1、毕业论文 - 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 大吴风草不同器官黄酮含量的季节变化研究 学 院： 学生姓名： 专 业： 生物科学 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 毕业论文 - 目录 摘要 .I Abstract . II 引言 . 1 1 材料与方法 . 3 1.1 材料 . 3 1.1.1 植物材料 . 3 1.1.2 试剂 . 3 1.1.3 仪器 . 3 1.2 方法 . 3 1.2.1 芦丁标准曲线的绘制 . 3 1.2.2 大吴风草黄酮类物质含量测定 . 3 2 实验结果及分析 . 5 2.1 芦丁标准曲线及方程 . 5 2.2 大吴风草器官黄酮类化合物含量 . 5 2.2
2、.1 大吴风草不同器官黄酮类化合物含量 . 5 2.2.2 大吴风草叶片黄酮类化合物含量的季节变化动态 . 6 2.2.3 大吴风草叶柄黄酮类化合物含量的季节变化动态 . 7 2.2.4 大吴风草根状茎黄酮类化合物含量的季节变化动态 . 8 3 讨论 . 9 结论 . 11 参考文献 . 12 致谢 . 15 毕业论文 - 摘要 摘要 ： 植物中的黄酮化合物具有重要的生态意义和经济价值。本文对不同季节大吴风草（ Farfugium japnicum Kitam.）不同器官中总黄酮含量及其动态变化进行了研究，采用 95%乙醇超声提取法测定舟山群岛长岗山地区大吴风草叶片、叶柄、根状茎等不同器官黄酮
3、类化合物含量，结果显示：不同器官中黄酮类化合物含量，叶片最高、叶柄次之、根状茎最低；而且不同器官中的黄酮含量具有明显的季节性差异。叶片中总黄酮含量随季节变化逐渐升高， 12 月达到最高峰；叶柄中黄酮含 量最低峰在 4 月，最高峰则出现在 10 月，其它月份含量变化不大；地下根状茎黄酮含量最低峰在 6 月，最高峰也在 10 月 。这主要源于环境因子的变化影响了黄酮类化合物的合成和积累，如紫外线辐射、高温等。地上部分（叶片和叶柄）黄酮含量高于地下部分（根状茎），受紫外线辐射更强的叶片黄酮含量明显高于叶柄，这一结果表明紫外线辐射有益于器官中黄酮类化合物累积。通过对大吴风草不同器官中 黄酮含量及其动态
4、变化进行研究，确定其最佳采收器官及采收季节，为优化大吴风草的种植、资源保护及其黄酮类化合物的提取提供理论依据。 关键词 ： 大 吴风草；总黄酮；动态变化 毕业论文 - Abstract Abstract： Flavonoids in the plant has important ecological significance and economic value. In this paper, flavonoids content and its dynamics in different organs of Farfugium japnicum Kitam in different sea
5、sons were studied. Using ultrasonic extraction in 95% ethanol to determine the flavonoids content of Farfugium japnicum Kitams leaves , petioles and rhizomes . The results showed that: the content of flavonoids in different organs,leaves petioles rhizomes, has significant seasonal differences. The f
6、lavonoids content in the leaves increased gradually with the seasons changing and reached a peak in December. The lowest peak of flavonoids content in the petiole in April and the highest peak in October, little change occurred in other mouthes.The lowest peak of flavonoids content in the rhizome in
7、 June and the highest peak in October too. Environmental factors affect the synthesis and accumulation of flavonoids, such as UV radiation and high temperature. Aerial parts (leaves and petioles) are higher than the underground parts (rhizomes). The leaf subjected to more UV radiation is much higher
