1、 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 饲料中不同蛋白和脂肪水平对条石鲷(Oplegnathus fasciatus)幼鱼生长及体组成的影响 学 院： 学生姓名： 专 业： 水产养殖 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 目录 摘要 .1 Abstract .2 1.前言 .3 1.1 蛋白质 .3 1.1.1 蛋白质及氨基酸的生理功能 .3 1.1.2 影响鱼类对蛋白质需要量的因素 .3 1.2 脂肪 .3 1.2.1 脂肪的生理功能 .3 1.2.2 鱼类对脂肪的需求 .4 1.2.3 脂肪对蛋白质的节约作用 .4 1.3 蛋脂比 .4 1.4 条石鲷的生态地位及研究概况 .5 1.4.1
2、 生态地位及地理分布 .5 1.4.2 养殖前景 .5 1.4.3 研究概况 .6 2.材料与方法 .6 2.2 实验分组与管理 .7 2.3 样品采集 .7 2.4 样品分析 .8 2.5 数据处理 .9 3.实验结果与分析 .10 3.1 不同脂肪、蛋白饲料对条石鲷幼鱼生长及饲料利用的影响 .10 3.2 摄食不同脂肪、蛋白比饲料对条石鲷幼鱼体成分的影响： . 11 3.3 摄食不同脂肪、蛋白比饲料对条石鲷幼鱼的内脏器官的影响 : .12 4 讨论 .12 4.1:蛋白质对于条石鲷生长的影响 .12 4.2 脂肪含量对条石鲷幼鱼生长的影响 .13 5.结论 .13 致谢： .13 参 考文
3、献： .15 1 饲料中不同蛋白和脂肪水平对条石鲷 (Oplegnathus fasciatus)幼鱼生长及体组成的影响 摘要 本研究以条石鲷（ Oplegnathus fasciatus）为研究对象， 通过 57d 的饲养，确定条石鲷幼鱼 (Oplegnathus fasciatus)的蛋白质脂肪比例， 通过配制六组不同脂肪、蛋白水平的试验饲料，对条石鲷的生长和代谢进行了研究，以寻找适合条石鲷幼鱼生长的饲料。鱼粉 是鱼 类饲料最主要的蛋白来源之一，也是饲料中成本最高的组分之一，在饲料生产中减少蛋白质的使用量意味着生产成本的降低。因此，通过对条石鲷幼鱼 (初始重量 6.12g)做一个为期 57
4、天的饲料实验来尽可能的确定在常规饲料中减少可消化蛋白质能源水平具体增长率 (SGR)和饲料转化率 (FE)所带来的影响。实验饲料配方包含三个蛋白水平梯度有 50： 16%， 50： 12%，46： 20%， 46： 16%， 42:20%和 42:12%。不同组在最后体重和体重增加百分量（ %）方面没有相对应的显著性梯度变化。结果表明：饲料中脂肪水平的增加可以降低鱼类耗能时对蛋白质的需求量，条石鲷幼鱼生长所需要的最适蛋白含量为 42%，比现有研究报告低 4%。即饲料脂肪对蛋白质有节约效应。 关键词 条石鲷 脂肪 蛋白质 脂肪蛋白比 影响 2 Dietary protein and lipid
5、levels on growth and body composition of Oplegnathus fasciatus juvenile effect Abstract Six diets were formulated to study the growth and metabolism of juvenile Oplegnathus fasciatus, which is an important commercial species of Oplegnathus fasciatus, as influenced by different dietary lipid to prote
6、in ratio levels. In order to find suitable fasciatus juvenile growth feed. Fish meal, the principal protein source in most fish feeds, is one of the more expensive ingredients. Reduction of the amount of protein in diets would reduce the cost of feed. Therefore, a 57-day feeding trial was conducted
