1、 1 本科毕业论文外文翻译 译文： 酵母间的原生质体融合 来源： JOURNAL OF FERMENTATIO AND BIOENGINEERING Vol.84,No.2,158-161.1997 SEONG HYUN CHOI,CHANG SUNG,MAN JIN OH,AND CHAN JO KIM* 摘要 Saccharomycopsis fibuligera和 Saccharomyces cerevisiae可以用来原生质体融合。 Saccharomycopsis fibuligera K-33可产生葡萄糖糖 化酶和淀粉酶。其融合子可以提高淀粉酶生产，其在 10%的可溶性淀粉介质的情
2、况下可在 3天内产生 3.1%(v / v)酒精。 2天以后融合子的淀粉酶活性比变异的 K-33高 2.5倍。 关键词 原生质体融合； Saccharomycopsis fibuligera； Saccharomyces cerevisiae、乙醇 生物燃料可利用酿酒酵母生产一种工业乙醇，淀粉液化糖化过程中需要葡萄糖或解放麦芽糖，一个发酵酵母能产生淀粉酶（酒井等人） 1。酵母菌淀粉发酵品系的繁殖 糖化酵母 可由原生质体融合改善淀粉发酵糖化酵母能力 S.淀粉酶已经得到广泛应用于原生质体杂交融合，用来改善酵母酿酒和蒸馏酒。许多原生质体融合的研究都有涉及到葡萄糖糖化酵母和一个酿造 葡萄汁有孢汉生酵母
3、 之间融合成多倍体 酵母菌 2。通过体细胞杂交的方法构造出一种混合杂交融合的产品已经可以用于生理分析测试 3，面包酵母和一个突变的糖化酵母被选定位用于体细胞融合亲本菌株 4。在 S 糖化酵母的淀粉由于分解系统里、缺乏 -糖化酵母和脱支的活动而影响生产乙醇 5。据报道另一个属间原生质体融合研究用Saccharomycopsis fibuligera和 Saccharomyces cerevisiae融合得到了后续的重组体6。目前的研究工作，已经取得一种新的酵母菌种，该菌种能直接从淀粉生产乙醇，而不需要通过一个单独的糖化过程。 Saccharomycopsis fibuligera 的 K-33
4、酵母和 sD-71 的进行原生质体融合可以使淀粉分解。指定一个变异融合子 101，经确认不能生产的高浓度乙醇的淀粉酶通过淀粉介质，得到了与它相适的生理特征。 生产乙醇作为生物质燃料工业可以利用啤酒酵母液化和糖化淀粉得到葡萄糖或麦芽糖。从淀粉生产乙醇经济，而不需要通过糖化过程，则发酵酵母很有必要产生淀粉酶。（酒井等）根据描述的方法变异的 K-33 原本不被确认为一种Saccharomycopsis fibuligera 7,8。这是由于多级萌芽和菌丝体形成。有光泽成帽子2 形状的含有两个或四个球形子囊囊孢子从而产生横向的菌丝从而导致分枝菌丝形成。按照同化、应变 K-33 Saccharomyco
5、psis fibuligera 的生理特性、发酵糖类和碳化合物和硝酸盐，可以一目了然的知道 D-71 的球形或椭圆形的酵母细胞在YPG 介质形成多元化的出芽细胞和囊孢子或 假菌丝体 ，但不是菌丝体 9。电子显微镜扫描观察 微观结构的两个被利用的酵母，如图一所示。 图 1 两个酵母扫描电子显微镜使用。 （ 一）最大 fibuligeru的 K -33;（二）最大 cerevisiue的 D -71 从 Saccharomycopsis fibuligera K-33制备丙酮沉淀可溶性淀粉通过反应产物采用薄层色谱进行了分析 (图 2)。这种和 2%可溶性淀粉混合在 30 下培养 2小时酶解。反应液
6、上有铝薄层板 (60默克公司、德国 )。薄层板 二苯胺 喷过苯胺 30 进行干燥 10。反应产物葡萄糖淀粉酶的组成除了细胞外还有麦芽糖， 麦芽三糖 、低聚糖、暗示 Saccharomyces cerevisiae K-33葡糖糖化酶 和 a-淀粉酶 生产。淀粉酶的水解液通过淀粉酶产生了 10-l融合子。 表 1 原生质体融合酵母菌株 应变 相关表现型 S.扣囊复膜孢酵母 S.啤酒酵母 met-,gal-,cyc*,dex gal+,cyc* met-,需要作为一种生长因子蛋氨酸 。 gal-,不吸收作为单一碳源半乳糖 。 gal+,同化物半乳糖作为单一碳源 。 cyc,生长在 1000 ppm