8、 than the petiole, which suggests that UV radiation benefits the accumulation of flavonoids. By exploring the total flavonoids content and its Dynamics in different organs of Farfugium japnicum Kitam, determining the optimum harvest time may p rovide a basis for planting, resource protection and ext
9、raction of flavonoids of Farfugium japnicum Kitam. Key words： Farfugium japnicum Kitam ； flavonoids ； dynamics 毕业论文 - 引言 大吴风草（ Farfugium japnicum）别名八角鸟、活血莲、荷叶三七、橐吾等，属菊科（ Asteraceae）大吴风草属（ Farfugium）多年生葶状草本植物，叶基生，有长柄，基部鞘状抱茎，叶片肾形，长 9 15 厘米，宽 11 30 厘米，边缘有小齿。叶浓绿色，上密布黄色斑点。头状花序排成伞房状，舌状花黄色，花期 8 11 月 1。原产中国
10、东部一些省份及日本和朝鲜，喜半阴和湿润环境，常生于林下或林边阴湿地、溪沟边、石崖下，在江南地区能露地越冬，怕阳光直射，对土壤适应度较好，以肥沃疏松、排水好的壤土为宜 2。广泛分布于我国浙江、福建、广东和台湾等省份 3。据浙江民间常用草药记载：“性凉，味苦。”在民间长期作为中草药材食用，据 质问本草、浙江民间常用草药、福建民间草药等记载：清热、解毒、活血；治风热感冒、咽喉肿痛、痈肿、疔疮、瘰疬、跌打损伤等病症，是一种尚未规模开发利用的药膳同源新资源。 黄酮类物质是泛指具有 C6-C3-C6 骨架的一类化合物，包括黄酮、黄酮醇、异黄酮、查尔酮等几种，以芸香科、菊科、玄参科、伞形科、苦苣苔科及豆科植
11、物中存在较多 47，几乎遍布 植物体的各组织和器官，如叶、根、木质部、树皮、花粉、花、浆果和种子等。黄酮作为一类重要的次生代谢物质对高等植物来说具有多种功能，对植物生长、发育、开花、结果以及抗紫外线灼伤、抵抗病菌入侵、吸引昆虫授粉等起着重要的作用 8。植物体中黄酮类化合物多以游离态或苷的形式存在，主要经由葡萄糖分别经过莽草酸途径和乙酸 -丙二酸途径生成羟基桂皮酸和三个分子的乙酸，然后合成查尔酮，再衍变为各类黄酮类化合物。其合成过程受到苯丙氨酸解氨酶（ PLA）、查尔酮合成酶 (CHS)、查尔酮异构酶 (CHI)、黄烷酮醇还原酶 (DFR)、异黄 酮合成酶 (IFS)等系列酶的调控，而光照强度、
12、光质、温度、水分等环境因子均能影响这些酶的活性及其分子合成水平 9。 除遗传和生物因素外 , 影响植物中黄酮类成分合成的主要因素有光照、温度、浓度、矿质营养和土壤水分等 9。因此，植物器官中黄酮含量存在季节性差异和空间性差异，如刘常金等 10对不同产地香椿黄酮含量研究结果表明：北方香椿的黄酮含量明显高于南方；冷平生等 11对银杏叶的研究显示：遮荫处理显著降低银杏黄酮苷含量，具体表现为：阳生植物夏秋季节黄酮含量高于冬春季节，阴生植物含量最高峰一般在秋末冬初 同一器官向阳面黄酮含量高于阴面树冠顶层黄酮含量高毕业论文 - 于底层地上部分黄酮含量高于地下部分不同器官黄酮含量高低顺序一般为：花叶片茎根等
13、 12-14。近年来，有关环境对黄酮类成分的影响及分子机制方面的研究有了较大进展，已经明确紫外辐射、强光强、低温、高 CO2 浓度、适度干旱以及合理的施肥等因素均可以促进此类成分的合成。其中，光照和温度是两大关键影响因素，可以直接影响到合成途径中关键酶的活性，对植株中黄酮的含量有明显的调节作用。 黄酮类化合物的药用功效显著，主要在心血管、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、镇痛以及消化 系统等方面：改善血糖和血脂代谢 15保护心脑血管系统 16促进消化、提高吸收功能 17保护肝肾组织 18镇痛、消炎 19抗氧化和延缓衰老 20提高免疫力、抗肿瘤 21等。随着研究的深入黄酮类化合物在医药领域的应用取得了良好的
14、社会效益和经济效益，如银杏黄酮、杜仲黄酮在医药领域的广泛应用 22,23。由于大吴风草“高贵不贵”，适应能力很强，对土壤、温度、湿度等生长环境要求低，在江南地区一带多作为地被花卉，资源极其丰富。因此从大吴风草中提取黄酮是增加其经济附加值的重要途径，具有重要现 实意义。黄酮类物质在植物体不同器官的分布差异极其随季节的动态变化直接影响提取得率，目前国内外对大吴风草的研究主要集中在生理生态、分类鉴定等方面，然而对其器官中黄酮类物质含量随季节性变化动态的研究，迄今国内外尚未见报道。为此本实验采用乙醇超生提取法对大吴风草不同器官的黄酮含量及其动态变化进行研究，明确其不同器官中黄酮类化合物含量与季节变化的
