1、 本科毕业论文 （ 20 届） 大草履虫实验室大量培养的研究 所在学院 专业班级 水产养殖学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 目录 中文摘要 1 英文摘要 2 1.前言 3 1.1 大草履虫生物学特征 3 1.2 影响大草履虫生长、繁殖因素 3 1.3 实验目的与意义 4 2.材料与方法 5 2.1 实验设计 5 2.2 实验材料 6 2.3 实验方法 6 3.结果与分析 9 3.1 A 组实验结果与分析 10 3.2 B 组实验结果与分析 11 3.3 C 组实验结果与分析 13 4.结论 15 致谢 16 参考文献 17 1 摘要 大草履虫 （ Paramecium ca
2、udatum Ehrenberg） 是水产养殖的饵料生物之一。本论文主要探讨在实验室的条件下、在一定空间下，如何去提高大草履虫的产量，进行实验室大量培养， 其关键点是提供充足高效的饵料，以及保持水质稳定 。选取 1.0%稻草杆培养液、 1%玉米培养液、小球藻培养液 (每天加入 20ml 浓度为 106个 /ml 的小球藻液 )、光合细菌培养液（加入5ml 光合细菌菌种） 、 1.5%光合细菌冻干粉培养液、 1.5%芽孢杆菌培养液 、 1%玉米 +光合细菌培养液（加入 5ml 光合细菌菌种） 、 1%玉米 +1.5%芽孢杆菌培养液 8 组培养液进行对实验，观察在各培养液大草履虫种群生长曲线和个体
3、形态的数据，结果表明 : 1%玉米 +光合细菌 （加入 5ml光合细菌菌种） 、 1%玉米 +1.5%芽孢杆菌培养液 是理想的培养大草履培养液。根据记录的数据来看，发现当 PH 小于 6.8、氨氮大于 0.6mg/l 时，对大草履虫的生长、繁殖产生影响。在探讨 保持水质稳定对大草履虫的试验中，最终的结果表明：在培养过程监 测培养液的水质变化，当培养液的水质发现异常时，即 培养液的水质 PH 小于 6.8 或者氨氮大于 0.6 mg/l 通过选用光合细菌来调整培养液水质的 PH 和氨氮，最终实验结果表明，可 使得在培养液的水质 PH 值升高（小于 7 时）和氨氮降低，使得原培养液中的大草履虫的种
4、群数量达到最大值，在 1%玉米培养液中达到 656 个 /ml。 关键词 大草履虫 实验室 培养液 生长率 个体形态 水质 2 The culture of mass Paramecium caudatum Ehrenberg in the laboratory Abstract Paramecium caudatum Ehrenberg is one of food organisms in aquaculture.In this thesis, the conditions in the laboratory, in a certain space, how to increase the
5、 yield of Paramecium caudatum Ehrenberg the laboratory mass culture, the key point is to provide adequate food and efficient, and maintain water quality and stability. To Selection 1.0% straw pole selection medium,1% corn medium, Chlorella medium (20ml per day by adding a concentration of 106 / ml o
6、f Chlorellaliquid),photosynthetic bacteria culture medium (by adding 5ml of photosynthetic bacteria strains),1.5% lyophilized photosynthetic bacteria culture solution,1.5% in culture medium of Bacillus,1% corn and photosynthetic bacteria,1% corn and Bacillus culture medium, altogether 8 groups of ex
