1、 本科毕业论文 （ 20 届） 大鳞副泥鳅和真泥鳅的的血细胞数目与其性别品种的关系 所在学院 专业班级 水产养殖学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 目录 中文摘要 . 错误 !未定义书签。 英文摘要 . 错误 !未定义书签。 1.前言 . 错误 !未定义书签。 1.1 泥鳅 . 错误 !未定义书签。 1.2 国内外的研究现状 . 错误 !未定义书签。 1.3 研究血液与性别关系的意义所在 . 错误 !未定义书签。 2.材料和方法 . 错误 !未定义书签。 2.1 实验材料和实验器材准备 . 错误 !未定义书签。 2.2 实验方法和过程 . 错误 !未定义书签。 3.结果与分析
2、 . 错误 !未定义书签。 3.1 红细胞和白细胞的基本特征以及变化规律 . 错误 !未定义书签。 3.2 数据记录与分析 . 错误 !未定义书签。 4.小结 . 错误 !未定义书签。 4.1 小结与讨论 . 错误 !未定义书签。 致谢 . 错误 !未定义书签。 1 大鳞副泥鳅和真泥鳅的的血细胞数目与其性别品种的关系 摘要 本次探究中一共选取 40 尾大鳞副泥鳅和 40 尾真泥鳅，研究两种泥鳅血液血细胞数目的量与品种和性别的关系，结果显示雄性大鳞副泥鳅血液中红细胞数目为雌性大鳞副泥鳅的 120.68%,雄性真泥鳅血液中红细胞数是雌性真泥鳅鳅血液中红细胞数目的 464.75%。雄性大鳞副泥鳅血液
3、中白细胞数目比雌性大鳞副泥鳅血液中的 白细胞数目少；雄性真泥鳅血液中白细胞数比雌性真泥鳅鳅血液中的白细胞数目少。总体而言，大鳞副泥鳅血液中的白细胞数目少于真泥鳅。雄性大鳞副泥鳅血液中红细胞数目明显少于雄性真泥鳅，雌性真泥鳅和雌性大鳞副泥鳅的区别则不明显。 关键词 品种 性别 血细胞 数目 大鳞副泥鳅 真泥鳅 2 Study On Relationship Among Oriental Weatherfishs Blood Cell Number ， Species And Sexual Distinction Abstract80 Oriental weatherfish, including
4、 40 Paramisgurnus dabryanus and 40 Misgurnus anguillicaudatus, were choosen in this study ,in order to march a Correlative analysis among blood cell number， sexual distinction and species.And the results suggest： The red blood cells number of male Paramisgurnus dabryanus is 120.68% of female Paramis
5、gurnus dabryanus, when it comes to Misgurnus anguillicaudatus ， the proportion is 464.75% . The white blood cells number of both male Oriental weatherfish is less than the female Oriental weatherfish of same species； The white blood cells in Paramisgurnus dabryanus blood are less than Misgurnus angu
