1、 本科毕业论文 （ 20 届） 中草药复方对鳖源致病性嗜水气单胞菌的体外抑菌效应 所在学院 专业班级 水产养殖学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 目录 中文摘要 . 1 英文摘要 . 2 1.前言 . 3 2.材料与方法 . 4 2.1 材料 . 4 2.2 实验方法 . 4 3.结果与分析 . 5 3.1 两味中草药复配组合对实验菌的抑制效果 . 5 3.2 三味中草药配伍组合对实验菌的抑制效果 . 6 3.3 适宜中草药配伍组合的使用范围 . 7 4.讨论 . 8 4.1 中草药复 配组合对实验菌的抑制 效应特征 . 8 4.2 关于实验菌对 中草药复配组合 的评价 .
2、8 4.3 关于中草药复配组合药效的探讨 . 8 5.致谢 . 9 参考文献 . 10 1 摘要 为评价中草药复配组合对嗜水气单胞菌体外抑菌效果，通过黄芩、金银花、蒲公英 3味 中 草药 的 10倍水提粉剂 （按中草药原料重量的 10倍浓缩，即 10克中草药浓缩成 1克的水提粉剂）对鳖源致病性嗜水气单胞菌株 ZHYYZ-1（ GenBank登录号： GU563992）进行体外抑制实验。采用倍比稀释法和平板法测定各药液对体外培养的嗜水气单胞菌 的 MIC及 MBC值 ， 为金银花1.56 mg/ml、黄芩 1.56mg/ml、蒲公英 3.12mg/ml，并分别记做 1个单方药物浓度单位。通过测定
3、（ 1A ,0.8A+0.2B， 0.6A+0.4B， 0.4A+0.6B， 0.2A+0.8B,1B）（例如黄芩与金银花进行复配，则 1A=1h=1.56mg/ml， 1B=1j=1.56 mg/ml）单方两两复配组合对实验菌的杀灭作用，筛选出对实验菌具明显抑菌效果的蒲公英与黄芩组合（ 0.2p+0.8h、 0.4p+0.6h、 0.6p+0.4h，依次记为 A、 B、 C）和黄芩与金银花组合（ 0.4h+0.6j、 0.6h+0.4j、 0.8h+0.2j，依次记为 D、 E、 F），开展 A、 B、 C、 D、 E、 F间 (例如 A与 D复配，则 A=0.2p+0.8h， D=0.4h
4、+0.6j， 1p=3.12mg/ ml，1h=1.56 mg/ml,1j=1.56 mg/ml)两 两复 配组合 的杀菌 效果评 价实验 。结果 表明，(0.08p+0.60h+0.32j)与 （ 0.16p+0.60h+0.24j） 这两个复配组合杀菌率均达到 99%以上，故将其作为治疗淡水养殖动物嗜水气单胞菌病重症的中药配方，为进一步获取预防和治疗轻度的淡水养殖动物嗜水气单胞菌病的用量， 再 设置菌浓度为 1 103cfu/ml、 1 104cfu/ml、 1105cfu/ml 三个组别，并相应稀释 【 (0.08p+0.60h+0.32j)、（ 0.16p+0.60h+0.24j）】复
5、配组合药物浓度，采用最小杀菌浓度测定方法， 确定 其用量范围。 实验表明，稀释倍数为 达 4倍时其杀菌率仍可达 90%以上。 关键词 黄芩 金银花 蒲公英 嗜水气单胞菌 ZHYYZ-1 2 Chinese Herbal Medicine on turtle Pathogenic Aeromonas hydrophila, the inhibition Abstract To evaluate the combination of Chinese herbal compound on the bacteria Aeromonas hydrophila Bacteriostatic effect,
6、 through the skullcap, honeysuckle, dandelion 3 herbs mentioned 10 times of water powder (herbal raw materials by 10 times the weight of concentrate, or 10grams to 1 gram of concentrated herbal water extract powder) on the turtle pathogenic strains of Aeromonas hydrophila ZHYYZ-1 (GenBank accession