7、perimental culture medium. Observed in the culture medium of P. caudatum population growth curve and morphology data, The results showed:1% corn and photosynthetic bacteria,1% corn and Bacillus culture medium is the ideal material of Paramecium caudatum Ehrenberg. According to record data, found tha
8、t when the PH is less than6.8, ammonia nitrogen is greater than 0.6mg / l when the Paramecium caudatum Ehrenberg growth of large, reproductive effects. Maintain the stability of the water quality in the Paramecium caudatum Ehrenberg trial, final results show that: in the training process monitoring
9、of water quality changes in the culture medium, when the abnormal water quality medium, that the water quality in medium PH less than 6.8 or greater than ammonia 0.6 mg / l through the use of photosynthetic bacteria to adjust the mediums PH and ammonia water, the final experimental results show that
10、 can make the water quality in the culture medium increased PH value (less than 7) and ammonia decreased, making the original culture medium Paramecium caudatum Ehrenberg population reached the maximum medium at 1% corn reached 656 / ml. Keywords Paramecium caudatum Ehrenberg Laboratory Culture medi
11、um Growth rates Individual form Water Quality 3 1前言 1.1 大草履虫生物学特征 外形特征： 大草履虫 （ Paramecium caudatum Ehrenberg） 的形 状 很像草鞋，所以被叫做草履虫。它的全身长满了纵行排列的纤毛，从身体的前端开始，有一道沟斜着伸向身体的中部，在沟的后端有口，所以被称为口沟。口沟里有一个胞口，下面连着胞咽。当它游泳的时候，全身的纤毛都会有节奏地摆动。由于口沟的存在和该处的纤毛较长，摆动有力，所以草履虫的身体就会旋转着前进 1。生理机能 :运动形式和机能 , 大草履虫主要通过纤毛作为其运动 胞器，纤毛一般为
