1、毕业论文 - 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 不同胁迫条件对大吴风草黄酮含量的影响 学 院： 学生姓名： 专 业： 生物科学 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 毕业论文 - 目 录 摘要 .I Abstract . II 引言 . 1 1 材料与方法 . 3 1.1 实验材料 . 3 1.1.1 植物材料 . 3 1.1.2 试剂 . 3 1.1.3 仪器 . 3 1.2 方法 . 3 1.2.1 预处理 . 3 1.2.2 不同光照下大吴风草黄铜含量 . 3 1.2.3 不同水分胁迫条件下大吴风草黄铜含量 . 3 1.2.4 不同盐浓度胁迫条件下大吴风草总黄酮含量 . 3 1.2.
2、5 标准曲线的绘制 . 4 1.2.6 黄酮含量的测定 . 4 2 结果与分析 . 6 2.1 不同光照条件下大吴风草总黄铜含量的变化 . 6 2.2 不同水分胁迫条件下大吴风草总黄酮含量变化 . 6 2.3 不同盐浓度胁迫下大吴风草总黄酮含量 . 7 3 讨论 . 9 4 结论 . 11 参考文献 . 12 致谢 . 14毕业论文 - 摘要 摘要 植物在生长发育过程中，会经常受到各种环境因子的胁迫影响，如干旱、水涝、冷害、热害、盐害、大气污染等。这些逆境严重影响着植物的正常生长和发育过程。次生代谢是植物长期适应环境而形成的代谢过程，这个过程不同于初生代谢，具有种属、器官、组织以及发育时期特异
3、性，且代谢产物的种类和数量明显受到环境的影响，次生代 谢产物在植物提高自身保护和生存竞争能力、协调与环境关系上充当着重要的角色。黄酮类化合物系色原烷 (chromane)或色原酮 (chromone)的 2-或 3-苯基衍生物，具有 C6-C3-C6 骨架，即由 2 个芳香环 (A 和 B)通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物，是植物生理活动中产生的一种次生代谢产物之一。越来越多的研究表明，植物组织中类黄酮含量与其抗逆性成正相关，增加植物类黄酮的含量，能增强植物抵御干旱，冷害，盐害等逆境的能力。大吴风草是重要的药用植物资源，但栽培条件不同可能造成其药用成分差异，本 文探讨了不同逆境胁迫下大
4、吴风草叶片、叶柄、根状茎总黄酮含量的变化。实验过程中采用分光光度法测定总黄酮含量。 随着光强的增强，大吴风草叶片、叶柄、根状茎的总黄酮含量呈下降趋势；随着水分胁迫强度的增加，大吴风草叶片总黄酮含量逐渐增加，而叶柄的总黄酮含量先升高而后降低，根状茎的总黄酮含量逐渐降低；随着盐胁迫程度的加深，大吴风草叶片、叶柄、根状茎的总黄酮含量均呈下降趋势。由此可见，不同逆境胁迫条件下，植物体内的黄酮含量变化具有很大差异。黄酮类化合物在一定程度上能够增加植物体对逆境的抵抗力，增强植株对恶劣条件的抗性，维 持植物的生存。 关键词 大吴风草；总黄酮含量；逆境胁迫；分光光度法 毕业论文 - Abstract Abst
5、ract Plants often subjected to various environmental factors such as drought, water logging stress, chilling injury, harm, heat, salt and air pollution in the process of development and growth. These stresses affect the normal growth and development process of plant seriously. Secondary metabolism i
6、s a metabolic process that the plants adapt to the environment in a long term; this process is different from primary metabolism. It contains the specificity of species, organs, tissues and developmental stages, and the type and number of the metabolites are significantly influenced by environment.
