1、毕业设计开题报告 应用化学 液相色谱分析分离甲地孕酮中 2 -甲基化杂质 一、选题的背景和意义 色谱技术的研究起步于 20 世纪初，俄国植物学家 M.S.Tswett 发表了题为 一种新型吸附现象在生化分析上的应用 的研究论文中提到了一种用吸附原理分离植物的方法，并命名为色谱法。但由于这种色谱分离技术速度慢且效率低，没有受到科学界重视。 1938年获得诺贝尔化学奖的德国化学家 Kuhn采用 Tswett 色谱分离技术，在维生素和胡萝卜素的分离和结构的分析中取得了重大成果，色谱法因此得到各国科学家的关注。可以预想到，在接下来的 几十年中，色谱技术更是飞速发展。随着 1940 年 Martin 和
2、 Synge 提出液液分配色谱法后， 1952 年 James 和 Martin发明了气相色谱因此获得 1952 年诺贝尔化学奖。紧接着，通过各国科学家的努力，还分别开创了毛细管气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管超临界色谱、毛细管电泳和电色谱等分析分离技术，使色谱技术的应用日益广泛。 高效液相色谱是近几十年来分析化学中最活跃的领域之一。这种将分离手段及检测系统相连接的分析分离技术，逐步成为在生化药物、精细化工产品、环境保护等各个领域中主要的物质分析分离方法。其具有操 作条件温和、选择性高、批处理量较大和操作自动化等优点，可以将物化差别很小的复杂化合物分离，使之成为分析分离各种物质最有效的方法之
3、一。液相色谱法对要进行分离的样品要求较低，不受样品挥发度和稳定性的限制，且非常适合含有离子型化合物、不稳定的天然产物等大分子的生物药品，使之在广泛的领域发挥作用。因此，高效液相色谱法仍是从事研究工作和工业生产中应用比较普遍的色谱法。 它的原理是在被流动相液体带入色谱柱中时，利用复杂混合物在固定相和流动相中不同的分配系数、吸附能力等因素，使各组分彼此分离，从而达到分离的目的。高效液相 色谱按操作方式和目的来分，可分为分析型和制备型两种。为了了解样品性质、结构、组成等信息的为分析型；而制备型则是为了获得目标组分。所以，可以说分析型为分析工具，而制备型为分离技术。由于分析型和制备型需要的操作条件明显
4、不同，因此前者1 进样量越小越好，且要避免色谱柱的超载问题；后者则要提高产量，色谱柱的超载是必须的。 目前，对于利用高效液相色谱对药品中未知物质的检测和分离的研究正不断加深，这对药物的生产开发具有重要意义。此课题将对药品中未知物质进行检测，并将其进行分离提纯。为该药品的药性、成分及结构提供科学依据，对 与今后药品的大量生产和上市销售起到促进作用。 二、研究目标与主要内容 （含论文提纲） 研究目标：利用高效液相色谱，分析分离甲地孕酮中的 2-甲基化杂质 主要内容： 1、 将该医药原料药中 2-甲基化杂质 进行富集，找出合适的方法，液相检测富集含量不少于 10%。 2、 摸索出液相色谱分析分离该目
5、标产物的最佳条件。 3、 将液相柱（ c18 柱）换为 c18 半制备柱，以加大进样量，收集 -甲基化杂质 。 4、 对 -甲基化杂质 收集液进行浓缩，分析，继而分离，直至纯度达 85%以上 。 三、拟采取的研究方法、研究手段及技术路线、实验方案等 研究方法及路线： 原料药进行处理，后利用液相色谱仪对药品中 2-甲基化杂质进行分析并得到最佳条件，在最佳条件下从甲地孕酮中分离出 2-甲基化杂质，且对 2-甲基化杂质进行浓缩，分析。 实验方案： 1.原料药的预处理 (杂质过滤，寻找适当溶剂溶解，重结晶及 2-甲基化杂质的富集 ) 2.液相色谱仪的使用及样品分析分离 2.1 液相色谱仪器的使用 在正
6、式进行样品检测前，通过液相色谱仪的预热，以及对设备的清洗，冲柱，排空气等过程，并通过计算机，对液相色谱仪进样条件参数进行设置，补充不足的 流动相，检查设备是否异常，等待基线走稳，使液相色谱仪达到运行的最佳状态，为后面的检测做好准备。 2.2 样品的分析与检测 取经过富集等预处理的样品，取少量溶质，并加入少量色谱级甲醇进行溶解 (保持2 较高的百分比，可使峰形明显 )，放在一旁待用。到设备各种条件稳定，进样进行检测。仔细观察峰高、峰形、峰面积及时间等各个因素，来确定该样品的最佳分离条件。分别取流动相为 甲醇 :水 =80%:20%、 70%:30%、 67%:33%和 65%:35%这 4 组条
7、件对样品进行检测，进样量保持为 20L。通过所得图形、数据得出最佳分离条件 。 2.3 样品的分离 确定最佳条件后，将液相柱 (c18 柱 )换为 c18 半制备柱，将流动相调整为最佳流动相比例，待设备各种基本条件稳定后，进行进样。加大进样量到 150L。当计算机出现2-甲基化杂质 的峰时，将出液管的液体接出液体 A，并保留。 3. 产物的处理 3.1 液体 A 的处理 将所得到的液体 A 进行重结晶，从而得到固体粉末 A。取少量粉末 A 溶于色谱纯甲醇，并用液相柱 (C18 柱 )进行分析，检测其纯度。 3.2 目标产物的分析 通过紫外、红外核磁和质朴对所获得产物进行结构及性质鉴定。 四、
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12、16-2011.2.5 实验方案的实施阶段，包括实验优化等 2011.1.5-2011.2.10 书写毕业论文，并上交完整初稿 2011.2.10-2011.3.1 毕业论文第一次修改，补做部分实验数据 2011.3.5-2011.4.10 毕业论文第二次修改 2011.4.11-2011.4.15 毕业论文定稿，并完成网上提交 2011.4.9-2011.5.7 答辩 ppt 的制作 2011.5.9-2011.5.16 论文答辩 六、研究的主要特点及创新点 本实验应用高效液相色谱法，由于其操作条件温和、选择性高、批处理量较大和操作自动化等优点，提高了工作效率，能够准确对甲地孕酮中的 2- 甲基化杂质进行分析、提纯。