12、协调运动，但是这种协调并不是整齐划一的。纤毛分布全身的种类，运动时成有规律的波浪状起伏，运动速度也快，每秒可达 200-1000微米。纤毛为一个亚显微结构，主要依靠其轴纤丝中微管的运动而运动 3。营养：大草履虫必须从外界获得一定的营养物质，用以建立新的体内物质或转化为生命过程所需要的能量。大草履虫的营养方式为全动营养。主要镊取细菌、藻类和其他原生动物、微小的后生动物或腐败的有机碎片。这种直接镊取固体有机物为食为它主要的营养方式。大草履虫主要通过胞口进行取吃，以吞咽式进行镊取食物。全动营养的种 类获得的猎物送进食物泡后只需几秒钟就把它杀死，在食物泡中可停留一个小时之久，这时周围的溶酶体分泌各种消
13、化酶与食物泡融合把食物消化 3。呼吸：大草履虫主要进行有氧呼吸，主要通过体表吸入氧气，排出二氧化碳。它能在氧气浓度很低的条件下生存，但在氧气充足的环境下生长得更加良好 1。生殖方式：大草履虫繁殖速度较快，能很快形成一个种群。它既可以有性繁殖又可以无性繁殖，有性繁殖为接合繁殖，无性繁殖为横二繁殖。在环境恶劣、食物缺乏的情况下，或者在无性繁殖 20-30 代后进行一次有性生殖，这有利于恢复和加强它的生活力 。生长 适宜温度为 22 -28， 水层中有颗颗游动的小白点，即表现其存在。大量繁殖时，在水层中呈灰白色云雾状漂动或回荡，故又称 “ 洄水 ” 4。 大 草履虫与人类的关系： 大草履虫因为其个体
14、较大，结构典型、繁殖快、观察方便、容易采集培养，因此一般用它作为研究细胞遗传的好材料，多年来遗传学者们用它研究了细胞质、细胞质和细胞核在遗传中的相互作用，以及细胞类型的转型等，取等了不少成果 2。随着对大草履虫的研究不断深入和发展，发现大草履虫在很多方面的价值同时也是一些养殖的动物的优质的开口饵料 。 还有 草履虫习性喜光，以细菌和单细胞 藻类为食 ， 据估计一个草履虫每天大约能吞食 43000 个 细菌 ，因此，它对污水 液 有一定的净化作用 3。 1.2 影响大草履虫生长、繁殖因素 生存环境的生态因子和饵料是影响大草履虫生长、繁殖的最主要因素。其中水是大草履虫最主要的生态限制因子，然而影响
15、其生态分布的因素通常并不是单一的，而是多因素结合的结果，与水体中的温度、溶解氧、氨氮等有关。大草履虫可以生长的温度范围 0 -35之间，但是最适合温度范围比较狭 小，为 20 -30之间。 在不同的温度下草履虫生长速率不一样，达到顶峰期的时间不一样，生长持续的时间也不同。在 20的条件下培养第 6 天出现高峰期，在 25的条件下培养第 5 天出现高峰期，在 30的条件下培养第 3 天出现高峰期 11。PH是影响大草履虫种群数量主要的因素，其中 pH值为 6.8-7.0的培养液最适宜草履虫生长 10,草履虫能在 pH 值为 6.0-8.1 之间的弱酸性到弱碱性环境中生长繁殖 9 。大草履虫为好氧
16、型原生动物，溶解氧充足的水环境大草履虫的数量要高于含氧低的水环境，虽然可以在低氧的环境下生存， 但它有游向溶氧较多的区域的趋势。氧气丰富的水域中 ， 大草履虫数量是十分丰4 富 3。有机质（即饵料）含量的多寡，氨氮的量对大草履虫有很大的影响，有机质多地方各种饵料丰富，其种群数量也比较多。 1.3 实验目的与意义 近年来随着工业、农业的高速的发展，对于城市、农村周边环境破坏越来越严重 ,特别是水质的污染 ,对于在野外采集大草履虫日趋困难。有学者的研究表明农药、洁洁灵、重金属离子对草履虫生长、繁殖有毒性作用 12-14。 当前，稻草培养液虽是培养草履虫普遍使用的一种材料，由于在水稻种植过程中过于使
17、用农药和化肥，导致 稻草受农药污染日趋严重。用常见的稻草作为培养液培养大草履虫的培养方法，往往不能快速繁殖大草履虫，进而得不到理想的种群数量，同时 由于稻草中残留农药 和其他化学成分 较多 ,所以 大草履虫的成活率不 高 ，个体形态较小 8。 而野外采集到的水样带回实验室直接培养 ,不易得到纯的草履虫 ,往往很难达到实验室的要求，并且往往里面夹带有许多其他浮游微生物 ,不能满足实验需求和作为一些养殖动物开口饵料大量需求 9。如果能把草履虫从原液中分离使其纯化 ,然后选择理想的培养液进行培养 ,提供良好的培养水质环境，将其扩大再培养，从而得到大量纯 化了的草履虫 ,能大大地方满足实验的需求。 饵
