1、本科毕业论文外文翻译 译文： 苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究 来源： Ageicultural Science and Technology (2009) 10(6): 125127 LV Ping,Huang Qiang 摘要： 目的 研究苦丁茶各种不同粗提物的抑菌效果及抑菌效果的差异。 方法 采用试管二倍稀释法和纸片扩散法 ,对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌进行体外抑菌试验 ,还有测定其最小抑菌浓度 (MIC)、最小杀菌浓度 (MBC)和抑菌环的直径大小。 结果 粗提物 1抑菌效果较强 ,强于粗提物 2和粗提物 3,对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的最小抑菌浓度（ MIC） 分别为 3.91 mg
2、/ml和 31. 25 mg/ml。 结论 苦丁茶的不同粗提物均具有不同程度的抑菌作用 ,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供了参考。 关键词： 苦丁茶 ； 提取物 ； 体外抑菌作用 1 前言 苦丁茶属冬青科冬青属 ,是 常绿乔木 ,具有 性凉 ,味甘苦 ,无毒 ,有散风热、清热解毒、止渴生津、健胃消食等功效 1 。中华人民共和国药典有记载 :“苦丁茶有滋补肝肾等功能 ,用于治疗头眩、目措、耳鸣、头发早白、腰膝酸软、慢性苯中毒、白细胞减少等疾病”。苦 丁茶含有三萜类、多酚类、黄酮类物质、熊果酸、儿茶素、氨基酸、维生素、苦味素、脂多糖和多种微量元素等很多对人体有益的成分 ,是民间常用的中草药。作
3、者分别对苦丁茶的 3种粗提物进行了体外抑菌试验 ,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供参考。 2 材料与方法 2. 1 材料 2. 1. 1 供试菌种 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 ,是 由广西壮族自治区药物检验所提供。 2. 1. 2 中药 广西南宁同济药店购买的苦丁茶。 2. 1. 3 培养基 普通肉汤培养基 (中国进出口商品检验技术研究所、北京陆桥技术有限责任公司生产 ,批 号 080627,规格 250 g) ;普通营养琼脂培养基 (广东环凯微生物科技有限公司生产 ,批号 200810248,规格 250 g) ，分别按说明书配制。 2. 1. 4 仪器 中药粉碎机、旋转蒸发仪、高压蒸汽灭
4、菌锅、电子分析天平、恒温培养箱、洁净工作台、电热鼓风干燥箱、循环真空泵、回流冷凝装置、电子控温电热器、水浴锅、打孔器等。 2. 2 制备方法 2. 2. 1 苦丁茶粗提物的制备 粗 提物 1的制备 :先 称取苦丁茶 50 g,再 加入 500 ml去离子水浸泡 10 h,加热至沸腾 ,文火熬煮 2 h,然后 过滤。过滤物再 加入 3 5倍去离子水煎煮 ,方法同上 ,重复 3次。合并 3次提取液 ,用旋转蒸发仪浓缩到 50 ml,即每 1 ml相当于含生药 1. 0 g。 粗 提物 2的制备 :先 称取 50 g干粉 (用中药粉碎机粉碎后过 80目 ) ,再 加 500 ml去离子水 ,水浴 8
5、0 恒温振荡 3 h,然后 离心取上清液 ,再继续进行 浓缩 ,加 3倍体积无水乙醇 ,离心后取沉淀物 ,用去离子水配成 50 ml溶液。 粗 提物 3的制备 :先 称取 50 g干粉 ,再 加 500 ml 90%乙醇 ,采用回流冷凝装置提取 ,回流时间 3 h,回流 3次 ,然后 合并 3次提取液 ,过滤 ,也 用旋转蒸发仪浓 缩成 50 ml。粗提物 1、 2、 3分装在棕色试剂瓶中 ,密封保存于 - 20 的冰箱中 ,使用前先进行 121 ，高压灭菌 20 min处理 。 2. 2. 2 菌悬液的制备 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种到新鲜肉汤培养基中 ,在 37 恒温箱中培养 20