7、number: GU563992) inhibition in vitro.By dilution plate method and determination of the liquid on cultured Aeromonas hydrophila, the MIC and MBC values for honeysuckle 1.56 mg / ml, skullcap 1.56mg/ml, dandelion 3.12mg/ml, andare denoted by a unilateral drug concentration units.By measuring (1A, 0.8
8、A +0.2 B, 0.6A +0.4 B, 0.4A +0.6 B, 0.2A +0.8 B, 1B) (for example, with honeysuckle, Scutellaria complex, then 1A = 1h = 1.56mg /ml, 1B = 1j = 1.56 mg / ml) complex combination of unilateral twenty-two killing effect of experimental strains were screened with a significant inhibition of experimental
9、 strains and the effect of baicalin combination of dandelion (0.2p +0.8 h, 0.4p +0.6h, 0.6p +0.4 h, followed by recorded as A, B, C) and baicalin combination with honeysuckle (0.4h +0.6 j, 0.6h +0.4 j, 0.8h +0.2 j, in turn recorded as D, E, F), to carry out A, B, C, D, E, F between (for example, com
10、pound A and D, then A = 0.2p +0.8 h, D = 0.4h +0.6 j, 1p = 3.12mg / ml, 1h= 1.56 mg / ml, 1j = 1.56 mg / ml) combination of any two complex evaluation of sterilization experiments.The results show that, (0.08p +0.60 h +0.32 j) and (0.16p +0.60 h +0.24 j) combination of the two bactericidal compound
11、rate of 99% or more, it will be treated as freshwater animals hydrophilacell strains of Chinese medicine formulations of severe disease, to further access to prevention and treatment of mild freshwater animals, Aeromonas hydrophila, the amount of disease, and then set the bacteria concentration of 1
12、 103cfu/ml, 1 104cfu/ml, 1 105cfu/ ml three groups, and the corresponding dilution 【 (0.08p +0.60 h +0.32 j), (0.16p +0.60 h +0.24 j)】 complex combination of drug concentration, with the minimum bactericidal concentration determination methods to determine the dosage range.Experimental results show