6、illicaudatus The white blood cells of male Paramisgurnus dabryanus blood is apparently less than the red blood cells number of male Misgurnus anguillicaudatus blood.Besides,the difference between female Paramisgurnus dabryanus and female Misgurnus anguillicaudatus is not so obvious. Key words specie
7、s sexual distinction blood cell number Paramisgurnus dabryanus Misgurnus anguillicaudatus species difference 3 大鳞副泥鳅和真泥鳅的的血细胞数目与其性别品种的关系 1.前言 1.1 泥鳅 泥鳅 ，由于其 肉鲜味美，口感滑嫩，一直深受我国各地人民的青睐。且泥鳅 分布 范围极广，在 亚洲 地区 的日本、朝鲜、俄 国 及印度等地 均有分布，我国 除 青海和西藏 外， 整个 国 土范围内的 河 流 、 稻 田、 水渠、 池塘、 溪流、 湖泊等 低盐度 水 体 中均有 泥鳅的 分布， 特别是 在
8、长江 流域 和珠江 的 中下游分布 相当密集 ，是一种 重要的体型较小的 淡水 经济 鱼类 ，泥鳅不仅易于养殖也拥有巨大的市场。泥鳅肉质细嫩鲜美，每一百克可食用部分蛋白质的含量可达到17.4-22.7g，脂肪只有 3g， Ca2+ 50-140mg， Fe 2+ 约 2.5-3.0mg，以及 B 族维生素烟酸，多食泥鳅有养生益气之妙，本草纲目中就记载了泥鳅的药用价值：解渴醒酒，利尿补肾，收痔去痈，且对小儿盗汗，肝炎，皮肤瘙痒，跌打损伤等有良好的疗效。我国大众熟知的名菜：泥鳅钻豆腐，其实就是中国传统意义上的四大名菜之一 貂蝉豆腐，与川菜贵妃鸡， 浙菜西施舌，西北的昭君鸭并称，由此也可见泥鳅在我国
9、的受欢迎程度以及泥鳅的养殖壮丽前景，因此泥鳅正日益成为淡水养殖业的宠儿。 1.2 国内外的研究现状 但是由于在泥鳅只是在亚洲 是一种 重要的 小型淡水经济鱼类 ，在欧州，澳洲及美国等国家和地区，泥鳅并不算一种严格意义上的经济鱼类，一般唐人街才会有用于食用的急冻泥鳅供中餐馆以及华侨食用，鲜活的泥鳅通常只在渔具店作为鱼饵出售，或者在大型的宠物市场人们才可以看到有作为观赏鱼出售的颜色鲜艳的特殊品种的泥鳅的身影。所以在这些国家和地区，对泥鳅的各项生理生化指标只停留于科学研究的 阶段，缺乏专门的对其在养殖过程中各项指标，如血液中红白细胞含量，血细胞大小，血液淋巴细胞数目，水体 PH 值，水体溶解氧，水体
10、总碱度，水体氨氮含量，水体亚硝酸盐含量，血栓球，血红蛋白，红细胞最大脆性等等进行量化的，系统性的研究，因此自然也没有很有价值的研究资料可供参考。 而在我国水产养殖研究从起步到日趋成熟的几十年中，有关泥鳅的营养价值，药用价值，养殖技术的研究层出不穷，使得人们对于泥鳅的养殖技巧，习性好恶，适宜养殖的区域，适宜生长的水质，温度条件，在养殖过程中的季节性变化，气候性变化的认识也日趋清晰，国内的饲 料厂家也有专门生产的泥鳅养殖中的配合饲料的。泥鳅不仅易于养殖也拥有巨大的市场，泥鳅的养殖在淡水水产养殖业中从未停滞不前。而血液作为动物体中不可或缺的一部分，发挥着完全无法忽视的作用。首先，血液担负着输送糖类，
11、无机盐，氧气等维系生命新陈代谢的物质并带走氨，二氧化碳，尿素，尿酸等代谢废物的责任。大多数疾病的发生都和血液的病变有着直接或间接的关系，直接的如人类当代常见的血栓，脑溢血，高血压，再生性贫血，血癌，大航海时代常见的坏血病，间接的则如由于血液无法阻挡和遏制外来病原体而引起的各种炎症和乃至坏死，疽疮，痈疮， 以及由于血液中有害物质过多引起的尿毒症，肝硬化等等。 在水产动物中则表现为凡纳滨对虾多发黄头病，草鱼常见的出血病等。 1.3 研究血液与性别关系的意义所在 血液的健康与否也能和动物的各个器官产生各种相互的影响，例如在泥鳅体内，脾脏和头肾既作为血液的贮藏和生成器官，其功能的健康和完整深切地关系着