6、 24h,金黄色葡萄球菌的浓度为 3. 0 108 CFU /ml,大肠杆菌的浓度为 3. 5 109 CFU /ml。试验菌被稀释到 1. 0 105 CFU /ml后 ,置 4 冰箱中保存备用。 2. 2. 3 药敏纸片的制备 将定性滤纸用打孔器制成直径为 6 mm的圆形纸片 , 进行 121 高压灭菌 20 min, 60 烘干的处理 ,用无菌镊子分别夹到不同的苦丁茶粗提物中浸泡 1 2 h后 取出放入无菌平皿中烘干备用。 2. 2. 4 体外抑菌试验 2. 2. 4. 1 试管内药液稀释法测定抑菌效果 采用试管二倍稀释法 ,苦丁茶粗提物分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行最小抑菌浓度 (
7、MIC)和最小杀菌浓度 (MBC)测定。方法如下 :取 12支灭菌、带塞试管 ,编号 1 12,每管加 2. 00ml灭菌普通肉汤培养基 ,然后于第 1支试管中加入药液 2. 00ml,混匀后吸取 2. 00 ml至第 2管 ,第 2管混匀后吸取 2. 00 ml至第 3管 ,连续倍比稀释至第 10管 ,混匀后弃去 2. 00 ml;第 11管不加药物作为对照 ,观察细菌生长情况 ;第 12管加入药液 2. 00 ml,混匀弃去 2. 00 ml,不加细菌 ,观察受试中药是否有污染。向编号 1 11的试管中各加入上述稀释菌液 0. 10ml,混匀 ,放置于37 恒温培养箱培养 20 24 h后
8、观察结果。以肉眼观察 ,通过与 11、 12管对比 ,不发生混浊变化的最高药物稀释倍数为该药物的 MIC值。将所有清晰无菌生长的试管培养液接种于营养琼脂平板培养 24 h,以菌落数不超过 5个的最低药物浓度为该药物的 MBC值。 2. 2. 4. 2 纸片扩散法测定抑菌强度 方法 :取直径为 90. 00mm无菌平皿 ,加入热融化的普通琼脂培养基 30. 00 ml,水平放置在接种台上凝固。用灭菌的棉签分别蘸取上述 2种细菌均匀涂布于琼脂平板表面 ,待平板水分干燥后 ,用无菌镊子夹取药敏纸片贴于平板上 ,每平板帖 4 张 (其中 1 张为 CK) ,预扩散 15 min,然后倒置在培养箱中 3
9、7 恒温培养 24h,每种药物设置 5个重复。 结果判定 :用卡尺测量各药敏纸片的抑菌环直径 ,根据有无抑菌环及抑菌 环直径大小判定药物抑菌效果。结果采用方差分析 ,数值用 .x SD表示。抑菌效果判定标准按中药药理学 2 :“ - ”表示抑菌环直径小于 6. 00 mm,判定为无抑菌作用 ;“ + ”表示抑菌环直径为 6. 00 10. 00 mm,低敏 ;“ + + ”表示抑菌环直径为 10. 00 15. 00 mm,中敏 ;“ + + + ”表示抑菌环直径为 15. 0020. 00mm,高敏 ;“ + + + + ”表示抑菌环直径超过 20. 00 mm,极敏。 3 结果与分析 3.
10、 1 苦丁茶 3种粗提物对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌的 MIC和 MBC 由表一表二可知，粗提物 1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的 MIC分别为 3. 91、31. 25mg/ml,MBC分别为 3. 91、 31. 25 mg/ml,MIC与 MBC浓度比粗提物 2和粗提物3小 ,说明粗提物 1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌作用优于后两者 ,抑菌作用最强 ;粗提物 2对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的 MIC分别为 125、 500 mg/ml,MBC分别为 250 mg/ml、 500 mg/ml,抑菌作用最弱 ;粗提物 3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌作用介于这两者之间 ,MIC分别为 15.
