：鉴别细菌有无动力有鞭毛菌：细菌向穿刺线周围扩散生长。无鞭毛菌：细菌沿穿刺线生长，不扩散。,细菌在半固体培养基中的生长情况,1、3：有动力2：无动力,第四节 细菌的遗传与变异一、变异现象（一）形态结构变异 形态:菌体变膨大呈梨形
19、、丝状 细胞壁：有 无（L型细菌） 鞭毛：有 无（H-O变异） 荚膜:有 无 芽胞：有 无,（二） 毒力变异（1）增强白喉杆菌携带噬菌体，可产生外毒素。（2）减弱 结核杆菌 13年230代传代 卡介苗 (BCG),（三）耐药性变异敏感 不敏感、耐药预防：1、合理使用抗生素 2、做药物敏感试验（四）菌落变异S R变异：抗原性降低、毒性消失。,第2章 细菌的分布与消毒灭菌第一节 细菌的分布一、土壤中的微生物 1.种类 细菌、放线菌、真菌 2.来源 病人和动物的排泄物 3.意义 致病: 创伤感染,二、水中的微生物 1.种类 细菌、放线菌、真菌、螺旋体 2.来源 土壤 3.意义 致病: 消化道感染,三
20、、空气中的微生物 1.种类 细菌、放线菌、真菌 2.来源 人和动物的呼吸道、土壤尘埃 3.意义 致病: 呼吸道感染或伤口感染,第二节 消毒与灭菌1. 消毒(disinfection)杀死物体上病原微生物的方法2. 灭菌(sterilization)杀死物体上所有微生物的方法3. 防腐(antisepsis)防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法,4. 无菌(asepsis)不含活菌 无菌操作:防止细菌进入人体或其他物品的操作技术 5.清洁(cleaning) 通过除去尘埃和一切污秽以减少微生 物数量的过程,一、物理消毒和灭菌法,热力灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法辐射杀菌法过滤除菌法超声波杀菌法干燥与低温
21、抑菌法,（一）热力灭菌法原理：高温使细菌蛋白质和酶类凝固变性，导致菌体死亡。是最常用的消毒灭菌法。1、干热消毒灭菌法焚烧烧灼干烤：通常加温160-180保持2h红外线：,2、湿热消毒灭菌法,在同一温度下湿热的杀菌效果优于干热原因：温热中菌体蛋白质易凝固湿热穿透力比干热大湿热蒸汽有潜热存在,（1）巴氏消毒法（pasteurization）,杀死液体中的病原菌或某些特定微生物61.162.8 30min71.7 1530秒主要用于消毒牛奶、酒类等食品,（2）煮沸法(disinfection by boiling),100 5min芽胞需1-2小时才能杀死用于注射器、刀剪、饮水和食具的消毒。,（3）
22、间歇蒸汽灭菌法(fractional sterilization),利用反复多次的流通蒸汽灭菌(10015-30min )，以达到灭菌的目的。 适用于不耐热的营养物质如某些培养基的灭菌。,(4)高压蒸汽灭菌法,可杀死一切微生物(包括细菌芽胞）压力：103kPa(1.05kg/cm2) 温度：121.3时间：1520min用于培养基、生理盐水、手术敷料等灭菌,(二）辐射杀菌法,1、紫外线（ultraviolet rays)最适波长265-266nm杀菌机制:干扰细菌DNA的复制，导致细菌死亡或变异特点：穿透力弱，不能穿过普通玻璃、纸张、尘埃等。用途：用于物体表面和空气的消毒（手术室、传染病房、细
23、菌实验室）,2、电离辐射：射线和射线。杀菌机制：破坏DNA 射线穿透性差，作用时间短，安全。 射线穿透性强，作用时间长，不安全。 用于医疗器械、药物、食品等灭菌。,（三）滤过除菌,是用滤菌器除去液体中的细菌。常用于不耐高温灭菌的血清、抗生素等的除菌。常用的除菌滤器：石棉滤菌器玻璃滤器薄膜滤器等,二、 化学消毒灭菌法 酚类氧化剂重金属盐类 醇类烷化剂表面活性剂 染料酸碱类（一）消毒剂的作用机制使菌体蛋白变性或凝固2. 干扰细菌的酶系统和代谢3. 破坏细胞膜,（四）影响消毒剂作用的因素消毒剂性质、浓度和作用时间酒精：70 75%2. 微生物的种类与数量：结核杆菌、芽胞3. 环境因素（1）温度：温度