15、关系，确定其最佳采收期，为大吴风草的种植、资源保护及其黄酮类化合物的提取提供理论依据。 毕业论文 - 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1植物材料 大吴风草分别于 2011年 4、 6、 8、 10、 12月初采集于舟山市定海区长岗山森林公园，经浙江海洋学院生物系植物学教授马玉心鉴定为 Farfugium japnicum Kitam。分别将大吴风草叶片、叶柄、根状茎低温烘干、粉碎，过 100目筛，放入干燥仪器备用。 1.1.2试剂 芦丁标准样、 95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为国产分析纯、去离子水 。 1.1.3仪器 紫外分光光度计、超声波振荡仪、电子分析天平、恒温干燥箱、粉
16、碎机、 100目筛、移液管（ 1ml、 2ml、 5ml）、 50ml容量瓶、烧杯等。 1.2 方法 1.2.1 芦丁标准曲线的 绘制 准确称取芦丁标准品 125mg, 用 95%乙醇溶解 , 最后用乙醇定容至 25ml, 装人棕色瓶中置 4 冰 箱 保 存 备 用 。 分 别 精 密 吸 取 芦 丁 标 准 液0.0,2.5 ,5.0 ,7.5 ,10.0 ,12.5ml 于 25ml 容量瓶 ,加水至 12.5ml，加 5%亚硝酸钠 1.0ml，摇匀放置 6min，加入 10%的硝酸铝 1.0ml, 摇匀放置 5min, 加入 5%氢氧化钠 10.0ml,混匀后用水定容至刻度 , 摇匀 ,
17、放置 15min 以上后以未加芦丁标准应用液的待测液为参比溶液，在 510nm 比色测定吸光度 , 以芦丁浓度为横坐标 , 以吸 光度作为纵坐标制成标准曲线。 1.2.2 大吴风草黄酮类物质含量测定 精确称定样品粉末 0.5g 左右，至于 50ml 容量瓶中，加 95%乙醇 40ml，在超声波发生器提取 45min，静置冷却，加 95%乙醇至刻度，摇匀，静止 3-4h 吸取样液2.0ml，分别置 25ml 容量瓶中，加水至 5ml，加 5%亚硝酸钠 1.0ml，摇匀放置6min，加入 10%的硝酸铝 1.0ml, 摇匀放置 5min, 加入 5%氢氧化钠 10.0ml,混匀后用毕业论文 - 水
18、定容至刻 度 , 摇匀 ,放置 15min 以上，以相应试剂做空白，于 510nm 处测定吸光度。从标准曲线中得到提取液 黄酮的含量。 毕业论文 - 2 实验结果 及分析 2.1 芦丁标准曲线及方程 在 510nm 比色测定吸光度 , 以芦丁浓度为横坐标 , 以吸光度作为纵坐标制成标准曲线。根据比色测定结果，用 Excel 软件处理得到以芦丁为标准样的黄酮测定标准曲线见图 2.1。 y = 0.7136x - 0.0325R2= 0.996800.20.40.60.811.21.41.60 0.5 1 1.5 2 2.5芦丁的浓度 (m g /m l)吸光度图 2.1 芦丁对照品标准曲线 Fi
19、g.2.1The standard curve of lutin 2.2 大吴风草器官黄酮类化合物含量 2.2.1 大吴风草不同器官黄酮类化合物含量 总体而言，大吴风草的不同器官中黄酮含量差异较大（图 2.2 所示），叶片中黄酮类物质含量最高，叶柄次之，根状茎最低，叶片黄酮含量为根状茎 23 倍，叶柄较根状茎略高但相差不大。这与李继泉 13报道的植物此生代谢物质酚类的含量与植物受到的光照强度（叶片最高，叶柄次之，地下根状茎最低）呈正相关相吻合，冷平生 12、王华田 11等也有类似的相关报道。大吴风草叶片较大，对叶柄起到了“保护伞”的作用，大大降低了叶柄所受紫外线和强光辐射；根状茎位于地下，所受
20、紫外线和强光辐射更弱。黄酮类化合物是 UV-B 和强光的有效“过滤器”，具有较强清除由于辐射导致植物体细胞产生的自由 基的能力，所以强光和紫外线辐射对植毕业论文 - 物体器官黄酮的积累有益 24。因此，黄酮类化合物含量高低顺序为：叶片叶柄根状茎，且地上部分高于地下部分。 图 2.2 大吴风草不同器官中黄酮类化合物含量 Fig.2.2 The content of flavonoids in different organs of Farfugium japnicum Kitam 2.2.2 大吴风草叶片黄酮类化合物含量的季节变化动态 图 2.3 大吴风草叶片黄酮类化合物含量的动态变化 Fig.
21、2.3 Dynamics of total flavonoid in Farfugium japnicum Kitam leaf 由图 2.3 可知，大吴风草叶片中黄酮类化合物含量随季节变化逐渐上升， 4 月0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 月份 Month 黄酮类化合物含量（%）Total flavonoid content0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 月份 Month TotalFlavonoids content 叶片 Leaf 叶柄 Petiole 根 状 茎 Rhizome 黄酮类化合物含量（%）