7、with Oplegnathus fasciatus(initial weight 6.12g) in order to determine the effect of reducing digestible protein-to-energy levels in diets on specific growth rates (SGR) and feed efficiency (FE). Experimental diets were formulated to contain dietary protein-to-lipid levels of 50:16%, 50:12%, 46:20%,
8、 46:16%, 42:20% and 42:16%. The results showed: There werent significant differences in final weights and percent weight gain among all three dietary treatments. Juvenile Oplegnathus fasciatus of growth needed for optimal protein content of 42%, lower than the existing research report 4%. The feed f
9、at on protein sparing effect. Keywords fasciatus(Oplegnathus fasciatus ) juvenile lipid level protein level lipid to protein ratio effect 3 1.前言 1.1 蛋白质 1.1.1 蛋白质及氨基酸的生理功能 蛋白质是生物最重要的物质基础，由 20 多种氨基酸通过肽键连接而成，它是生命的表现，其生理功能主要表现在：（ 1）提供氨基酸，供组织的更新、修复及维持体蛋白质现状，这可以看作是蛋白质的积累； (2)是合成酶和激素的主要原料，酶的化学本质就 是蛋白质，而激素
10、也是蛋白质的衍生物，也就是说蛋白质对生物的内在调节具有十分重大的意义。当然也 是 DNA 合成提供氮源；（ 3）蛋白质还是重要的能量物质，在非蛋白质能量摄入不够的情况下，鱼类可大量分解氨基酸来满足生命活动需要。 Barber 和 Halver 认为在食物供应不足或糖类含量下降时蛋白质也起功能作用，在生物繁殖期，蛋白则会更多的被用于提供能量，这可能是由于在这期间糖类和脂肪更多的用于卵黄的积累 1；（ 4）免疫作用， 众所周知，机体免疫主要由抗体、吞噬细胞等组成，而抗体和白细胞是在蛋白质基础上形成的；蛋白质的摄入量的大小将严重影响吞噬细胞的作用，因为吞噬细胞主要来自淋巴、肝、脾等组织，而蛋白质的缺
11、乏会严 重引起这些组织的退化；（ 5）蛋白质还用于生理运输方面，如血红蛋白辅助氧气的运输，脂蛋白的脂类运输，运铁蛋白可运铁等，都是正常生理活动的重要组成部分。 在外界摄取蛋白质，在消化道中只有经消化分解成氨基酸后才能被机体利用。因此，人与动物对蛋白质的需求，本质上就是对氨基酸的需要。 鱼类大体上存在 10 种必需氨基酸，即：异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、组氨酸。在养殖过程中，若缺少某种氨基酸，或者饲料中氨基酸含量比例不符合鱼类生长需求，就会造成其它氨基酸不能被完全利用，引起营 养失调。据 Millikin(1982)报道，当赖氨酸缺乏时会造成胶原形
