1、 本科毕业设计 （ 20_ _届） 生物工程 野生甲鱼对免疫抑制造模小鼠的影响研究 摘 要 本文采用地塞米松磷酸钠注射液（ 0.25mL/只）注射小鼠构建免疫抑制模型，饲喂野生甲鱼、温室甲鱼和普通饲料后，检测小鼠体重、脾脏系数、胸腺系数、 MDA 活性、吞噬指数等生理生化指标。结果发现实验小鼠在试验期间生长发育未见异常，初、末体重各组间均不显著；小鼠不同性别雌雄间脏器系数比较，各组间脾脏系数差异极显著（ P0.05）；肝组织 MDA 含量测定结果显示，野生甲鱼对 照组均低于颗粒饲料对照组和温室甲鱼对照组，但差异不显著，表明野生甲鱼一定程度上能够减少肝组织中 MDA 含量，减少细胞受自由基的攻击
2、；碳廓清实验测定结果显示，无论是两种性别还是单一性别小鼠比较， 组间均无显著性差异。 本实验通过研究野生甲鱼对免疫抑制造模小鼠的影响，来说明和证实野生甲鱼的营养价值和保健功效。 关键词： 免疫抑制模型；野生甲鱼；营养价值；保健功效 ABSTRACT Immune suppression model was build by injection of Sodium Phosphate into mice (0.25mL per mice). After feeding the following three feedstuffs: wild-type soft-shelled turtle, d
3、omesticated turtle and normal diet, the physiological and biochemical parameters: body weight, organ coefficient, thymus coefficient, liver MDA activity and phagocytic index were detected. The results showed that during trail, the growth is normal and no significant difference between initial bodywe
4、ight and final weight was observed. The organ coefficients between male and female were significantly different among groups（ P0.05） . Wild-type soft-shelled turtle feeding caused the mice liver MDA activity lower than that by domesticated turtle and normal diet but no difference significantly among
5、 them, suggesting wild-type soft-shelled may reduce the content of MDA and prevent cells from free radical. The present work focused on the influence of wild-type soft-shelled on immune suppression mice model, aiming to identify the nutritive value and medical and health care value. Key words: Immun
6、osuppressant model; turtle; dietary value; health claim I 目 录 1 前言 . 2 2 材料和方法 . 2 2.1 实验材料 . 2 2.1.1 试验甲鱼及饲喂料 . 2 2.1.2 实验动物 . 2 2.1.3 实验试剂 . 3 2.1.4 实验设备 . 3 2.2 实验方法 . 3 2.2.1 饲喂小鼠甲鱼饲料制备 . 3 2.2.2 实验动物分组处理 . 3 2.2.3 免疫抑制造模小鼠构建 . 4 2.2.4 小鼠免疫指标测定方法 . 4 2.2.5 处理分析 . 5 3 结果与分析 . 5 3.1 野生甲鱼对小鼠生长发育的影响
7、 . 5 3.2 脾脏系数和胸腺系数测定 . 7 3.3 腹腔巨噬细胞功能影响 . 7 3.4 MDA 含量的测定 . 8 3.5 小鼠碳廓清实验的影响 . 9 4 结论和展望 . 9 参考文献 .11 2 1 前言 中华鳖（ Trionyx Sinensis），又名“中国鳖”，俗称甲鱼、团鱼、水鱼、脚鱼、王八、神守等。它 是一种珍贵的、经济价值很高的水生动物。 据测定， 100 克鳖肉中蛋白质含量达 16.5 克。此外，还含有丰富的钙、磷、铁、硫胺素、核黄素、尼克酸、维生素 A 等多种营养成分。 鳖蛋白的氨基酸不但含 量高，而且种类齐全，人体所需的 8 种必须氨基酸占其氨基酸总量的 60%1
8、。同时朱秋华等 2通过比较仿生鳖与温室鳖的营养成分，结果表明仿生鳖的粗蛋白含量极显著地高于温室鳖，仿生鳖肌肉中 9 种必需氨基酸的含量和鲜味氨基酸的含量都高于温室鳖。 中华鳖的 肉及其提取物 还能 有效地预防和抑制肝癌、胃癌、急性淋巴性白血病，并用于防治因放疗、化疗引起的虚弱、贫血、白细胞减少等症 。 据本草纲目记载 ： 鳖肉可治久痢、虚劳、脚气等病；鳖甲主治骨蒸劳热、阴虚风动、肝脾肿大和肝硬化等；鳖血外敷可治颜面神经麻痹、小儿疳积潮热，兑酒可治妇 女血痨；鳖卵能治久泻久痢；鳖胆汁有治痔瘘等功效。鳖头干制入药称 “ 鳖首 ” ，可治脱肛、漏疮等。用活鳖、鳖甲或鳖甲胶做原料配制的中成药有二龙膏、
9、乌鸡白风丸、化症回生丹、史国公酒、鳖甲煎丸等 。 诸学良 3等根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”，做了小白鼠动物喂养试验，以类推对人体功能作用。试验结果可以认为中华鳖胶囊有抗疲劳作用，有免疫调节作用和有改善性功能作用。另外王慧铭等 4等研究发现，鳖甲多糖（ trionyx sinensis polysac-charides，TSP）能显著对抗免疫抑制剂引起的小鼠免疫 器官萎缩，对免疫器官具有保护作用，表明 TSP可改善免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能。 TSP 可显著提高小鼠血清半数溶血值、外周血 T淋巴细胞 CD4 亚群的比例，可显著增强小鼠迟发性超敏反应，表明 TSP 可显著增强免疫抑
10、制小鼠体液免疫和细胞免疫功能。 目前肿瘤是严重危害人类健康与生命的疾病之一，癌症患者本身机体抵抗力就低，经过放疗和化疗以后机体抵抗力就更低，影响到患者的康复和预后，中华鳖具有抗肿瘤作用。潘宏铭等 5通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率及瘤体比观察鳖甲多糖对肿瘤生长的影响，结果表明鳖甲多糖能明显减小 S180 荷 瘤小鼠的瘤重和瘤体比（ P0.05）。 表 4 饲喂雄性小鼠体重变化的情况 组 别 地塞米松磷酸钠注射剂（ mL） 初平均体重 /g（ sd） 试验后平均体重 /g （ sd） 颗粒饲料对照组 等量的生理盐水 40.82 4.94 43.95 5.73 温室甲鱼对照组 等量的生理盐水 40.