12、血液成分的完整及血4 细胞形态功能的完好与否，而与此同时，这两个器官的健康和功能完善也被血液的健康与否影响着。血液不健康时，若影响到肾脏功能的的发挥，从而使肾脏功能失常，进而影响到造血的头肾，就会最终反作用到血液本身。泥鳅体 内不同的器官的血液含量也存在显著差异，脾脏血液含量比较丰富，作为机 体内的主要血库，起储藏血液的重要作用。头肾血液含量也比较丰富则是由它作为主要的生血器官的角色决定的。肝脏中血含量较少，亦无原始型的血细胞，应该不属于泥鳅的生血器官，因为 外周血中亦可找到各种肝脏中没有的幼稚型血细胞。 血液指标与鱼体的生理状态、机体代谢、营养状况及疾病的密切关系 ,决定了它是鱼类疾病诊断中
13、作为重要的生理、病理和毒理学指标的地位。当鱼 体受到外界因子的影响而发生生理或病理变化时 , 必定会在血液指标中反映出来。因而 , 无论是研究有机物，重 金属，有毒矿物和工业废渣对鱼体影响 , 还是病毒，真菌，细菌感染鱼体后造成的损害，血液学指标的鉴定都是最为直接和有效的。比如在重金属溶液中 , 鱼类可能出现与别的应激反应相同的症状 ,从而导致贫血等现象的发生 ; 在 白细胞系中 , 则表现为是淋巴细胞数量的减少和噬菌细胞数量的增加提高 ,并同时出现所有淋巴细胞活力的减弱 ,进而降低机体的非特异性免疫机能。 泥鳅红细胞的发育过程中，它的功能与形态是符合用进废退的规律的。幼红细胞胞体比较大，它的
14、染色质通常以常染色质的状态存在，表明这时细胞的转录活动相对高效，胞质呈深蓝色，说 明胞质中的主要成分是 RNA，细胞的蛋白质合成活动也开始活跃，表明此时细胞正在大量合成血红蛋白；相比较而言，原红细胞的染色质则较致密，表明处于激活状态的基因比较少，染色质大多以不活跃的异染色质状态存在，细胞在这一阶段储存大量核糖核酸，为功能性蛋白的合成做准备；成熟红细胞的功能主要是携带氧气和 CO2，因而染色质凝结集中，形态缩小以异染色后状态存在但是不表达，其细胞质中血红蛋白含量较高泥鳅的原红细胞向幼红细胞变化过程中 T 细胞逐渐变大，而幼红细胞向成熟红细胞发育过程中，细胞逐渐变小，这种变化趋势与团头鲂相似 ，而
15、 兴国红鲤、 草鱼红细胞的发育趋势是原红细胞最大，在成熟过程中逐渐变小，这种差异属于种间差异。 在前人所做的诸多研究中，对泥鳅的各种研究可谓深入细致，但是除了极少数生物外，目前人类对于绝大多数生物的研究，都是很难达到尽善尽美的，对于泥鳅的研究亦然，目前并没有有关不同性别的泥鳅之间血细胞数目差别的文献。血细胞的重要性前文有述，毋庸赘言，而水产养殖业作为作为一个对于养殖对象的性别特别看重的行业，性别的意义当然不能忽视。不同性别的鱼类在摄食量，营养需求，发育过程，成熟时间方面都存在或多或少的区别。对这一特征最常见的 的应用莫过于罗非鱼超雄鱼的选育和 SIS 公司的凡纳滨对虾一代苗的选育系统，罗非鱼超
16、雄鱼的选育旨在培育全雄的子一代，因为罗非鱼大量的自行繁殖，会导致各种规格的罗非鱼争抢空间和营养，进而使罗非鱼生长速度慢而不齐，养殖效益差的缺点，而全雄的罗非鱼则大大降低了罗非鱼自行繁殖的概率， 2004 年时我国两广地区罗非鱼的雄性率就已达到了 99.83%，有力地推动了我国的罗非鱼养殖业的发展。 SIS 公司的凡纳滨对虾一代苗的选育系统则旨在使其苗种丧失生殖能力，即略过性腺的发育过程，凡纳滨对虾一代苗的生长后期摄入大量的营养的同时，营养 能够开源节流，转化为体内的蛋白质，从而回避了凡纳滨对虾在生长后期，尤其是夏季这一疾病多发的生长后期时由于营养被性腺夺取而导致生长缓慢的缺点，同时也避开了夏季
17、最高温时疾病多发的风险。这也是凡纳滨对虾一代苗虽然存在不稳定，适应力差，成本高等缺点，却还是能渐渐成为市场主导的原因。 研究不同性别的和不同品种的健康泥鳅在相同的条件下体内血细胞数目的差异作为一个涉及种间差异和性别差异的血液学课题，前人的相关研究凤毛麟角。这个课题是与其他三位5 同学的课题作为一个统一体而存在的，综合比较了四个课题的实验内容和实验目标后，我逐步地了解了自己所要做的实验的对于泥鳅养殖研究的意义以及目标，为整个实验打好了理论基础。本人的论文通过在参考诸多文献后选取大鳞副泥鳅和真泥鳅作为样本进行血红细胞以及白细胞计数研究， 比较性别及品种与血液中血细胞数目的关系，以期为泥鳅的血液学研