18、料动物的大量培养，其关键两点是培养用水的处理、及其饵料的解决。要在实验室内大量培养大草履虫，由于实验室里的培养容器大小所限，就要求接种后大草履虫种群应快速增长，并适时采收，给大草履虫种群的增长营造一种“无限”的环境（空间、食物等资源是无限的），这就要求对培养过程中的水质指标如 DO、有机物耗氧量等进行监测，并保证其饵料持续不断地供应和培养水质处于一个良好的环境。 所以 需要研究不同培养液和培养水质环境对大履虫生长、繁殖状况的影响，筛选出优质的大草履虫的饵料和在培养过程监测培养液的水质变化，当培养液的水质发现异常时，及时作出调整。为实验室大量培大养草履虫提供相应依据，也动物实验教学和科研提供实验
19、材料和相关参考 在大草履虫培养液上，从培养液的筛选到培养液的浓度，有不少学者在这方面做了不少的研究，同时得出很多结论 9。 熟鸡蛋黄是一种的培养大草履虫的材料 ,其中 1%熟鸡蛋黄培养液的培养效果最好 5。 1%玉米粒培养液培养的大草履虫种群最大密度大 ,个体形态较好 ,而且种群衰退较慢 ,是比较理想的培养大草履虫的材料 6 。随着研究的深入，为了在培养液上有所突破，有关学者开始研究混合培 养基对草履虫生长、繁殖的影响。用腐败馒头 (或腐败面包 )+稻草液作为培养草履虫培养液 ,培养草履虫时间短 ,数量增长率高 ,个体形态饱满，种群也衰退较慢 7。稻草、小麦与牛奶混合培养液有利于大草履虫繁殖
20、,但不利于大草履虫的个体的生长 ,故该方法对于扩大种群数量很有利 7。光合细菌是一种能光合作用的一群原核生物，也是一种营养成分很丰富菌类之一，蛋白质含量 高达 65%,还有含有各种维生素。 光合细菌有优化水质，改善养殖环境，是一种很好养殖水环境的净化剂，它可以分解利用水中的氨态氮、亚硝酸盐、硫化氢等有还害物质，能分解水产 动物的饵料及粪便，有利于藻类和浮游动物数量增加，还可以提高水中含氧量，降低 PH 值。同时一种很好的动物性生物饵料的饵料，因为光合细菌营养丰富，且个体较小，还有研究表明用光合细菌的养殖水体中的枝角类数量，是使用酵母和小球藻的 2-4 倍。所以在培养大草履虫的培养液中加入光合细
21、菌或者直接用光合细菌培养效果是值得研究的。 芽孢 杆菌 一种与光合细菌类似的细菌。 芽孢 杆菌 特性 是 繁殖快速 、 代谢快，四小时增殖 10 万倍，标准菌四小时仅可繁殖 6 倍 ； 生命力强：无湿状态可耐低温 -60 、耐高温 +280 ，耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌氧繁殖） ；体积大：体积比一般病源菌分子大四倍数，占据空间优势，抑制有害菌的生长繁殖 ；同5 时可以 净化水质、 产生多种消化酶 和 产生多种营养物质 的细菌， 芽孢 杆菌 对 培养大草履虫是否作用呢，不过已经有研究表明芽孢杆菌对培养轮虫有一定的作用 2。 小球藻（ Chlorella）为绿藻门 小
22、球藻属 普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞淡水 藻类 ，直径 3 8 微米 ，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广 球藻细胞内含有丰富的叶绿素，是真核生物。 光合作用 非常强，是其他植物的几十倍。其含有丰富的蛋白质、 维生素 、矿物质、食物纤维、核酸及叶绿素等，是维持和促进 动物 健康所不可缺少的营养素，特别是含有令人注目的 生物活性物质 糖蛋白、多糖体以及高达 13的核酸等物质 ，是生物饵料营养食品、保健食品及食品添加剂 ， 也是饲（饵）料和饲（饵）料添加剂，还是优秀的水产动物幼体的饵料。 本课题实验在实验室的条件下将引入光合细菌，芽孢杆菌、小球藻用于培养大草履虫的研究，同时也