7、Secondary metabolites in plants play an important role to improve the protection and survival of competition, coordination with environmental relations. Falconoids are the 2 - or3 - phenyl derivatives of the chroman or chromone, with C6-C3-C6 framework, a series of compounds that 2 aromatic rings (
8、A and B ) connected by the three carbon chain in the center, It is a secondary metabolites in the physiological activities of plants. A growing body of research shows that flavonoids content in plant tissues is positive correlated with its tolerance, increased plant flavonoid content, can enhance th
9、e resistance ability of plant to drought, chilling stress, salt stress such as. Fatfujium japonicum Lindl is an important medicinal plant resource, but the difference of cultivation conditions may cause the difference of its medicinal ingredients, studied total flavonoid content changes on blade, pe
10、tiole, rhizome of Fatfujium japonicum Lindl under different stress treatments. Total flavonoids content was determined by using the spectrophotometric method. The results showed that total flavonoid content changes on blade, petiole, rhizome of Fatfujium japonicum Lindl presented declining trend wit
11、h the light intensity increasing, the flavonoid content in leaf of Fatfujium japonicum Lindl increased gradually with the increasing of water stress, the flavonoid content in the petiole increased first and then decreased, the flavonoid content in rhizome decreased gradually, the flavonoid content i
12、n leaves, petioles and rhizomes of Fatfujium japonicum Lindl showed a decreasing trend with the degree of salt stress deepening. Thus, the changes of flavonoids content in plants have great difference in different stress conditions. Flavonoids in the certain degree can increase plant resistance to s
13、tress, enhance the resistance of plant to adverse conditions, to maintain the 毕业论文 - survival of plants. Key words： Fatfujium japonicum Lindl； Total flavonoid content； Abiotic stress；Spectrophotometry毕业论文 - 引言 植物在生长发育过程中经常会受到各种外界因素的影响，如干旱、紫外光照、盐碱，高温等恶劣胁迫环境。这些胁迫环境通常会对植物的生长和发育造成非常严重的影响。随着地球条件的变化，这方面的研
14、究也愈加引人注目。植物体对恶劣胁迫环境的应答也逐渐变成一项众多学者的热门研究课题。 研究发现，植物在面对恶劣环境时，体内生理活动会发生很大 变化，主要表现在次生代谢活动的改变。众多试验和研究中表明，一定胁迫条件下，高温、盐碱、干旱、紫外等逆境条件能够显著提高植物体内黄酮的含量。黄酮类化合物是植物体内次生代谢产物之一，主要分布于植物植株的根、茎、叶、花、种子等器官和组织中。我们平常所食用的蔬菜和水果中含有大量的黄酮。 黄酮类物质是主要是指具有 C6-C3-C6 骨架的化合物，包括黄酮、黄酮醇、黄烷酮、异黄酮和双黄酮等等 ， 以及它们的一系列衍生物，是植物界分布最为广泛的一大类次生代谢产物。经植物
15、光合作用所固定的碳有 2%转变为黄酮类及其相关的化合物。植物体 中的黄酮类物质是经乙酸丙二酸途径和莽草酸途径复合产生的，其颜色多数呈黄色或相近的颜色。黄酮类化合物几乎遍布植物体的各组织和器官，如叶、根、木质部、树皮、花粉、花、浆果和种子等 1。 黄酮类物质作为一类重要的次生代谢产物对高等植物来说具有多种功能，对植物生长、生殖、发育、开花、结果以及抵御异体生物侵害等起着非常重要的作用。 2从生理生态学角度来看， 黄酮类化合物对紫外线光和可见光均显示强烈的吸收，具有抗氧化性， 可以保护植物免受强光辐射的伤害 3。不断的研究发现，黄酮类物质具有很多方面的功能，例如信号转导 和化学通讯、抗紫外辐射和电
