1、文客久久 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 水产品中氟甲喹残留检测方法研究 学 院： 学生姓名： 专 业： 药学 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 目录 摘 要 .1 Abstract.2 1 前言 . 3 1.1 概述 . 3 1.2 氟甲喹的化学结构及理化性质 . 3 1.3 氟甲喹的作用机理 . 4 2 实验材料、主要仪器与试剂 . 4 2.1 实验材料 . 4 2.2 仪器 . 4 2.3 主要试剂 . 4 3 实验方法 . 5 3.1 标准曲线的制备 . 5 3.1.1 标准溶液的配制 . 5 3.1.2 最佳条件的选择 . 5 3.1.3 标准曲线的绘制 . 5 3.2 仪
2、器精密度的检测 . 6 3.3 检测限和定量限 . 6 3.4 提取方法 . 6 4 实验结果与讨论 . 6 4.1 高效液相色谱最佳检测条件的选择 . 6 4.1.1 检测波长的选择 . 6 4.1.2 流动相的选择 . 7 4.1.3 流速的选择 . 7 4.2 标准曲线如图 3、图 4所示 . 9 4.3 精密度的检测 . 10 4.4 氟甲喹的检测限 和定量限 . 10 4.4.1 用公式法计算 . 10 4.4.2 用逐级稀释法测 . 10 4.5 样品前处理方法及回收率分析 . 11 4.5.1 提取溶剂的选择 . 11 4.5.2 回收率实验 . 11 4.5.3 杂质峰分析 .
3、 11 5小结 . 12 参考文献 . 12 致 谢 . 错误 !未定义书签。 毕业论文 1 水产品中氟甲喹残留检测方法研究 摘要 用高效液相色谱法检测水产品中氟甲喹的残留量，用 醋酸乙腈和无水硫酸钠作为提取液，匀浆、离心、浓缩。结果表明检测水产品中氟甲喹残留的高效液相色谱最佳条件如下：紫外光检测，检测波长为 248nm，流动相为 0.1%甲酸水：乙腈（ 40:60），柱温为 35。 氟甲喹的标准曲线线性相关系数为 0.9999，精密度为 0.35%，对带皮的鱼肉组织进行六种浓度的回收率检测测定，其回收率在 8490%之间。结果证明此方法能够满足鱼肉中氟甲喹残留的简便、快捷、高效检测。 关键词
4、 氟甲喹；水产品；残留；高效液相色谱法 毕业论文 2 Research of Detection method of Flumequine Drug Residues in Aquatic Products Abstract High-performance liquid chromatographic method for determining residues of flumequine in aquatic products.With acetic acid acetonitrile and no water sodium as extract,homogenate,centrifug
5、al,enrichment.The results show that the best conditions of high-performance liquid chromatographic to detect the flumequines residues in aquatic products as follows:ultraviolet detector;detected wavelength is 248nm;mobile phase is 1% formic acid water:acetonitrile(40:60);column temperature is 35 ;th
6、e standard curves linear correlation coefficient of flumequine is 0.9999.Using six kinds of drug concentration to test the drugs recovery in the fish tissue.The recovery range is between 84% and 90%.The result shows that the method can satisfy the simple quick and high-efficient testing of flumequin
7、es residues in aquatic products. Key words Flumequine； Aquatic products； Residue； High-performance liquid chromatographic method 毕业论文 3 1 前言 1.1 概述 喹诺酮类（ Quinolones）药物是一类人工合成的人畜共用抗生素类药物，对革兰氏阴性菌和阳性菌、支原体、衣原体等有抗菌作用，常被用于水产养殖中的病害防治。随着人们对食品安全问题的关注，渔药残留问题不仅成为各国相关部门关注的焦点，也是普通民众关心的社会问题。 氟甲喹 (Flumequine， FQ)属