24、升高，提高消毒效果。（2）酸碱度（3）有机物：减弱消毒效果,第3章 细菌的感染与免疫第一节 正常菌群与机会致病菌,一、正常菌群（normal flora）（一）概念：存在于正常人体体表及与外界相通的腔道中的对人体无害的微生物群。,（二）生理作用,1、生物拮抗作用 2、营养作用3、免疫作用4、抗衰老作用5、抑癌作用,二、机会致病菌 opportunistic bacterium,（一）概念 在一定条件下，正常菌群与宿主、正常菌群内细菌间平衡关系被打破，原来不致病的细菌可成为致病菌，称机会性致病菌，又称条件致病菌。,（二）条件致病的主要条件,1、定居部位改变 2、机体免疫功能低下3、菌群失调 指机
25、体某部位正常菌群中各菌种间的比例发生较大幅度变化而超出正常范围的状态。菌群失调症：由菌群失调产生的病症。多见于长期应用抗生素和慢性消耗性疾病,第二节 细菌的致病机制,一、细菌的毒力（virulence）表示致病性的强弱程度定量概念常用半数致死量（LD50）和半数感染量（ID50）来表示,细菌毒力的物质基础,（一）细菌的侵袭力（invasiveness）1、荚膜、微荚膜：抗吞噬作用 微荚膜：M蛋白、VI抗原、K抗原。2、粘附素：菌毛粘附素：菌毛分泌非菌毛粘附素：脂磷壁酸,3、侵袭性物质：凝固酶：抗吞噬透明质酸酶：链激酶： 促进细菌扩散链道酶：,细菌毒力的物质基础,（二）毒素1、外毒素特性（1）来
26、源： 菌分泌 少数 菌裂解释放（2）化学成分：蛋白质,（3）稳定性：不耐热，60-8030分破坏。（4）抗原性：强，产生抗毒素（5）甲醛处理：形成类毒素（6）毒性：较强，对组织细胞有选择性毒性作用，引起特殊临床病变。,2、内毒素（endotoxin）,（1）来源： G-菌菌体崩解时释放（2）化学成分：脂多糖（LPS） 毒性由类脂A决定,外膜,（3）稳定性：耐热，加热1602-4h破坏（4）抗原性：弱（5）甲醛处理：不形成类毒素（6）毒性：弱，毒性大致相同，引起发热、白细胞反应、微循环障碍、休克、DIC,二、细菌侵入的数量病原菌侵入机体造成感染，要有足够的数量，毒力强，所需数量较少。三、细菌侵入
27、的部位适当的侵入部位是构成感染的重要环节。结核杆菌呼吸道破伤风杆菌-深部伤口伤寒杆菌-消化道,第四节 感染的发生与发展,一、感染的来源外源性感染：病人、带菌者、病畜和带菌动物内源性感染：正常菌群（机会致病菌） 潜伏的病原菌,二、细菌的感染类型（一）隐性感染无明显的体征及病变（二）显性感染有明显的体征及病变局部感染疖、痈2. 全身感染,(1)毒血症细菌在局部繁殖, 不入血，外毒素入血，引起特殊的临床表现。(2)菌血症细菌入血，但未在血中大量繁殖。(3)败血症细菌侵入血流并在血中大量繁殖产生毒素，引起全身严重症状。(4)脓毒血症 化脓性细菌引起败血症，产生新的化脓性病灶。,（三）带菌状态（carr
28、ier state）,带菌状态 经过显性或隐性感染后，致病菌未被及时清除而继续存在于体内，并不断排出体外。带菌者：处于带菌状态的人健康带菌者带有致病菌而无临床症状者意义 是重要的传染源，检出带菌者并采取措施消除带菌状态，对控制传染病的流行具有重要意义。,第5章 呼吸道传播的细菌,1、掌握结核杆菌的生物学性状、致病性及防治原则；结核菌素试验的原理、方法、结果分析及应用。2、熟悉脑膜炎奈瑟菌的生物学特性、致病性和防治原则。,第一节 结核分枝杆菌,分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长或稍弯的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。 结核杆菌引起结核病。对人类致病的有人型结核杆菌和牛型结核杆菌。