7、 的放线菌酮 。 cycs,不会增长在 50 ppm 的放线菌酮 。 dex,发酵糊精 。 3 异变 K-33是 K-33酵母和 Saccharomycopsis fibuligeraD-71两个的 YPG介质 (酵母膏 0.3，蛋白胨 0.5倍，谷氨酸情况下 5， pH值 5.0)。酵母细胞通过离心分离、一个被渗透中断 (10毫米磷酸钠缓冲含 0.1毫米 EDTA和 0.5米，山梨糖醇 )和 在 30度下 在含 1 2 -巯基乙醇同一介质中 预培养 10min。洗后与渗透地稳定介质 ,这些细胞被培养通过 Zymolyase-20T0.01-0.1毫克 /毫升 (麒麟酿造。有限公司，日本 )
8、在稳定介质中 30 下渗透地溶解 60min和再清洗一次。这两种全不同的 原生质 体 Saccharomycopsis fibuligera的 K - 33和酿酒酵母的 D - 71是在混合比 1： 1，在一个融合的介质（聚乙二醇 4000孵育 40氯化钾 0.5米 ， 40毫米氯化钙）在 30 下离心洗融合 20分钟 通过 乙二醇融合的媒介 。 16小时后，由这两种酵母形成的原生质4 体迅速减少 。 融合子 比 亲株的碳源利用 明显降低 见表 2。该融合子和 S. 酵母的 D - 71能 产生 半乳糖，海藻糖 ， 及琥珀酸，但 Saccharomycopsis fibuligera的 K -
9、 33无法 产生。 对于 可溶性淀粉研发，融合子 可 生产 3.1（体积 / v）的乙醇 ， 而亲株 ，Saccharomycopsis fibuligera 的 K - 33 和酿酒酵母 - 71 生产的 2.5 （酒井等人）。(1)发现 ,BC-3融合子在 10%可溶性淀粉经诱导产生的诱变所得的 S .糖化酵母 产生2.5%(w / v)的乙醇。之后在 BC 中培养 3 至 4 天 ,融合子通过一样的媒介产生3.1%(w / v)乙醇。 表 2 由母本和融合子组成的碳化物 10-1 *符号的 +， +， -，表明额外的增长 ， 正常生长 ， 不分别增长。 表 3 酒精生产率父母和融合子 1
10、0 - L 的可溶性淀粉培养基 粗酶液 的 培养滤液 ： 0.2 毫升酶液中加入 2.8 毫升在 0.1M0.3可溶性淀粉溶液磷酸钠缓冲液（ pH5.8） ， 并在 40培养 1 小时 后 ， 该还原糖形成水杨酸（ DNS） 11。淀粉酶生产和酵母菌株干重产量列图。该融合子淀粉酶活性在 10可溶性淀粉中显示最大峰值 （ 37 单位 /毫升） ， 之后从第 2 天至 3 天迅速下降活 力 ; 37单位 /毫升的 2.5 倍的 Saccharomycopsis fibuligeraK-33 淀粉酶活性在 3 天 后其 淀5 粉酶活性 比 Saccharomycopsis fibuligera 的
11、K - 33 小 。 四峰融合株 的 10 升物质产生的测量干物质 分别 在 3 天（ 12 克 /升）和 6 天形成 10可溶性淀粉。西尔斯和斯图尔特发现 Saccharomycopsis fibuligera 241 a -淀粉酶的活性增加 ， 迅速下降 ， 血糖浓度的期间，在生长培养基以下进入 4 天 ，而 血糖水平接近 18 lop4 M 和 a -淀粉酶的活性不能被检测到 ， 但在糖化酶活性增加达到最高后来的 5 天生长周期阶段 ， 因此 ， 不会出现葡萄糖糖化酶 降低 活 力12。有人建议 ， 融合子 10 - 1 可能产生比 亲本的 一对 变异 的 K 33 的 a -淀粉酶用量大。 有活力 a -淀粉酶 可以 更好的利用重要淀粉和重大物质 13。 （ 花王等 ） 14据研究 糖化液化滤液在不同菌株（前者的 Saccharomycopsis fibuligera） 有 不同比例 。 6 7 8 9