23、研究混合培养液的培养效果。因为细菌和小型藻类都是大草履虫的饵料，并且这些光合细菌，芽孢杆菌、小球藻对保持培养液水质有一定调节作用 。在试验过程中探索可以加快培养速度，增加个体形态大小，延长稳定期的饵料。筛选出大草履虫的优质饵料，以满足不同实验需求的需要。结果将对实验室大量培养大草履虫具有一定的意义。 研究结果 也将 对于养殖 业的生物饵料培养 发展有着 一定的 重要意义，具有 一定 的经济效益。 2. 材料与方法 2.1 实验设计 本实验 通过了解大草履虫的形态特征、生态习性和种群生长的规律。根据大草履虫形态特征、生态习性，生长所需各种条件设计实验方案 。目的是在实验有限的空间内获得更高产量，
24、首先是筛选出优质的大草履虫饵料，然后就是如何去保持大草履虫的培 养水质的稳定，使其一直处于适宜的生存环境；还有提供充足适当的饵料。本 实验之一将对新的饵料进行 探索，通过对各种培养大草履虫的饵料进行对比性实验，然后根据各实验组的大草履虫生长、繁殖的结果进行分析，以筛选出的优质的大草履虫饵料，获得较高的产量。同时 培养过程中的对培养水质指标如 PH、氨氮进行监测，探索营养液的水质的变化与 大草履虫生长、繁殖的关系 。根据 探索营养液的水质的变化与 大草履虫生长、繁殖的关系，设计另一个实 验：通过 监测培养液的水质变化发现异常，即适时调整培养水质，保持大草履虫一直处适宜的环境下，使得在原有培养 液
25、里草履虫的种群数量达到最大值状态。 实验分为四个阶段，第一阶段为大草履虫的采集和提纯，第二阶段为大草履虫的扩大培养，第三阶段为培养液的配制和进行培养实验，和有关数据的记录，第四阶段对实验数据进行分析。 本实验设计三组实验， A 组实验研究小球藻浓度对大草履虫生长、繁殖的影响，设计五组不同浓度的小球藻培养液来培养大草履虫，探究出最适合大草履虫生长、繁殖的小球藻浓度。B 组实验研究不同培养液对大草履虫生长、繁殖的影响，设计 稻草杆培养液、 玉米培养液、小球藻培养液、光合细菌培养液、光合细菌冻干粉培养液、 芽孢杆菌培养液 、 玉米 +光合细菌培养液、玉米 +芽孢杆菌培养液 8 组培养液进行对实验，并
26、且同时每天测定它们 PH、氨氮的量，探索出适合培养大草履虫的培养液和 PH、氨氮这些指标变化情况和大草履虫的生长、繁殖的关系。 C 组实验根据 PH、氨氮这些指标变化情况和大草履虫的生长、繁殖的关系，研究是 通过 监测培养液的水质变化发现异常时（即 培养液的水质 PH 小于 6.8 或者氨氮大于 0.6），通过选用光合细菌来调整培养液水质的 PH 和氨氮 ，检验实验组大草履虫的数量与对照组是否有有差异。 6 本实验于四到五月份，在浙江海洋学院生物饵料培养实验室内进行。 2.2 实验材料 大草履虫、 氢氧化钠溶液 (1 mol/L) 、 小球藻藻种 、 盐酸溶液 (1 mol/L) 、 乙醇 、
27、 稻草 、玉米 、 光合细菌菌种（ 河南天义生物科技有限公司 ） 、 光合细菌冻干粉 (来自江苏无锡中顺生物技术有限公司 ) 、 芽孢杆菌 (来自江苏无锡中顺生物技术有限公司，粉状固体 )。 烧杯（ 1000ML） 40 个、小烧杯、玻璃棒、胶头吸管、毛细胶头吸管、血球计数板、锥形瓶 (200ml/1000ml/3000ml)、显板镜、电子天平、小勺（ 250 目），酒精灯、电炉、橡皮筋、标签纸、温度计、水博士水质测试盒（氨氮测试盒、 PH 测试盒 ） (来自北京生物化学技术有限公司 )、载玻片、纱布。 2.3 实验方法 2.3.1 大草履虫的采集 大草履虫多生活于富含有机质 的水域。据了解，
28、在污泥变黑 ,黑泥表面有白色膜的排水渠和靠近植物生长较多的小溪边或者池塘边，在此采回的大草履虫为佳 15。采集的时间最好选着在一天的中午十一点半到下午两点这个时间段，因为这段时间光线充足，水面氧气较丰富，大草履虫喜欢游到水的表面。用 150ML 的烧杯在排水沟，水的表面飘有白色膜的地方，用瓶口沿轻轻地刮下白色膜，注意不要刮得过厚 ,以免采入大量污泥，然后把水和污泥的混合液倒进 准备好锥形瓶内，带回实验室后静放一段时间。就可以取水样在显微镜下提取、分离。 大草履虫浓度过低 ,则可用 250目纱布制作而成小 勺 ,在水中不断地舀水过滤 ,使小 勺 网内的大草履虫数量浓集 ,然后倒入烧杯内 ,可以提