29、,流行病学全球总疫情17亿人口感染了结核菌，现有结核病人2000万，每年新发病人数8001000万，每年300万人死于结核病。我国疫情建国前：死亡率达200-300人/10万现有活动性肺结核病人600万人，每年因结核病死亡25万人。,1.形态与染色 结核杆菌细长略弯曲，端极钝圆，大小约140.4 m，呈单个或分枝状排列，无鞭毛、无芽胞。 在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状、串珠状、短棒状、长丝形等。,一、生物学性状,形态与染色 细长略弯，有时呈分枝状无芽胞、鞭毛，近年发现有荚膜齐-尼氏抗酸染色阳性,抗酸染色（Ziehl-Neelsen）显示痰标本中染为红色的特异性抗酸细菌（结核杆
30、菌）。,其他非抗酸性细菌及细胞浆质等呈蓝色。结核杆菌的抗酸性取决于胞壁内所含分枝菌酸残基和胞壁固有层的完整性。,抗酸染色法,1.用接种环取患者痰标本，在载玻片上作成薄而均匀的涂片。2.干燥、火焰固定。3.苯酚复红染色8-10分，水洗。4.滴3%盐酸乙醇脱色0.5-1分，水洗。5.碱性亚甲蓝复染1分，水洗。6.吸干，油镜检查。结果：抗酸菌-红色 非抗酸菌-蓝色,2.培养特性与生化反应,专性需氧菌营养要求高：在含有蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬酰胺等的固体培养基上才能生长。最适pH为6.56.8，最适温度为37。生长缓慢：1824h、表面呈颗粒状、乳白色或淡黄色，呈菜花样。在液体培养基中呈粗糙皱纹状菌
31、膜生长。,结核杆菌培养的菌落,3.培养特性 专性需氧营养要求高（罗氏培养基）内含鸡蛋、甘油、马铃薯、无机盐等生长缓慢（18小时）菌落呈菜花状,抵抗力较强：干痰中可存活68个月；在3HCl、6H2SO4或4NaOH溶液中能耐受30 min，因而常以酸碱处理严重污染的样本，杀死杂菌和消化粘稠物质，以提高检出率。对湿热、紫外线、乙醇的抵抗力弱。在液体中加热6263 15 min或煮沸、直射日光下23 h、75%乙醇内数分钟即死亡。,4.抵抗力,5.变异性,对链霉素、利福平、异烟肼等抗结核药物较易产生耐药性，耐药性菌株常伴随活力和毒力减弱。 菌落、毒力等也易发生变异。 1908年Calmette和Gu
32、rin将有毒的牛分枝杆菌培养于含胆汁、甘油、马铃薯的培养基中，经230次传代，历时13年，使其毒力发生变异，成为对人无致病性，而仍保持良好免疫原性的疫苗株，称为卡介苗（Bacillus Calmette-Gurin，BCG）。,二、致病性和免疫性,（一）致病物质1、荚膜： -有助于细菌粘附与侵入宿主细胞 -获取营养 -阻止有害物质进入细菌 -抑制吞噬体与溶酶体融合,2、脂质索状因子：抑制白细胞游走，引起肉芽肿。 磷脂：能刺激单核细胞增生，形成结核结节。蜡质D：能引起迟发型超敏反应。硫酸脑苷酯：抑制吞噬溶酶体形成，使结核分枝杆菌易于胞内寄生。3、蛋白质 结核菌素：产生迟发型超敏反应，参与结核结节
33、的形成。,结核分枝杆菌无内毒素，也不产生外毒素和侵袭性酶类，其致病作用可能与细菌在组织细胞内顽强增殖引起炎症反应，以及诱导机体产生迟发型超敏反应性损伤有关。结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道和破损的皮肤黏膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官的结核病，以肺结核最为常见。,二、致病性与免疫性,3.结核菌素试验,将一定量结核菌素注入皮内，如受试者曾感染结核杆菌，则在注射部位出现迟发型超敏反应炎症，判为阳性，未感染者则为阴性。此法可用于检测可疑患者曾否感染过结核菌、接种卡介苗后是否阳转以及检测机体细胞免疫功能。,结核菌素试剂有两种： 旧结核菌素（old tuberculin，OT）： 含结核分枝杆