11、63 mg/ml、 62. 50 mg/ml,MBC分别为151.63 mg/ml、 62. 5 mg/ml。 3种粗提物对金黄色葡萄球菌的 MIC和 MBC的浓度比大肠杆菌低 ,说明这 3种粗提物总体上对金黄色葡萄球菌抑菌效果优于大肠杆菌。 3. 2 苦丁茶 3种粗提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌强度 由表 3可知 ,粗提物 1对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果最好 ,抑菌能力最强 ,抑菌作用为高敏 ,抑菌环直径达 (17. 46 0. 40) mm,对大肠杆菌的抑菌作用为中敏 ,但比粗提物 2和 3好 ;粗提物 2对这 2种菌的抑菌能力都较差 ,均为低敏 ,尤其是对大肠杆菌 ,抑菌环直径只
12、有 (6. 30 0. 16) mm。粗提物 3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌作用相差不大 ,都为中敏。4 结论与讨论 苦丁茶具有清热解毒、杀菌消炎、降血脂、降低胆固醉、 抗辐射、抗衰老等作用 ,也 具有良好的保健作用。通过对 3种粗提物的 MIC、 MBC和抑菌环直径的测定 ,结果表明 3种粗提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌各有不同程度的抑菌作用 ,其中 ,粗提物 1对 2种细菌均有较好抑菌效果 ,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的 MIC分别达到 3. 91、 31. 25mg/ml,远小于粗提物 2和粗提物 3浓度 ,对金黄色葡萄球菌抑菌强度为高效 ,直径达 (17. 46 0. 40) mm
13、,对大肠杆菌的抑菌能力稍差 ,直径为(12. 52 0. 31) mm,但比其他 2种粗提物大 ,抑菌能力强 ,粗提物 3的抑菌能力 介于两者之间 ,效果最差的为粗提物 2,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌作用较弱 ,这可能与提取后纯化不彻底有关 ,据 LIN Xiong-ping等报道 ,经过乙醇离心沉淀后加入氯仿与正丁醇脱蛋白得到多糖后有较强抑菌作用 3 ,不过有待深入研究。由试验结果还可课发现 ,苦丁茶 3种粗提物总体上对金黄色葡萄球菌比大肠杆菌的抑菌效果要高 ,结果与 HUANG Huang 4 、 WU Zhou-he 5 等人的报道一致 ,不同方法提取所得到的粗提物对 2种病原菌抑菌
14、效果不同 ,粗提物 1最好 ,粗提物 3其次 ,粗提物 2最差 ,这 可能与粗提物的不同有效成分有关 ,从而影响抑菌的效果 ,需有待进一步分离、鉴定及研究。粗提物 1不但抑菌效果好 ,而且提取方法、步骤简单、仪器设备价格低 ,同时不产生废气 ,可为临床应用上提供支持和方便。粗提物 3需要使用有机溶剂 ,大量使用容易产生三种废弃物质 ,造成环境带一定的危害。考虑到抑菌能力及成本、环保和简便等因素 ,建议采用提取粗提物 1的方法比较实用。该试验 3种粗提物在提取过程中由于需要用到高温高压 ,某些成分遇热或高压可能会分解或失效 ,使其药理活性降低 ,可能 从而导致抑菌能力的下降 ,将有待进一步的研究
15、。有关苦丁茶不同 提取方法的抑菌试验对比 ,在国内还未见有公开报道。 参考文献 1 Jiangsu New Medical College.The dictionary of Chinese traditional mediicineM.Shanghai：Shanghai Science and Technology Press.1997:10.(in Chinese). 2 WU GJ.ZHANG ZW.LI HR.et al.Antibacterial effects of Chinese herbal med icines on six pathogenic bacteria from
16、dairy cows mastitisJ.Journal of Beijing Agricultural College.2003.18(3):195-198.(in Chinese) 3 LIN XP.CHEN JQ.SU YC.et al.Antimicrobial activities of polysaccharde extracts from Flos lonicerae and llex kudingcha J.Subtropical Plant Science,2008.37(1):51-53. (in Chinese) 4HUANG H.HUANG XM.LI J.et al.
17、Experimental study of antisepsis sbility of llex kudingcha J.Journal of Hengyang Medical College.2999.27(2):123-124. (in Chinese) 5 WU ZH .ZOU P.XU Y.Bacteriostasis of Momordica charantia L.and llex kudingcha C.J.Tseng and development of bagged tea from themJ.The Beverage industry.2003.6(5):11-13. (in Chinese) 外文翻译原文 Ageicultural Science and Technology (2009) 10(6): 125127