29、高采集效果 16.。 本实验的大草履虫采集来自浙江省舟山市定海区城区城北郊区的小河里。 2.3.2 大草履虫分离提取 由于采回来大草履虫的水样中，往往包含着各种各种的其它微生物在里面和各种各样其它 杂物。要想将其从这个混杂的环境分离出来最好办法是毛细 胶头滴管 吸取的方法，虽然这个操作方法比较繁琐，但是这个方面能简 单，方便把大草履虫提取出，并且很少会混杂有其它小型生物。如果运用其它方法，比如说牛肉汁引诱法、电泳法、酸碱驱赶法 17-18， 虽然这些方法比较快速，但是分离出的大草履虫往往含有一些其它微生物，同时操作比较繁琐，达不到较为满意的结果，用 毛细胶头滴管 吸取的方法是一种较好的方法，操
30、作起来也比较简便。 毛细胶头滴管 吸取的方法具体是： 在取回的水样回到实验室后，静置一段时间后。用胶头滴管在取采回来的水样中汲取水样滴至载玻片中，拿到显微镜下观察，看是否能在载玻片上的水样中发现大草履虫。在采回来的水样中吸取水样时， 最好是在水样表面下近 lmm 沿瓶壁一圈，因为大草履虫有 游向溶氧较多的区域的趋势。这个区域的大草履虫相对比较多。如果发现水滴中有大草履虫，利用毛细滴管吸取，放置准备好培养液的烧杯中。进行扩大纯培养，满足做实验的需求。 2.3.3 大草履虫的扩大、纯培养 在大草履虫在显微镜分离提纯前，先准备大草履虫扩大、再培养的培养液。可以利用 1%玉米粒培养液培养，因为有学者的
31、研究表明 1%玉米粒培养液培养的大草履虫种群最大密度大 ,个体形态较好 ,而且种群衰退较慢 ,是比较理想的培养大草履虫的材料 6 。 用电子天平称取 5 克的玉米， 放进加有 500ML 的自来水的烧杯中。然后拿到电炉上煮沸，煮沸 10 分钟后，停止加热。然后冷却，调整 PH 值，调整 PH 在 6.8-7.0 之间。把在显微镜下分离，提取出来的大草履虫放到准准备好的 1%玉米粒培养液培养，用纱布封口， 防止蚊子在7 其中产卵。因为蚊子的幼虫 孑不，孑不是草履虫的天敌，它将草履虫全部吃光了 4。然后 置于阳光能够照射到的地方，培养。两三天后观察培养效果。第两天就可以看到有一定量的大草履虫，第三
32、天就出现很多的大草履虫。可以满足一定数量，用于进行实验的需要。 2.3.4 实验培养液的配制 2.3.4.1 稻草培养液的配制 用 1000ML 的烧杯加入 700ML 的自来水和 7 g 稻草放到电炉上煮沸 10 分钟 ,后冷却、过滤、定容后分装 3 个 1000ML 的烧杯中 ,每一个烧杯内加入 200ML，制成浓度为 1.0%的稻草培养液。然后调整 PH 至于 7 左右。 2.3.4.2 玉米培养液的配制 用 3000ML 的烧杯加入 2500ML 的自来水和 25g 玉米粉，放到电炉上煮沸 10 分钟 ,后冷却、过滤、定容后分装 12 个 1000ML 的烧杯中 ,每一个烧杯内加入 2
33、00ML，制成浓度为 1.0%的玉米培养液。然后调整 PH 至于 7 左右。 2.3.4.3 小 球藻培养液的配制，有两个步骤。 第一步骤：在小球藻培养液配制前先对小球藻进行培养。按照小球藻培养的条件要求，先配制小球藻的培养液，放到 1000ml 的烧杯中，调节 PH 为 7。加入小球藻的藻种（小球藻的藻种来自本校的生物饵料培养室），放置智能人工气候箱内进行扩大培养，培养 5 天，形成小球藻液。这时可以达到 106个 /1ML. 第二步骤：用 5000ml 的锥形瓶加入 4000ML 自来水，放到电炉上煮沸 5 分钟 ,后冷却，分别 18 个 1000ML 的烧杯中，每一个烧杯内加入 190M
34、L，并且调节 PH为 7。然后每一个烧杯加入 10ML 的小 球藻液体。 2.3.4.4 光合细菌培养液的配制 用 3000ML 的烧杯加入 1800ML 的自来水放到电炉上煮沸 5 分钟 ,后冷却，分别 6 个 1000ML的烧杯中，每一个烧杯内加入 200ML，并且调节 PH 为 7。其中三个加入 5ML 的 光合细菌菌种（ 光合细菌 每 ml 总菌数 100 亿 ）。其中三个加入 1.5 克的光合细菌冻干粉。 2.3.4.5 芽孢杆菌培养液的配制 用 2000ML 烧杯加入 1000ML 的自来水放到电炉上煮沸 5 分钟 ,后冷却，分别。 3 个 1000ML的烧杯中，每一个烧杯内加入