11、64 4.26 44.88 4.45 续表 4 组别 地塞米松磷酸钠注射剂（ mL） 初平均体重 /g（ sd） 试验后平均 体重 /g （ sd） 野生甲鱼对照组 等量的生理盐水 41.07 2.36 44.19 3.59 免疫抑制对照组 0.25 43.07 5.70 40.54 6.39 温室甲鱼免疫抑制组 0.25 42.37 2.81 39.65 3.18 野生甲鱼免疫抑制组 0.25 42.97 3.41 39.33 4.39 表 5 饲喂雌性小鼠体重变化的情况 组别 地塞米松磷酸钠注 初平均体重 /g 末平均体重 /g 6 射液（ mL） （ sd） （ sd） 颗粒饲料对照组
12、等量生理盐水 34.30 0.81 35.49 1.23 温室甲鱼对照组 等量生理盐水 34.23 2.98 37.24 3.65 野生甲鱼对照组 等量生理盐水 34.05 2.94 35.76 3.25 免疫抑制对照组 0.25 34.00 4.64 31.37 5.77 温室甲鱼免疫抑制组 0.25 34.75 2.73 31.84 3.22 野生甲鱼免疫抑制组 0.25 35.02 2.28 31.63 2.21 由表 4、 5，图 1、 2 可知，小鼠在打了免疫抑制剂地塞米松磷酸钠注射液后，体重明显下降，这是因为抑制剂对小鼠产生免疫 效应，使小鼠的体质下降，继而小鼠产生食欲下降，身体抵
13、抗力下降等现象。另外，注射生理盐水的小鼠比打免疫抑制剂的小鼠显得活泼、好动，而且小鼠的体重呈现增长的趋势。也许是因为喂食的时间短，饲喂甲鱼的小鼠的体重与饲喂颗粒饲料的小鼠的体重无明显的差异。还有就 是 小鼠体重的变化不是单因素控制的，是由摄食量、活动量、环境等因素共同作用。由于每只小鼠每天摄食量存在一定的差异，根据对小鼠喂食情况观察，每笼小鼠每天给予等量的食物，发现其摄食量基本相近，故将摄食量造成的体重差异忽略不计。 2 0 . 0 02 6 . 03 2 . 0 03 8 . 0 04 4 . 0 05 0 . 0 0颗粒饲料对照组 温室甲鱼对照组 野生甲鱼对照组 免疫抑制对照组温室甲鱼免疫
14、抑制组 野生甲鱼免疫抑制组体重/g初体重末体重图 1 实验雄性小鼠体重变化情况 7 2 0 . 0 02 6 . 0 03 2 . 0 03 8 . 0 04 4 . 0 0颗粒饲料对照组 温室甲鱼对照组 野生甲鱼对照组 免疫抑制对照组温室甲鱼免疫抑制组 野生甲鱼免疫抑制组体重/g初体重末体重图 2 实验雌性小鼠体重变化情况 3.2 脾脏系数和胸腺系数测定 脾脏是机体最大的外周性免疫器官，是 T、 B 淋巴细胞定居和对抗原刺激进行免疫应答的场所。因此，测定脾脏系数的变化能直接反映脾脏细胞的结构和功能的状态。而胸腺和脾脏是机体的主要免疫器官，免疫抑制剂可使胸腺、脾脏萎缩；免疫增强剂可使胸腺、脾脏
15、增重。因此，胸腺和脾脏可作为观察野生鳖对小白鼠免疫功能影响的指标之一。 表 6 各组小鼠免疫器官重量指数的变化 组别 脾脏系数 （ g/g） 胸腺系数 （ g/g） 颗粒饲料 对照组 0.350.062ab 0.0300ab 免疫抑制 组 0.350.013ab 0.0180.001b 温室甲鱼免疫抑制组 0.350.078ab 0.0430.015a 野生甲鱼免疫抑制组 0.320.059b 0.0160.003b 温室甲鱼对照组 0.470.097a 0.0230.004ab 野生甲鱼对照组 0.460.12a 0.0200.005b P 值 0.1108 0.1025 注：同列数据肩标小写字母相同或无字母表示差异不显著（ P0.05），小写字母完全不同表示差异显著（ P0.05），大写字 母完全不同表示差异极显著（ P0.01）。 由表 6 可见，温室甲鱼和野生甲鱼对照组小鼠的脾脏系数明显大于注射地塞米松磷酸钠注射液免疫抑制剂小鼠的脾脏系数，同时也大于单一用颗粒饲料喂养的小鼠，结果表明甲鱼能促进小鼠的生长发育。而小鼠的各组胸腺系数之间的差异均显著。 3.3 腹腔巨噬细胞功能影响 在机体的免疫过程中，巨噬细胞是体内重要的抗原递呈细胞 10，作为主要的免疫细胞之一，具有噬菌、杀菌、清除机体内已损伤和衰老的细胞的功能。