18、究提供基础资料，对以后的进一步的深化学习和育种工作提供帮助。 2.材料和方法 2.1 实验材料和实验器材准备 实验中所用到的大鳞副泥鳅和真泥鳅均购于舟山市南珍菜场，规格 7-13cm，体表无破损，暂养三天，暂养期间投喂适量泥鳅专用颗粒饲料，在规格 40cm 25cm 20cm 的 配备充气设备和气石的泡沫箱中暂养，水深 15cm，暂养 3-5 天后进行实验。 药品： 12500 单位肝素钠注射液（取自舟山医院），氯化钠，中性红，结晶紫，甲醛，均尽可能采用纯度较高的药品。 实验器材：光学显微镜，血球计数板，电子天平（精确到 0.1mg），盖玻片，载玻片， 50ML小烧杯两个，玻璃棒，蓝标 20
19、l 微量采血管，解剖剪（断尾取血用）， 1000ML 大烧杯。 2.2 实验方法和过程 2.2.1 选材并分组 ： 选取合格的体形匀称相近体表无破损的大鳞副泥鳅以及真泥鳅， 选取大鳞副泥鳅雌雄各20 尾，真泥鳅雌雄各 20 尾，每 10 尾同性别大鳞副泥鳅的血液为一组，每 10 尾同性别的真泥鳅的血液为一组。 2.2.2 取血 ： 断尾取血：以臀鳍后部为界，剪断泥鳅的尾，注意不要伤及内脏，以免体液进入血液中，将血液滴入预置有医用 12500 单位肝素钠注射液（ 2ml 装，每 15 单位肝素钠注射液可抗凝 1ml的血液）的小烧杯，一边滴一边摇晃防止血液凝结。 2.2.3 稀释 ： 一组泥鳅的血
20、液取样完成后，使用 20 l 的微量采血管采血，以 4ml 8%的氯化钠溶液作为稀释液，可将血液稀释 200 倍 ;另配制 NaCl0.7g，中性红 3mg1，结晶紫 5mg，甲醛 0.4ml，加蒸馏水至 100ml 的白细胞稀释液，用 4ml 白细胞稀释液将血液稀释 200 倍并将白细胞染色 2.2.4 观察计数 ： 准备好血球计数板和盖玻片，用盖玻片覆盖血球计数板的计数区，将血细胞稀释液轻轻摇匀后，用胶头滴管吸取少量稀释液，挤出一滴在盖玻片边缘，通过毛细作用使稀释液覆盖整个计数区。于高倍镜下计数中间大方格内四角及中央五个方格内红细胞总数，或者四周四个大方格内的白细胞数，若细胞压线，则采用数
21、上不数下，数左不数右的原则进行，如果各中方格内的红细胞数相差 20 个以上，四周各大方格内的白细胞数相差八个以上，则说明血细胞分布不均匀，需震荡稀释液，重新充池布血。 2.2.5 数据处理 ： 对 8 组样本的血细胞和白细胞数目的平均数经方差分析后进行组间差异的多重比较(Duncan s procedure),用 Excel 进行数据处理。 3.结果与分析 6 3.1 红细胞和白细胞的基本特征以及变化规律 红细胞亦称红血球，在常规化验时常用 RBC 表示，是各种血细胞中数量最多的一种，红细胞也是脊椎动物体内通过循环系统运送 O2 的最重要的载体，同时还具有免疫功能。发育完全的红细胞是没有细胞核
22、的，这意味着它们失去了遗传物质的最主要 载体 脱氧核糖核酸。红细胞通过葡萄糖合成能量而非线粒体，因为其细胞质中不存在线粒体。脊椎动物红细胞的体积大小各异，主要由其种类的不同决定，哺乳类的红细胞直径为 4 至 8 m（人类血液红细胞直径为 6 至 9 m），多数红细胞厚度是 1.5 至 2.5 m。鸟类红细胞的长径为 12 至 14 m，短径为 6.5 至 9.0 m，两栖类的细胞的体积则更大，长径是 23 至 60 m，短径以 13 至 35m 居多，爬行类的血细胞长径为 17 至 20 m，短径为 10 14 m。鱼类的红细胞的大小有明显差别，红细胞的数目则根据种的不同而存在差别，红细胞体积