34、菌的甘油肉汤培养物加热过滤液，主要成分是结核蛋白，也含细菌的其他代谢产物和培养基成分。 纯蛋白衍生物（purified protein derivative, PPD）：OT经三氯醋酸沉淀后的纯化物。,3.结核菌素试验,方法： 目前多用PPD法。取PPD-C和BCG-PPD各5单位分别注入两前臂皮内，4872 h后，红肿硬结小于5mm者为阴性反应；超过5 mm者为阳性；15 mm为强阳性。,结果分析： 阳性反应表明机体已感染过结核杆菌或卡介苗接种成功，对结核杆菌有迟发型超敏反应，说明有特异性免疫力。强阳性反应则表明可能有活动性结核病，尤其是婴儿。阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌或未接种过卡介苗
35、。 原发感染早期、正患严重结核病或其他严重疾病致细胞免疫功能低下者（如用过免疫抑制者）也可能出现阴性反应。,3.结核菌素试验,应用： 诊断婴幼儿的结核病； 测定接种卡介苗后免疫效果； 在未接种卡介苗的人群作结核分枝杆菌感染的流行病学调查； 用于测定肿瘤患者的细胞免疫功能。,3.结核菌素试验,（三）免疫性 1、机体的抗结核免疫：-结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫。细胞免疫在抗感染免疫中更重要。特点：产生细胞免疫的同时也产生迟发型超敏反应。,2、结核菌素试验,原理感染过结核杆菌，局部发生超敏反应；未感染过的机体，局部无反应。结核菌素试剂旧结核菌素（old tuberculin，OT）纯蛋白衍生物
36、（PPD）: PPD-C、 BCG-PPD试验方法分别取两种PPD 5单位（0.1ML)注入两前臂皮内，4872小时后观察。,结果分析(1)红肿硬结15mm为强阳性可能有活动性结核病(2)红肿硬结超过5mm者为阳性 表示感染过结核或接种过疫苗，对结核有免疫力(3)红肿硬结小于5mm者为阴性反应表示未感染过结核或无免疫力。排除以下情况感染早期，T淋巴细胞尚未被致敏老年人患严重结核病或其他传染病（如麻疹等）的患者获得性免疫功能低下，如艾滋病患者或使用免疫抑制剂治疗者,应用用于选择卡介苗接种对象及免疫效果的测定 阴性者，接种卡介苗。 阳性者，产生免疫力。用于婴幼儿结核病诊断肿瘤患者细胞免疫功能测定对
37、未接种BCG的人群进行流行病学调查,根据结核分枝杆菌感染的类型，应采取病灶部位的适当样本。如肺结核取咳痰（最好取第一次晨痰，挑带血或脓痰）；肾或膀胱结核以无菌导尿或取中段尿液；肠结核取粪便；结核性脑膜炎取脑脊液；脓胸、肋膜炎、腹膜炎或骨髓结核等则穿刺取脓汁。,1直接涂片染色 咳痰、无菌采取的脑脊液、导尿或中段尿。 抗酸染色法2分离培养3动物试验：豚鼠或地鼠4结核分枝杆菌核酸及抗体检测：PCR，ELISA,三、微生物学检查法,预防： 接种卡介苗能极大降低结核病发病率。婴儿出生后即接种，较大儿童须做结核菌素试验，阴性者接种。接种后68周结核菌素试验即可阳性，阳转率可达9699%，表示接种者已有免疫
38、力。阳性反应可维持约5年。 治疗： 早期、联合、足量、规范使用抗结核药物。常用药物有异烟肼、利福平、链霉素、对氨水杨酸、乙胺丁醇等。,四、防治原则,第二节 脑膜炎奈瑟菌 （脑膜炎球菌）,肾形或豆形，成双排列，凹面相对， G-；脑脊液中常位于中性粒细胞内；新分离株具有荚膜和菌毛，无鞭毛和芽胞。,一、生物学性状形态与染色,1.形态与染色 G双球菌,肾形或豆形，无鞭毛、芽胞，有菌毛。,2.分离培养 专性需氧菌 巧克力培养基,一、生物学性状,培养特性与生化反应专性需氧营养要求高，巧克力色培养基产生自溶酶，应立即送检或床边接种。抗原构造及分类荚膜多糖抗原：13个血清群，A、B为主。外膜蛋白：脂多糖抗原：