16、离辐射、化感作用 4、抗氧化作用、抵御逆境等。近年来该方面在医学界和植物学领域都得到了广泛的关注和深入的研究。目前的研究热点是黄酮类化合物在植物体内的静态分布规律、提取、分离和生产工艺等方面。我国学者对草珊瑚、甘草、柑橘 5.6、银杏、黄芩、大豆等经济或药用植物中的黄酮类物质做了大量的研究。作为植物体内一类重要的次生代谢产物，黄酮参与生长发育过程的调节 ， 是植物活性调节因素之一 ， 还能够吸引动物使其帮助植物传粉受精 ， 抵抗紫外线对植物的辐射伤害等。 从次生代谢生态学的角度出发，环境因 子对黄酮类化合物的类型和积累的影响，黄酮类化合物的生态学意义得到了许多学者的关注，如对杜仲、银杏的研究。
17、 7 大吴风草 Fatfujium japonicum Lindl.，又名 莲蓬草 ,属菊科大吴风草属植物。多年生草本。分布从中国东南部经琉球群岛和台湾一直到日本 8。大吴风草是重要的药用植物资源，其干燥的根状茎、叶片、叶柄均可入药，具有 清热，解毒，活血 的功能 。治风热感冒，咽喉肿痛，痈肿，疔疮，瘰疬，跌打损伤 等症 3。 其生境范围相当广泛。常生于低海拔的林下、山地、山谷、海滨草丛。由于其花色金黄而艳丽，也被 用于园林绿化，常用做路旁的花境做背景或点缀，十分美丽 9。其野生环境多毕业论文 - 为林下，郁闭度在 80%以上，能成片生长，而且长势较好，土壤基质多为土质疏松、排水良好、富含有机
18、质的土壤。大吴风草为多年生常绿草本，分布范围广 ,适应性强，生长快，用途广泛。近年来被广泛用作园林地被植物，滨海盐碱地区多以大面积种植方式作为林下地被。查阅文献后发现，大吴风草抗逆方面的研究报道很少，随着野生资源不断被挖掘利用，人们开始人工栽培大吴风草，由于其适应性较强，即使在向阳处，土质瘠薄甚至盐碱地均能生长，所以繁殖比较容易。但是作为重要的药 用植物资源，生长环境改变必然影响其有效的药用成分含量。本文以大吴风草为研究对象，从不同的水分条件、光照条件、盐度条件下，测定大吴风草不同器官的黄酮含量，以揭示不同逆境对大吴风草黄酮含量的影响，为合理利用这一资源提供基础资料。 毕业论文 - 1 材料与
19、方法 1.1 实验材料 1.1.1 植物材料 植物材料采自舟山市定海区长岗山森林公园。 1.1.2 试剂 芦丁标准样、 95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为国产分析纯、去离子水。 1.1.3 仪器 分析天平、 752 紫外分光光度计、超声波振荡仪等。 1.2 方法 1.2.1 预处理 从样地中挖取大小、年份相 似的大吴风草苗，移植于花盆中，土壤为原样地的土壤，花盆规格一致。在阴凉处缓苗 1 个星期，待苗生长良好后用于实验。 1.2.2 不同光照下大吴风草黄铜含量 光照梯度设置为全光照、一层遮阳网（ 4000lux）、二层遮阳网（ 1500lux） 三个梯度。培养 30d 后测定其根状茎
20、、叶柄、叶片中的黄酮含量。实验过程中保证土壤水分含量、盐浓度、温度等适宜并相同。连续测量多组取平均值。 1.2.3 不同水分胁迫条件下大吴风草黄铜含量 首先测定样地中的土壤水分含量，并以其为对照土栽植大吴风草作为对照组。水分胁迫设置 3 个梯度，即重度、中度、轻度胁迫，其 含水量分别为田间持水量的 80%、 60%、 30%。胁迫处理 30d 后测定其黄酮的含量。样地的土壤水分含量取不同位置的多个土样，计算平均值。实验过程中保证光照为自然条件，盐碱度、温度等适宜并相同。连续测量多组取平均值。 1.2.4 不同盐浓度胁迫条件下大吴风草总黄酮含量 配制 100mmol/L、 200 mmol/L、
21、 300 mmol/L 的 NaCl 溶液备用。以原样地土壤为对照，分别 3 个盐度梯度 100mmol/L、 200 mmol/L、 300 mmol/L 的盐溶毕业论文 - 液处理 3 个实验组，使大吴风草植株处于三种浓度的盐胁迫条件下，胁迫时间21d，测定其总黄酮含量。实验过程中保证光照自然，温度等其他条件适宜并相同。连续测量多组取平均值。 1.2.5 标准曲线的绘制 精确称取芦丁 10.0mg（ 105 烘干至恒重），用 75%的乙醇溶解并定容至100mL，得 0.1mg/mL 的芦丁标准储备液，备用。精密量取芦丁标准储备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL 置于 25mL 容
22、量瓶中，加水至 5mL，分别加入 NaNo2 溶液1mL，静置 6min，再分别加入 10 Al(No3)3 溶液 1mL，静置 5min，最后加入 5 NaOH 溶液 10mL，用水定容至 25mL，静 置 15min 以上；以相应试剂为空白，用紫外可见分光光度计在 500nm 处测定吸光度值。结果表明，芦丁的吸光度值与浓度呈良好的线性关系： A=0.7136c-0.0325。 A = 0.7136c - 0.0325R2= 0.996800.511.50 0.5 1 1.5 2 2.5芦丁的浓度 ( m g / m l )吸光度1.2.6 黄酮含量的测定 将大吴风草清洗干净，去除泥土、枯叶
23、、根须、根状茎表皮。将大吴风草的叶、叶柄、根状茎分离，根状茎进行切片以便干燥。将不同处理的大吴风草样品在恒温干燥箱中 80干燥 24h。样品采用固体粉碎机粉碎后过筛（ 100 目）称取 0. 5 g 置于 50mL 容量瓶中 ,加入 75 %乙醇 40mL ,超声波萃取 45min,定容至 50mL 混匀。静置 3-4 小时。取上清液备用。 吸取样品上清液 2.0ml，分别置 25ml 容量瓶中，加去离子水至 5ml， 加 5 NaNo2 溶液 1.0ml， 放置 6min， 加10 Al(No3)3溶液 1.0ml， 放置 5min， 加 5 NaOH 溶液 10ml， 加水定容至刻度，摇匀，放置 15min 以上，以相应试剂做空白，于 500nm 处测定吸光度。从标准曲线中得到提取液中黄酮的含量。 类黄酮的测定以卢丁为标样 ,采用亚硝酸钠 -硝酸铝比色法测定 ,5 次重复。类黄酮含量用单位提取物干重所含类黄酮重表示 (mg/L)。 黄酮的含量 =C*V*n(W* 103)-1100% C标准方程求得黄酮的量 , mg/ml； 毕业论文 - V吸取样品液体积 , ml； n稀释倍数； W组织重量 , g。