13、that dilution up to 4 times the sterilization rate is still above 90%. Keywords Scutellaria Honeysuckle Dandelion Aeromonas hydrophila ZHYYZ-1 3 1.前言 中华鳖（ Trionyx sinensis） 俗称鳖、甲鱼、团鱼等，隶属于爬行纲、龟鳖目、鳖科、鳖属，具很高的营养、经济和药用价值，深受广大消费者青睐，是当前我国最重要的淡水养殖品种之一。目前中华鳖各种疾病的频繁爆发，已成为限制中华鳖养殖业可持续发展的主要瓶颈之一 1。 嗜水气单胞菌 (Alerom
14、onas hydrophila)为水域常在菌，致病性嗜水气单胞菌既是引起淡水养殖动物暴发性死亡的主要病原，也是淡水养殖动物细菌性疾病中经济损失最为严重的致病菌 2。研究 表明，该菌对淡水鱼感染率高达 90%以上，死亡率高达 65%以上，其既是引起养殖中华鳖爆发性死亡的主要病原，也是养殖中华鳖细菌性疾病中经济损失最为严重的致病菌之一 3。在目前已报道的 25 种中华鳖疾病中，由其引起的鳖病就达 15 种之多 4。无疑，获取有效抑制该菌的药物制剂具有重要的现实意义。 近四十年来，国内外有关嗜水气单胞菌的防治仍以药物防治为主，但由于养殖生产上滥用抗生素、违禁药物的严重存在，已造成抗药性菌株出现、污染
15、环境、鳖肉质下降等不良后果 5,6。尤其是 Rijker 等发现，使用土霉素能够抑制哺乳动物 的体液免疫，口服抗生素在对致病菌产生杀伤或抑制作用的同时也会影响动物体内正常微生物的种群，甚至破坏体内的微生态平衡。为保障食品安全，国内在一大批常用药物被禁用同时，并未给出那些禁用药物的替代品，致使屡禁屡用现象不断升级 ,未禁用的部分抗生素和消毒剂因长期使用，已产生抗药性并影响产品质量。故开发不耐药的、安全度高的抗菌药物也就显得十分重要和必要。 中草药是中药和草药的总称 7,8, 是指在中国物性理论 (阴阳五行学说 )指导下用于防治人和动物疾病、促进健康、提高生产性能和动物产品质量的天然物质 9。我国
16、是中草药 的发源地，古代先贤对中草药和中医药学的深入探索、研究和总结，使得中草药得到了最广泛的认同与应用，它具有天然性、多功能性、无毒副残留性、无抗药性、双向调节性、免疫性等多种优点 10,11。在当前全面提倡健康养殖的新形势下，推广中草药防治鳖病，能提高养殖中华鳖的免疫功能和抗病能力，而备受人们的关注 12,13。实践证明，中草药是一类极有开发前景很好的纯天然渔药资源。 目前，国内外有关鳖源致病性嗜水气单胞菌的研究多集中于生物学特征 14、病原分离与鉴定 15,16,17、病理观察 18、毒力因子及致病力 19,20、病原检测 21,22,23以及免疫防病 24,25等方面。陈超然报道，在中
17、华鳖稚鳖饲料中添加 35mg/kg d 的甘草素，不仅具有提高供试中华鳖免疫应答水平，改善肝功能 ,增强抗嗜水气单胞菌感染的能力，同时还具有明显的促生长作用 26。吴德锋等在鳖饲料中添加由连翘、板蓝根、金银花等 10 多种中药组成的复方中药添加剂，治疗鳖白点病、红脖子病等效果显著。而有关防控水生动物嗜水气单胞菌病的中草药复配组合物间比例关系的优化研究尚未见报道。 鉴于此，作者于 2010 年 7-12 月以浙江海洋学院水产养殖实验 室安全养殖分室提供的鳖源致病性嗜水气单胞菌 ZHYYZ-1 为实验菌，在完成对致病性嗜水气单胞菌有显著抑菌效果的 9种中草药单方实验的基础上，筛选出具显著抑制效果的
18、 3 味中草药黄芩、金银花、蒲公英，开展中草药复方对致病性嗜水气单胞菌抑菌效果的筛选与评价研究，以期为水产动物嗜水气单胞菌药物制剂的开发提供基础资料。 4 2.材料与方法 2.1 材料 2.1.1 实验菌 以鳖源致病性嗜水气单胞菌 ZHYYZ-1 为实验菌，由浙江海洋学院水产养殖实验室安全养殖分室提供，为致病性强毒株。接种于普通营养琼脂培养基， 30振荡培养 24h 后 用无菌生理盐水（ 0.85%NaCl）制成不同浓度的菌悬液，现配现用。 2.1.2 培养基与中草药 中草药黄芩、金银花、蒲公英均购自 舟山同仁堂 。营养琼脂培养基 (含 2 NaC1)、营养肉汤培养基 (含 2 NaC1)均选