12、成率的降低；蛋氨酸缺乏会造成虹鳟 (salmo gairdneri)幼鱼白内障， 缺乏色氨酸会导致脊椎前凸或侧凸 2； 另外， 亮氨酸为合成组织蛋白和血浆蛋白所必需，能维持幼年动物的生长与成年动物的氮平衡，缺乏时体重减轻，呈负氮平衡状态 摄入合理的氨基酸能促进对机体对钙的吸收，也可作为促食的介质，保证饲料质量的稳定；还能增加鱼类对应激源刺激的抵抗能力；此外，氨基酸还能提高鱼类抗病能力。但是若饲料中氨基酸分配不合理或者含量过高，就会引起饲料利 用率的下降 3-5，导致鱼类生长失常； 1.1.2 影响鱼类对蛋白质需要量的因素 首先，不同鱼的种类及不同的发育阶段对饲料蛋白的需求量不同。如杂食性鱼为3
13、2.45，而肉食性鱼则高达 40.55；其次，同种鱼类之间，其蛋白质需求量也随养殖环境的温度变化而产生一定的影响，如大鳞大马哈鱼 (Oncorhynchus tshawytscha)在 8.3时需要40的蛋白质，而在 14.4时蛋白最适宜量相应增至 55 (王胜林， 2000)6。 1.2 脂肪 1.2.1 脂肪的生理功能 脂肪是鱼类生长必须的一类营养物 质，对鱼类繁殖有着相当重要的作用。脂类的主要功能：（ 1）作为个体组织成分，鱼类组织细胞中均含有约 1 2的脂肪物质， (2)作为能量来源，脂类是含能量最高的营养素。等重条件下产生的热量远高于碳水化合物及蛋白质的产4 热量，在体内每克脂肪氧化
14、还原可产生约 3.72 105 kJ 的能量，甚至在某些肉食性鱼类，如虹鳟、黄尾鲴 (Xenocypris davidi)，它们利用脂肪的能力较碳水化合物和蛋白更为明显 7-9； (3)作为脂溶性维生素溶解的介质； (4)维持细胞膜的结构和完整性； (5)作为某些激素和维生素的合成 原料； (6 动物体内主要的能量贮备形式，动物摄入的能量超过需要量时，多余的能量主要以脂肪的形式贮存在体内 10。 1.2.2 鱼类对脂肪的需求 关于鱼类对脂类的营养研究，比较重视的是对鱼体脂肪酸组成的分析以及对必需脂肪酸需要的研究，也有较多鱼类饲料中脂肪适宜含量的研究。 鱼类对饲料脂肪的需要量一般在 4 18之间
15、。一般而言，草食性鱼类比肉食性鱼对饲料脂肪的要求需求量小。当然， 鱼类对脂肪的需要量还受鱼的种类、食性、生长阶段、饲料中糖类和蛋白质含量及环境温度的影响。以增重率作为指标，青鱼当年鱼种对脂肪的需要量为 6 5左右，低于 3或高于 8对青鱼生长都不利 11。黄颡鱼饲料脂肪的最适含量为 11 31，当脂肪含量低于 11 31时鱼体增重、饲料系数与饲料脂肪含量成正相关，而高于 11 31是负相关 12。以混合油 (豆油：鱼油为 2： 1)为原料配制的饲料饲喂鳜鱼，得到其饲料适宜脂肪饲料脂肪水平为 7 12 13。以新鲜豆油为脂肪源，团头鲂鱼种饲料中脂肪适宜含量为 2 5，最适含量为3 6左右 14。
16、饲料脂肪水平对长吻觥鱼种的生长和饲料利用率有显著的影响饲料脂肪水平在 15 18时生长率高，饲料系数 低 15。 1.2.3 脂肪对蛋白质的节约作用 作为能量物质，脂肪、糖类和蛋白质协同的为生命活动提供能量。因此，蛋白质的需求量受到饲料中脂肪及糖类含量的影响 (Lewis， 2001)16；如饲料中蛋白的含量低于鱼体生长的最低需求，而单纯的提高能量物质的含量，就会导致生物体出现负氮平衡，能量的利用率更会相对下降 (Nieto et al， 1997)17。故在研究饲料配方的时候，需在饲料中添加适量的脂肪物质或者碳水化合物，以减少饲料中作为能量物质而被分解的蛋白质部分，从而提高蛋白质利用率，减少
17、能量损耗，起 到节约饲料蛋白的作用 （ Cho Kaushik , 1990, Ellis et al, 1991）。 相反，若是过量的添加脂肪或者糖类物质，也会给鱼类带来一定的损害。例如，当饲料中脂肪类或碳水化合物含量过高时，鱼类的生长会受到阻碍，鱼体脂肪，内脏比重增加等（ Hillestd Johnsen, 1994; Shearer, 1994; Chou Shiau, 1996)18。因此，确定脂肪和蛋白质含量比例（蛋脂比）就成为饲料研究中首先需要解决的问题之一。 1.3 蛋脂比 蛋脂比在一定程度上与能蛋比具有等同的 效果。其比值（蛋白质 /脂肪） 越小则说明蛋白营养水平越高，反之则表