8、喹诺酮类抗菌药物，此类药物 抗菌谱广 、疗效显著、价格低廉、 不易产生交叉耐药性 ，因此被广泛用于人体和动物的多种感染性疾病的预防和治疗。 随着这类药物的大量使用，会在动物体内残留，人类食用也会对人类的健康带来隐患，造成神经系统、消化系统、泌 尿系统的损害。目前，欧盟 81规定在动物肌肉中氟甲喹的最大残留量为 200g /kg，日本为 600g /kg，我国农业部 82规定氟甲喹的最大残留量为 500g /kg。因此，很有必要建立一种高效、快速分离检测喹诺酮类药物的方法。 目前，水产品中氟甲喹残留量的检测方法主要有高效液相色谱法 83-87、高效液相色谱 -质谱法、酶联免疫吸附法等 98-89
9、。微生物检测法灵敏度较低、检出限无法达到欧盟所规定的最高残留量。高效液相色谱 -质谱联用法大大提高了灵敏度，并且可以进行定性分析，可以满足国际对微量药物残留的 检测，但仪器较为昂贵，很难广泛应用。 本研究采用的是最常用的检测方法 高效液相色谱法，该方法具有使用范围广、选择性强、分析速度快、检测灵敏度高等优点，可用于水产品中氟甲喹的含量测定。 1.2 氟甲喹的化学结构及理化性质 分子式： C14H12FNO3 分子量： 261.25 中文名：氟甲喹 英文名称： Flumequine(FQ) 别名： luoro-6,7-dihydro-5-methyl-1-oxo-1H,5H-benzoijqui
10、nolizine-2- carboxylic acid 产品名称 ： 氟甲喹 ; 9-氟 -6,7-二氢 -5-甲基 -1-氧代 -1H,5H-苯并 (ij)喹嗪 -2-羧酸 理化性质：白色粉末，无臭、无味，不溶于水，能和有机溶剂互溶。 毕业论文 4 1.3 氟甲喹的作用机理 氟甲喹通过抑制细菌核酸的合成，阻止细 菌复制达到杀菌的效果。主要用于畜禽细菌性呼吸道病，大肠杆菌，白痢，沙门氏菌病，伤寒，禽霍乱，葡萄球菌病传染性鼻炎等。水产动物的大肠杆菌病，单孢菌属和弧球菌属病，嗜水气单胞菌有强烈的抑制作。 2 实验材料、主要仪器与试剂 2.1 实验材料 赤红鱼肉，在阴凉处解冻后，加少量 1%醋酸乙腈
11、粉碎备用。 2.2 仪器 表 1 实验所用仪器名称、型号及厂家 仪器名称 型号 厂家 组织捣碎机 JJ-2 上海梅香仪器有限公司 高效液相色谱仪 1200 Agilent Technologies International sarl C18 柱 Syncronis HILIC 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 低温离心机 TDL-40D 上海安亭科学仪器有限公司 超声波清洗器 SK5200HP 上海科导超生仪器有限公司 电热恒温水槽 HH-S 巩义市予华仪器有限公司 恒温干燥箱 DHG-9023A 上海一恒科学仪器有限公司 微型移液器 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 分析天平 BT125D 赛
12、多利斯科学仪器（北京）有限公司 电子天平 BSA 323S 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司 超声波清洗器 SK5200HP 上海科导超声仪器有限责任公司 2.3 主要试剂 表 2 实验所用试剂及其规格、厂家 毕业论文 5 试剂 规格 厂家 乙腈 色谱纯 国药集团化学试剂有限公司 氟甲喹 99% Dr Ehrenstorfer GmbH 冰乙酸 分析纯 AP 上海化学试剂总厂 无水硫酸钠 分析纯 AP 国药集团化学试剂有限公司 正己烷 分析纯 AP 国药集团化学试剂有限公司 甲酸 分析纯 AP 国药集团化学试剂有限公司 纯净水 杭州娃哈哈集团有限公司 3 实验方法 3.1 标准曲线的制备 3.
13、1.1 标准溶液的配制 用 分析天平精密称取氟甲喹标准品 1mg，用乙腈定容在 10ml 的容量瓶中，振摇溶解制成 0.1mg/ml 的氟甲喹标准溶液置于冰箱中以 4保存。 3.1.2 最佳条件的选择 根据氟甲喹的结构性质及查阅的相关资料，分别设置波长为 324nm 和 248nm 进样检测，确定最佳检测波长。 配制 0.1%甲酸水溶液，分别以 V 乙腈 ： V 甲酸水 的比例为 90:10,80:20,70:30,和 60:40的流动相，取 1ml 上述标准溶液进样，记录峰面积和保留时间，确定流动相最佳配比。 在流动相最佳配比条件下，分别设置流速为 0.4ml/min、 0.6ml/min、
14、 0.8ml/min、1.0ml/min。进样检测，并记录峰面积和保留时间，确定检测最佳流速。 注意每次 进样之前色谱柱至少需要平衡 15min， 重复进标准溶液 ， 当峰面积变化 10% 以内 ， 保留时间 5% 以内 ， 方可正式开始进样。 3.1.3 标准曲线的绘制 取上述浓度为 0.1mg/ml 的氟甲喹标准溶液 1ml 用高效液相色谱仪紫外检测器在最佳条件下进样检测。 进样系列标准溶液进样量分别为 5、 10、 15、 20、 25、 30 L。 所有检测样品相应值应在线性浓度范围以内。以上 每一进样量 进 3 针，按每一针所得 峰面积的平均值与对应的标准溶液浓度作标准曲线，并计算回