19、购自杭州微生物试剂有限公司。 2.1.3 实验仪器 生化培养箱（型号 SHP-750）、双人单面净化工作台（型号 SW-CJ-2FD）、立式自动电热压力蒸汽灭菌器（型号 LDZX-40SAI）等。 2.2 实验方法 2.2.1 菌悬液 和 含药平板 的制备 实验菌鳖源强致病性嗜水气单胞菌 ZHYYZ-1 经 30斜面培养 18h 后，用无菌生理盐水洗下菌苔，依次制成菌浓度为 1.0 104cfu/ml、 1.0 105cfu/ml、 1.0 106cfu/ml 、 1.0 107 cfu/ml 的悬液， 4保存备用。 取各实验药物 10 倍水提物 10g， 80 目过筛，分别加 400mL 蒸
20、馏水加热使其完全溶解，药物浓度为 0.025g/mL，然后取出 200mL，加入 200mL 蒸馏水，充分混匀，再取出 200mL，如此稀释各药物至对 104 菌液最小抑菌浓度的下一个浓度水平，并制成一定浓度的母液；采用 2倍稀释法，用蒸馏水梯次稀释母液至药物最小抑菌浓度（菌悬液 浓度为 1.0 104cfu/ml）的一半；设置若干药液体积梯度，依次加入营养琼脂并加热溶解， 121高压灭菌 20min，无菌操作，制成不同浓度的含药平板， 30过夜培养。 2.2.2 最小抑菌浓度（ MIC）和最小杀菌浓度（ MBC）的测定 将制备好的菌液浓度为 104-107g/mL 的菌悬液，依次均匀涂布于各
21、含药平板（ 100l 菌液/块）， 30恒温培养 24h 后测定各实验药物对不同浓度菌液的最小抑菌浓度（以含药平板上残留菌落数小于 10 个菌落的药物浓度作为该药物的最小抑菌浓度）和最小杀菌浓度（以实验菌杀 灭率达到 90%的药物浓度为最小杀菌浓度），结果见表 1。 表 1： 单味中草药 对不同浓度菌液的 MIC 和 MBC（ mg/mL） Table 1: Single Chinese herbs broth with different concentrations of the MIC and MBC (mg / mL) 菌液浓度 最小抑菌浓度 (MIC) 最小杀菌浓度 (MBC) 黄芩
22、 金银花 蒲公英 黄芩 金银花 蒲公英 1 104cfu/ml 1.56 1.56 3.12 1.56 1.56 3.12 1 105cfu/ml 3.12 3.12 3.12 1.56 1.56 3.12 1 106cfu/ml 3.12 3.12 6.25 1.56 1.56 3.12 1 107cfu/ml 3.12 6.25 12.50 1.56 1.56 12.50 2.2.3 中草药复配组合对实验菌的抑制效果 实验及评价方法 由表 1知，金银花、黄芩、蒲公英的最小抑菌浓度（ MIC）和最小杀菌浓度（ MBC）值为金银花 1.56 mg/ml、黄芩 1.56mg/ml、蒲公英 3.1
23、2mg/ml。将 1.56 mg/ml金 银花（记做 1j）、 1.56mg/ml黄芩（记做 1h）、 3.12mg/ml蒲公英（记做 1P）分别记做 1个单方药物浓度单位。以加和等药物浓度方式设置 两味中草药 联合药物浓度梯度【 (两味 药物浓度加和方式依次为 1A ,0.8A+0.2B，5 0.6A+0.4B， 0.4A+0.6B， 0.2A+0.8B,1B，其中第 1组和最后 1组为对照组），（例如黄芩与金银花进行复配，则 1A=1h=1.56mg/ml， 1B=1j=1.56 mg/ml）】，各梯度组总药物浓度为 1个药物浓度单位 ,组内设平行组 ,采用最小杀菌浓度测定实验方法，测 定
24、其对实验菌的杀灭作用。根据复配 组合 对实验菌的杀菌抑制效果，若其抑制效果等于对照组 ,表明其具有加和作用 ;若其抑制效果大于对照组 ,表明具有协同作用 ;若小于其抑制效果较高者 ,则表明具有拮抗作用 ;若大于或等于其抑制效果较高者 ,而小于对照组 ,则表明抑制作用具有相互独立性。 根据 两味中草药 的 复配组合 抑菌试验结 果 ,筛选出对实验菌具有明显抑菌效果的复配组合 ，再将其开展 三味中草药配伍组合 的杀菌效果评价实验 （ 实验及评价方法 同两味中草药复配组合抑制试验相同 ） ，获取 抑制 嗜水气单胞菌病的中药剂配方 。 为进一步获取中药剂配方 适宜 的 使用范围 ，再设置菌浓度为 1