18、达其水平越低。 现今，蛋脂比已不仅仅是描述日粮中蛋白质的水平，更重要的是成为了反映研究饲料中各类营养平衡的关键参数之一。 目前，国内外在此方面的研究多以寻找确定鱼类生长所需的最适蛋脂比为主，即保持饲料总能量不变，配制不同蛋白水平梯度的实验饲料，再通过养殖试验，以鱼的特定增长率、饵料系数、饲料利用率、内脏比指数和鱼体及某些器官的生化成分分析结果等作为参考指标，5 来确定饲料中最适的蛋脂比例 19-20。林黑着 (1998)等 21则是在确定的蛋白质水 平下设置能量梯度，并以此来确定饲料中适宜的蛋脂比。在鱼类中有很多关于蛋能比的研究报道。例如：黄鳝（ Monopterus albus）最适生长所需
19、要的饵料总能量在 11.50 kJ g 12.50 kJ g，适宜能蛋比为 3 1.6 kJ g 38.90 kJ g22。 Schwanz FG 等 23(1983)研究鲤（ Cyprinus carpio Linnaeus）饵料时，认为最适能蛋比为 43.48 kJ g 47.62 kJ g； Lovell R.T 等 24(1973)报道斑点叉尾鮰（ Letalurus Punetaus）最适能量蛋白比为 27.61 kJ g 30.96 kJ g； Cho C Y25(1985)报道虹鳟饵料中最适能量蛋白比为 41.67 kJ g 52.63 kJ g；国内在这方面的研究起步较晚，毛永
20、庆等 (1983)初步研究报道，草鱼幼鱼阶段的饵料最适能蛋比为 31.82 kJ g57.74 kJ g；邹志清等 26(1987)报道团头鲂（ Megalobrama amblycephale Yin）最适能量蛋白比为 35.96 kJ g，团头鲂夏花饵料适宜能量水平为 12.55 kJ g，适宜能量蛋白比为 35.97 kJ g27；鲤饵料的适宜能量水平为 14.55 kJ g，适宜能量蛋白比 41.58 kJ g28；王道尊等29(1987)报道，青鱼（ Mylopharyngodon piceus）最适能量蛋白比为 38.07 kJ g；鲻鱼（ Mugil cephalus）饵料适宜能
21、量蛋白比为 46.08 kJ g21；彭泽鲫（ Carassius auratus var pengze）饵料适宜能量水平为 12.1 kJ g，适宜能量蛋白比 40.33 kJ g，饵料中能量过剩引起鱼生长率下降 30。总之，不同鱼类，不同生长阶段，不同水温等情况下，其最适能量蛋白比是不同的。寻找到合适的脂肪、蛋白比，不仅能够节约饲料蛋白，而且还有利于鱼类生长，饲料的利用等。 1.4 条石鲷的生态地位及研究概况 1.4.1 生态地位及地理分布 条石鲷 (Oplegnathus fasciatus)，隶属硬骨鱼纲 (osteiethys)，鲈形目 （ Perciformes）、鲈总科（ Per
22、coidea） 、石鲷科（ Oplegnathidae） 、石鲷属（ Oplegnathus） (张春霖等 1955；朱元鼎1985；孟庆闻等 1995)31-33，中文俗称石鲷，石加拉，日本鹦鹉鱼，英文名称有 rock bream，japanese parrotfish， striped knifejaw。条石鲷的生存温度范围为 6 32，适宜生长水温为 1828，水温降低至 6时，游动失控，甚至死亡，在水温低于 8时停止摄食，但活动正常 ;适宜生长盐度为 10 30 。喜食底栖动物、沙蚕及细碎鱼虾肉等。条石鲷外形美观，有五条灰黑色条纹 (一条或两条在尾部 )纵向贯穿于身体，体态优美，深受垂
23、钓者的青睐，被称为“矶钓之王”和“梦幻之鱼”。根据 Jacobshagen 和 Bertin34的研究，条石鲷成年个体的肠道系数在 0. 78 左右，属于杂食性鱼类。主要分布在包括我国在内的太平洋沿岸，以及美国夏威夷西北部的太平洋沿岸。条石鲷主要栖息于温带、亚热带水域，为岩礁定居性鱼类，很难捕捉。 1.4.2 养殖前景 条石鲷肉质鲜美，口感好，市场价值高，并且在驯养条件下具有较高的繁殖力，我国从2003 年开始有关条石鲷的驯养实验，在人工饲养条件下其月增长率平均达 14.6%35。养殖效果表明条石鲷很适合在我国南北方沿海区域养殖，甚至网箱、池塘、路基工厂化养殖的诸多模式中均取 得了不菲的成绩。