23、 较大的，血液中红细胞数目相对较少。在冬眠期的动物，血细胞数目会比正常活动期显著减少。原红细胞外形为类圆形 ,其表面较为平滑且无胞突。胞质含量低 ,在胞核的周边存在一个狭细的深兰色环带。原红细胞的细胞核呈圆形 ,常占据细胞体积的绝大部分且在细胞内不对称分布 ,胞核中的染色质染为靛色颗粒，分布无规律可循。幼红细胞按照其形态的发展可分为早幼期、中幼期以及晚幼期三个时期。细胞在早幼期和中幼期时，细胞外形类似圆形 ,进入晚幼期后，红细胞长径延长，呈椭圆形 ,细胞外表面无胞突 ,圆形的细胞核通常处于细胞中央 ,核中的染色质也开始逐步凝 缩，相对于原红细胞而言，此时的细胞体和细胞核在体积上都有一定程度的缩
24、小。在红细胞越来越成熟的过程中 , 血红蛋白和胞质的含量比率会显著提高，而胞质的颜色也会变淡 ,其内胞质和血红蛋白含量明显增加。红细胞处于晚幼时期时的各种血涂片上都能清晰地见到其胞质中有许多血红蛋白 ,细胞体和细胞核的的体积也大大缩小。在头肾印片上面可以观察到处于各分裂期的的幼红细胞。发育完全的红细胞呈椭圆形 ,其外表面也没有胞突。近圆形或近椭圆的胞核居中 ,染色质经染色后呈现靛红色。 7 图 1 为雄性大鳞副泥鳅泥鳅的血细胞 Scheme 1 Blood cell of male aramisgurnus dabryanus 图 2 为雌性大鳞副泥鳅泥鳅的血细胞 Scheme 2 Blood
25、 cell of female Paramisgurnus dabryanus 图 3 为雄性真泥鳅的血细胞 Scheme 3 Blood cell of male Misgurnus anguillicaudatus 图 4 为雌性真泥鳅的血细胞 Scheme 4 Blood cell of female Misgurnus anguillicaudatus 白细胞旧称白血球，是血液中的一类细胞。白细胞也由于其功能被叫做免疫细胞。广泛地存在于人类和动物的血液及组织中。白细胞有细胞核，能变形以完成吞噬及迁移，通常能较活跃地移动，它们可以在血管壁内外转移，也能够由血管外的组织中向血管内迁移。因而
26、，白细胞除了血液和淋巴中存在外，也广泛分布于血管以及淋巴管以外的组织中。白细胞有细胞核，整体呈一个无色的球形，直径通常在 7 20 m 之间，比红细胞大。血液中的白细胞有五种，根据细胞体积从大到小是：单核细胞，嗜酸性粒细胞。中性粒细胞，嗜碱性粒细胞以及 淋巴细胞。由于实验条件的限制，本实验不对白细胞进行分类计数。 8 3.2 数据记录与分析 表一 雄性大鳞副泥鳅的红细胞以及白细胞数量 RBC and WBC numbers of different Oriental weatherfish (male) 红细胞数目 SD 1010/L 6118 2818 3018 2718 7718 5518
27、 3818 6918 3818 7918 6818 4718 4918 4618 7818 8018 7318 5418 7918 6518 平均值 P=57.33 ,标准差 SD=17.98 , N=57.33 5=286.65， 红细胞数 =286.65 1010 /L=2.86 106/ L 白细胞数目 1010/L 2 5 2 1 2 表二 雌性大鳞副泥鳅的红细胞以及白细胞数量 RBC and WBC numbers of different Oriental weatherfish (female) 红细胞数目 SD 1010/L 4713 6113 4513 5613 3813 4013 3913 3913 2413 6613 7413 3713 6113 6313 4413 3913 6113 3113 3313 5513 平均值 P=47.52 , 标准差 SD=13.22 N=47.52 5=237.60 红细胞数 =237.60 1010 /L=2.37 106/ L 白细胞数目 1010/L 3 5 2 6 3