39、主要致病物质抵抗力抵抗力弱，室温放置3h即死亡对磺胺类、青霉素等敏感。四怕：热、寒冷、干燥、消毒剂,1.致病物质,主要是内毒素,2.所致疾病,呼吸道传播，飞沫或接触流行性脑脊髓膜炎,普通型暴发型慢性败血症型,三种临床类型,菌毛：粘附于黏膜上皮细胞，利于定植；荚膜：有抵抗吞噬的作用；内毒素：可引起发热、微循环障碍，严重者可致内毒素休克、血栓、DIC等。,传染源：病人和带菌者,二、致病性与免疫性,（三）免疫性,人对脑膜炎奈瑟菌抵抗力较强：机体感染后以体液免疫为主，血清中特异抗体能杀死脑膜炎奈瑟菌；抗体的调理作用能增强吞噬细胞的功能；分泌型IgA可阻止脑膜炎奈瑟菌对上呼吸道黏膜的粘附。 母体中的Ig
40、G还可通过胎盘传给胎儿，故6个月内婴儿极少患流行性脑膜炎。,脑膜炎奈瑟菌,鼻咽腔繁殖,繁殖入血,菌/败血症,中枢神经系统,主要侵犯脑脊髓膜,流脑,上感期：1-2天败血症期：皮肤瘀点脑膜炎期：脑膜刺激症恢复期,症状不是同时发生,发热,头痛,关节痛,呕吐,颈项强直,痉挛,嗜睡,畏光,1.标本,3.分离培养与鉴定,脑脊液、血液、出血点渗出液、鼻咽拭子保暖、保湿、立即送检，培养基预温。,2.直接涂片镜检,中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，可作出初步诊断。,巧克力（色）培养基,4.快速诊断,对流免疫电泳，SPA协同凝集试验,三、微生物学检查法,四、防治原则,特异性预防：流脑疫苗：A群纯化荚膜多糖疫苗治疗
41、：青霉素、磺胺大剂量治疗,脑膜炎接种,第6章 消化道感染的细菌,1、掌握志贺菌属、沙门菌属的生物学性状、致病性、微生物学检查法。2、熟悉大肠埃希菌的生物学性状、所致疾病及卫生细菌学意义；肥达反应的原理及结果分析；霍乱弧菌的生物学性状、致病性。,肠杆菌科细菌,是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中。 目前已有44个属，170多个种。但该科引起人类95以上感染的菌种却不到20个。,肠杆菌科细菌革兰染色,第一节 大肠埃希菌 （大肠杆菌）,大肠杆菌是人和动物肠道的正常菌群，一般情况下对人体有益无害，但可作为机会致病菌引起肠道外感染。,一、生物学性状形态
42、染色中等大小 革兰染色阴性有周鞭毛有菌毛多糖包膜（K抗原）无芽胞,培养特性与生化反应营养要求不高S-S琼脂平板培养菌落着色 -生化反应：活泼 葡 乳 麦 甘 蔗单糖发酵试验： /- IMViC ： + + - -兼性厌氧。有O、H和K三种抗原。 能产生大肠菌素。,（一）致病物质 1.黏附素 包括定居因子抗原、P菌毛 2.外毒素 3.内毒素,二、致病性与免疫性,二、所致疾病,（一）肠道外感染 ：机会感染 化脓性感染泌尿道感染最多见 如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎胆囊炎、腹膜炎、脑膜炎及败血症等（二）肠道感染：腹泻某些血清型可引起人类胃肠炎，与食入污染的食品和饮水有关，为外源性感染。,（一） 标本 肠
43、外感染采取中段尿、血液、脓液、脑脊液等；胃肠炎则取粪便。（二）分离培养粪便直接分离接种于选择鉴别培养基。其它标本除血液外，均需作涂片染色检查。血液须先经肉汤培养增菌。尿液及其他液体先须低速离心，再取沉淀物作涂片、培养等检查。（三）鉴定：挑取可疑菌落进行涂片染色镜检，再做生化反应、血清学分型。,三、微生物学检查法,大肠菌群指数：每1000毫升样品中的大肠菌群数 饮用水3细菌总数 ：每毫升或每克样品中所含细菌数。 饮用水100,（三）卫生细菌学检查大肠菌群：指在37，24小时内发酵乳糖产酸产气的需氧和兼性厌氧的肠道杆菌，包括埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属及肠杆菌属等。,疫苗接种预防已在畜牧业领域中开展了广泛研究。 预防人类ETEC感染、O157感染的疫苗正在研究中。抗生素治疗应在药物敏感试验的指导下进行。 尿道插管和膀胱镜检查应严格无菌操作。对腹泻病人应进行隔离治疗。 污染的水和食品是ETEC最重要的传染媒介，EHEC则常由污染的肉类和未消毒的牛奶引起，充分的烹饪可减少感染的危险。,