24、已成为中国、日本和韩国重要的海水鱼类养殖品种，当然也满足了人们对水产品多样性的要求，养殖前景开阔。 6 1.4.3 研究概况 日本自 20 世纪 60 年代末开始条石鲷关于人工繁育方面的研究 36，此后，对条石鲷的研究多开展在苗种和疾病方面。目前我国对条石鲷的研究也集中在苗种繁育上，我国自 2004年起，不仅攻破了一系列关于条石鲷育种方面的技术难关，而且还在条石鲷人工繁育方面获得巨大成功， 其体现出的经济价值俨然成为沿海地区广大养殖户亲睐的养殖品种之一。然而在规模化、高密度养殖过程中，外加天然饵料的日渐 减少，要满足其健康、迅速地生长，研制营养全面、搭配合理的人工配合饲料已成为急需解决的问题。
25、 但是关于条石鲷幼鱼在营养学及人工配合颗粒饲料方面的研究报道还非常少。 为此，探究确定条石鲷幼鱼对于饲料营养最适需求量及研发其专门的配合饲料已十分必要。在配合饲料研发过程中，若蛋白质含量过低必会引起鱼类生长减慢，体重减轻、体质变弱等不良现象，而蛋白质含量过高则会加重鱼体代谢负担，机体生长减慢；代谢中过剩的氨基酸还会对鱼体产生毒性，排泄物含氮量高，引发水体富营养化，不利于长期养殖，当然也是对饲料的一种浪费。而在研发其专门配 合饲料的时候，首先就要确定饲料中脂肪、蛋白的最适需求量及两者之间的比例。这不仅影响到其饲料是否能够提高鱼类成活率和饲料转化率问题，还关系到是否可以减少有机物质的排放，降低养殖
26、条石鲷对水体的污染问题。另外，在不影响条石鲷生长的前提下，尽可能的降低饲料蛋白的含量，也是对蛋白质一种节约的表现。 对于条石鲷即将面临规模化健康养殖的前景而言，如何解决当前条石鲷养殖面临的困境，研究它对人工配合颗粒饲料的蛋白质需求、脂肪需求、能量需求、脂肪蛋白比和能量蛋白比的需求具有重要意义 37-38。 本试验从饲料蛋脂比出发，研究 了不同蛋脂比饲料对条石鲷幼鱼生长、生理机能和鱼体成分组成的影响，旨在为研制适合条石鲷幼鱼生长所需要的配合饲料提供基础数据。 2.材料与方法 2.1 实验饲料 实验设计 6 组，原料配方见（表 1）， 通过对碳水化合物（玉米淀粉）水平进行调整，使每组饲料的能量保持
27、基本不变（ 211 kJ/g）， 6 组饲料的蛋白质和脂肪含量分别为 42%、 46%、50%和 12%、 16%、 20%，每组蛋脂比为： 42:16, 46:16, 50:16； 42:20, 46:20, 50:12。 配制饲料时，所有原料经粉碎后，全部过 60 目筛网，用双 螺杆制粒机（华南理工大学，中国广东省广州市）制成粒径为 2.0 mm 的硬颗粒饲料，烘干后在 -20冰柜内保存备用。 7 （表 1）试验饲料原料组成及营养成分 (%) (Tab 1) Formulation and composition of experimental diet (%) 饲料号 1 2 3 4 5
28、 6 鱼粉 55.72 56.06 61.25 61.25 66.42 66.82 大豆磷脂 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 鱼油 7.65 10.63 7.25 10.25 3.87 6.84 豆油 3.92 4.92 3.92 4.92 2.92 3.92 玉米淀粉 24.41 20.09 19.29 15.29 18.50 14.13 VC 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 胆碱 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 维生素预混料 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 矿物预混料 3.00
29、3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 褐藻酸钠 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 营养组成 DW 水分（ %） 6.84 6.28 6.51 5.97 6.73 6.17 蛋白质（ %） 41.65 41.75 45.20 45.74 48.78 49.68 脂肪（ %） 17.14 22.05 16.86 20.55 12.54 15.67 能量 21.08 21.80 21.01 21.73 20.21 20.93 灰分（ %） 10.62 10.67 11.38 11.38 12.09 12.14 2.2 实验分组与管理 本实验的 主要养殖场所在浙江