15、归方程及相关系数，及作数据回毕业论文 6 归分析。 3.2 仪器精密度的检测 取氟甲喹标准溶液 1ml用高效液相色谱仪在最佳进样检测条件下，平行进样六次，记录实验所得峰面积，并计算其 RSD值。 3.3 检测限和定量限 取上述氟甲喹标准溶液 0.5mL 于进样瓶中，加入 0.5mL 乙腈进行稀释，摇匀后进样，测信噪比，同样方法依次对前一稀释好的溶液进行逐步稀释，摇匀后分别测其信噪比，直到所得的信噪比为 10 和 3，记录此时的氟甲喹乙腈溶液浓度，即为氟甲喹的检测限和定量限。 3.4 提 取方法 分别取肌肉样品 1g、 0.8g、 0.6g、 0.4g、 0.2g、 0.1g，各加入 0.1mg
16、/ml 的氟甲喹标准溶液 1ml，振摇超声 10min 后，依次加入 1%（ V/V）醋酸乙腈 6ml、 4.8ml、 3.6ml、2.4ml、 1.2ml、 0.6ml 和无水硫酸钠 0.6g、 0.48g、 0.36g、 0.24g、 0.12g、 0.06g，超声溶解 20min 后， 4离心 5min 后，取上清液倒入另一离心管中，再依次加入乙腈饱和正己烷 2ml、 1.6ml、 1.2ml、 0.8ml、 0.4ml、 0.2ml，振摇 10min， 4离心 5min 后，取乙腈层于电热恒温水槽蒸干， 1ml 乙腈溶解，过 0.45 m 滤膜，进样检测。 4 实验结果与讨论 4.1
17、高效液相色谱最佳检测条件的选择 4.1.1 检测波长的选择 氟甲喹属于喹诺酮类药，喹诺酮类药物含有苯环结构，在紫外可见区有较强吸收，根据所查资料及实验所得结果分析该药在 248nm 有最大吸收。 m i n2 . 5 5 7 . 5 10 1 2 . 5m A U0255075100125150D A D 1 A , S i g = 2 4 8 , 4 R e f = 3 6 0 , 1 0 0 ( F J K S I G 0 0 0 0 3 2 . D )6.976m i n2 . 5 5 7 . 5 10 1 2 . 5m A U010203040506070D A D 1 B , S i
18、 g = 3 2 4 , 1 6 R e f = 3 6 0 , 1 0 0 ( F J K S I G 0 0 0 0 3 2 . D )6.976毕业论文 7 图 1 不同检测波长条件下所得的图谱 4.1.2 流动相的选择 喹诺酮类药物分子上含有碱性集团和羧基，属于两性化合物，在水溶液中通常以离子形式存在，利用高效液相色谱进行分析时容易产生色谱峰拖尾的现象，通常选择 在流动相中加入适当的离子对缓冲液。因为乙腈具有低粘度和高电渗流的双重优点，用乙腈作为有机相时可以有效缩短分析时间。根据前实验结果及相关资料显示，选用乙腈 -甲酸水体系、乙腈 -乙酸体系时色谱峰拖尾严重，选用乙腈 -磷酸盐缓冲液
19、作为流动相时，灵敏度不如乙腈 -甲酸水体系。所以最终选择乙腈 -甲酸铵体系作为流动相，所得峰形尖锐、灵敏度高、基线平稳。 表 3 不同配比流动相的保留时间和峰面积 试样编号 流速（ ml/min） V 乙腈 ： V 甲酸水 T(min) 峰面积 1 0.6 90:10 6.957 2179.6 2 0.6 80:20 7.412 4658.3 3 0.6 70:30 7.835 8973.7 4 0.6 60:40 7.985 12747.5 流动相中有机溶剂所占的比例对保留时间和分离效果有很大的影响。乙腈比例增加，流动相极性减小，物质保留时间也会随着减小。实验考查了不同比例乙腈 -甲酸水流动
20、相体系下的出峰时间和峰面积，结果表明，当乙腈比例增大时，氟甲喹标准溶液检测时的保留时间缩短，但峰面积下降，降低乙腈的比例，保留时间也随之变长，峰面积增加，故确定流动相为乙腈：甲酸水 =60： 40(V/V)。 4.1.3 流速的选择 表 4 不同流速的保留时间和峰面积 试样编号 流速（ ml/min） V 乙腈 ： V 甲酸水 T(min) 峰面积 1 0.4 60:40 9.260 12754,8 2 0.6 60:40 7.029 12747.5 3 0.8 60:40 6.875 10978.4 4 1.0 60:40 6.524 10251.3 实验考查了不同流速条件下，进行标准溶液中
21、氟甲喹的检测，实验结果显示，高效毕业论文 8 液相色谱柱流通面积相对较大，随着流量的增加，两种药物的保留时间明显缩短，当流量过大时，会造成柱内药 物流失过快，影响柱效及检测稳定性，过小则影响出峰时间，根据物质出峰时间和灵敏度等几方面考虑，最终选择 0.6ml/min 为最佳流速。 图 2 流速为 0.4ml/min 时测得的图谱 图 3 流速为 0.4ml/min 时测得的图谱 在以上优化的条件下，乙腈：甲酸水 =60： 40(V/V)为流动相，流速： 0.6mL/min，紫外检测波长为： 248nm， 柱温： 35 时，检测效果最好。在最优色谱工作条件下，标准溶液在 8min 左右即可出峰，标准色谱图见图 2