35、200ML，并且调节 PH 为 7。 每一个烧杯内加入 1.5 克芽孢杆菌（固体）。 2.3.4.6 玉米 +光合细菌培养液配制 取六杯配置好的 200ML 浓度为 1.0%的玉米培养液，其中三杯加入 1.5 克光合细菌冻干粉，另外三杯加入 5ML 光合细菌。 2.3.4.7 玉米 +芽孢杆菌培养液配制 取三杯配置好的 200ML 浓度为 1.0%的玉米培养液，在当中加入 1.5 芽孢杆菌（固体 ） 。 8 个实验组培养液配方见表 2-1 表 2-1 各培养液的配方 Tab. 2-1 The formula of the medium 培养液配方 自来水（煮沸） 稻草 杆 玉米 小球藻 光合细
36、菌 芽孢杆菌 8 1 稻草杆培养液 2 玉米培养液 3 小球藻培养液 4 光合细菌培养液 5 光合细菌冻干粉培养液 6 芽孢杆菌培养液 7 玉米 +光合细菌培养液 8 玉米 +芽孢杆菌培养液 190ML 10g 190ML 10g 190ML 10ML 195ML 5ML（液体） 190ML 5g （固体） 190ML 5g(固体 ) 190ML 10g 5ML（液体） 190ML 10g 5g(固体 ) 2.3.5 培养实验过程（由于培养时间实验室温度 20到 25之间，为大草履虫适宜生长温 度，温度干扰不）。 2.3.5.1 A 组不同量小球藻液培养液 （浓度为 107个 /ml） 对培养
37、草履虫的影响的实验 设计五个实验组，每一个实验组有三个平行实验。一共 15 个烧杯加入等量 小球藻培养液（ 190ML 水和 10ML 小球藻）。放到实验室有阳光照射到的地方培养。 从第二天开始，第一组每天加入 5ML 小球藻液，第二组每天加入 10 ML 小球藻液，第三组每天加入 15ML 小球藻液，第四组每天加入 20 ML 小球藻液，第三组每天加入 25 ML 小球藻液（如表 2 表示）。每一组 加入 5 个大草履虫。用纱布包住每一个培养烧杯口。从第二天开始进行计数，计数时先用玻璃棒将大草履虫培养液搅匀后，用一毫升的移液管取 0.2 毫升大草履虫培养液 滴加到血球计数板上（一个平行组连续
38、进行三次），拿到显微镜下计数。计数后，把血球计数板上的大草履虫放会原处。记录有关的数据 。 A 组实验各组每天加入小球藻液的量的情况见表 2-2。 表 2-2 各培养液 加入小球藻液的量 Tab. 2-1 The liquid culture medium by adding the amount of Chlorella 组别 1 组（ A B C） 2 组（ A B C） 3 组（ A B C） 4 组（ A B C） 5 组（ A B C） 小球藻液 (ML/天 ) 107个 /ml 5 10 15 20 25 2.3.5.2 B 组实验 不同培养液大草履虫生长、繁殖的影响。设计八个实验
39、组，每一个实验组有三个平行实验。 第一组 稻草杆培养液、 第二组玉米培养液、第三组小球藻培养液、第四组光合细菌培养液、第五组光合细菌冻干粉培养液、第六组 芽孢杆菌培养液 、第七组玉米 +光合细菌培养液、第八组玉米 +芽孢杆菌培养液（具体见表 3）。 每一组加入 5 个大草履虫。 用纱布包住每一个培养烧杯口。放在实验室的内中央台上培养。 从第二天开始进行计数，计数时先用玻璃棒将大草履虫培养液搅匀后，用一毫升的移液管取 0.2 毫升大草履虫培养液 滴加到血球计数板上（一个平行组连续进行三次），拿到显微镜下计数。计数后，把血球计数板上的大草履虫放会原处，并且记录有关的数据。并且每天测量培养液的 PH、氨氮。大草履虫的体型大小测量，大草履虫在各培养液培养到第 7d 时 ,用胶头滴管取少量培养液（含有大草履虫）滴加到载玻片上，滴加乙醇（用乙醇把草履虫杀死后），晾干 (等待载玻片上的培养液蒸发掉 ),在显微镜下 观察 ,用目镜测微尺测量大草履虫体型大