30、海洋学院水产学院循环养殖车间内，该实验室内的养殖设备主要包括：大小养殖桶、蓄水槽、过滤消毒等完善的水处理装置。养殖海水来源于沙滤、沉淀后的自然海水；关于营养分析实验的主要实验场所在浙江海洋学院水产学院饲料与营养实验室内海水。 实验所用条石鲷幼鱼来自于舟山市水产研究所提供，为当年（ 2011.07）人工繁育同一批鱼苗，鱼苗大小规格相同，健康无伤病。实验开始前进行为期 1 周的暂养实验，实验时，在健康及活力程度保持基本一致的前提下，采用随机分组的方法，每缸 15 尾，每组设计三个平行组（共 18 缸），尽量 使条石鲷幼鱼在分组时保持规格相同。总重量在 91.63 0.42g 左右。 在为期 57
31、天的实验饲养期间，每天定时测水温两次（ 8:30； 17： 30），保持水温 29-34之间。每周测盐度， PH 值以及溶氧量等相关水环境指标两次，保持盐度在 25-30， PH 在7.8-9.0 之间，溶氧量在 6.5mg/L 以上，亚硝酸盐低于 0.5mg/L。本实验以荧光灯为光源，在 6：00 18:00 保持实验场所有充足光亮，其余时间关灯，保持黑暗。每天定时投喂两次（ 8:00；16:00），每次保证每缸鱼刚好饱食。每隔两个小时巡查车间一次，如 果发现有死亡鱼体，及时捞出并称量鱼重，并且记录好当时剩余饲料量。 2.3 样品采集 实验开始时对试验鱼随机抽样做全鱼常规成分分析，并记录饲养
32、试验开始及结束时条石8 鲷幼鱼的体重、体长、体高以及鱼的尾数，记录在饲养期间试验鱼的饲料使用量，依据鱼的增重及其摄食的饲料量计算饵料系数。养殖过程中统计每组鱼的死亡率等，养殖过程中及时调整饵料的投食量。试验结束时，记录下每组鱼的体长，体重，肝重，内脏总重，每组随机取五条鱼做常规体成分分析。 2.4 样品分析 实验鱼组的五条全鱼样品、肌肉样品和肝脏样品做水分、粗蛋白和脂肪含量 以及灰分的分析。 分别采用 105常压干燥法，凯氏定氮法，索氏体抽提法， 550灼烧法来测定。采用spss17.0 进行方差分析，显著水平采用 P 0.05。具体公式如下： 2.4.1 水分测定 依照 AOAC（ 1984
33、）分析方法，称取饲料或样品，置于已达恒重且已称重的称量瓶中，放在 110 烘箱中干燥至恒重为止。取出称量瓶置于干燥器皿，待其冷却至室温后，称重并记录。 计算公式：水分（ %） = 100WW WW 01 21 W0：称量瓶重量（ g） W1：称量瓶重量 +样品重量（ g） W2：干燥至恒重的重量（ g） 2.4.2 粗蛋白的测定 依照 Micro Kjeldahl（ AOAC） 方法进行，称取样品约 0.2g，然后加入 3g 硫酸钾、 0.5g硫酸铜及 10ml 的浓硫酸于消化管中，将消化管置于已经预热的消化仪器 （ BUCHI Distillation Unit K 355） 中，盖上抽气头
34、，打开水流并加热（约 420 ）消化液至澄清碧绿后，停止加热并取出消化管冷却至室温，然后将每支试管依次装入蒸馏仪器 （ Digest Automat K 438）中，按照预先设定好的程序先加入适量蒸馏 水进行稀释，然后加入适量 40%NaOH，最后以含有溴甲酚绿和甲基红指示剂的 4% 硼酸 50ml 收集 5min，用标定过的 Hcl 滴定至溶液呈微红时达滴定终点。 计算公式： 蛋白质含量（ %） = 10S N25.6007.14a-b ）（ a： 空白组的滴定毫升数 b： 样品的滴定毫升数 S：样品的重量（ g） N： Hcl 的摩尔浓度 2.4.3 粗脂肪测定 采用索氏抽提法进行。称取 0.5g 左右的样品，放入滤纸筒，然后将滤纸筒放到干燥的浸提管内，浸提管置于抽提瓶中，加入约瓶体 1/2 的石油醚，并置于已预热的 BUCHI 脂肪测定