25、103cfu/ml、 1 104cfu/ml、 1 105cfu/ml 三个组别，并相应稀释中药剂配方药物浓度，稀释倍数为 2 倍、 4 倍、 10 倍，采用最小杀菌浓度测定实验方法， 最终得到 适宜 的 中药剂配方 使用范围 。 3.结果与分析 3.1 两味中草药复配组合对实验菌的抑制效果 由 表 2 可见， 复配组合 蒲公英和黄芩、黄芩和金银花对实验菌的抑制效果作用明显 ，尤其在 复配组合（ 0.4 蒲公英 +0.6 黄芩、 0.6 黄芩 +0.4 金银花）中出现对菌株有杀灭作用 ， 这表明复配组合后，其药性加强，表现为协同效应。 当 两味中草药复配组合 的药量相差不大时，协同效应更为明显
26、，其抑菌和杀菌能力均大于单药抗菌效果 ，抑菌作用 并非单味中草药抑菌效果的简单加和。 在不同实验菌浓度下，同一复配中草药对实验菌的抑制效果不同。 3 个复配组中都随着菌液浓度的增加而出现明显的抑制效果作用减弱的现象。实验菌浓度在 1 105cfu/ml 时， 3 个复配组合中都出现对实验菌的杀灭效果作用，表现出协同作用；实验菌浓度在 1 106cfu/ml时， 3 个复配组合中对实验菌的抑制效果作用相差不大，但仍表现出协同作用；而当实验菌浓度在 1 107cfu/ml 时， 蒲公英和金银花复配的培养平板中的实验菌成长为无数小菌落、片状菌苔等，表明其抑制效果为拮抗作用。 3 个复配组中黄芩和金银
27、花的效果最为明显，药平板残留的菌落数量均小于等于 106.3 7.4 个 /块平板，甚至出现对实验菌的杀灭效果作用。 在相同实验菌浓度下，不同复配中草药对实验菌的抑制效果也是不同的。复配组合蒲公英和黄芩、黄芩和金银花在实验菌浓度为 1 105cfu/ml、 1 106cfu/ml、 1 107cfu/ml 时，对实验菌都有明显的抑制效果，但是复配组中随着黄芩的用量的减少，其抑菌效果有减弱的趋势，但仍表现为协 同作用；复配组 合 蒲公英和金银花（ 0.2p+0.8j、 0.4p+0.6j）在实验菌浓度为 1 105cfu/ml、 1 106cfu/ml 时，对实验菌有抑制效果，表现为协同作用，但
28、复配组 合蒲公英和金银花 （ 0.6p+0.4j、 0.8p+0.2j）在实验菌浓度为 1 107cfu/ml 时，实验菌数量远远大于对照组，对实验菌没有抑制作用，表现为拮抗作用。 表 2： 两味中草药复配组合对实验菌的抑制效果 Table 2: combination of two herbs mixed inhibitory effect of the experimental strains 中草药两两复配 不同菌浓度水平下药平板残留的菌落数量（个 /块平板） 1 105cfu/ml 1 106cfu/ml 1 107cfu/ml p 26.7 4.2 1105.0 52.6 密布 0.
29、2p+0.8h 0.0 0.0 5.0 1.0 25.0 7.0 0.4p+0.6h 0.0 0.0 0.0 0.0 15.3 4.2 0.6p+0.4h 0.3 0.6 3.7 0.6 40.0 1.0 0.8p+0.2h 0.7 0.6 6.3 2.1 无数小菌落 h 35.0 7.5 133.3 12.7 1032.0 68.8 6 0.2p+0.8j 0.0 0.0 10.0 2.0 菌落密布 0.4p+0.6j 0.0 0.0 31.7 4.2 菌落密布 0.6p+0.4j 229.3 18.1 3287.3 113.7 片状菌苔 0.8p+0.2j 210.0 1.0 数千菌落 一
30、层菌苔 j 30.7 2.1 245.3 8.6 3107.3 18.5 0.2h+0.8j 0.3 0.6 1.0 0.0 106.3 7.4 0.4h+0.6j 1.3 0.6 1.3 1.5 29.7 8.5 0.6h+0.4j 0.0 0.0 0.0 0.0 21.7 2.1 0.8h+0.2j 0.0 0.0 0.7 0.6 17.3 5.0 注： j 代表金银花（ 1.56 mg/ ml）， p 代表蒲公英（ 3.12mg/ ml）， h 代表黄芩（ 1.56mg/ ml) 3.2 三味中草药配伍组合对实验菌的抑制效果 由表 3 可见，蒲公英、金银花、黄芩三味中草药配伍中的（ 0.
31、08p+0.60h+0.32j）与（ 0.16p+0.60h+0.24j）这两个配伍组合的杀菌率均达到 99%以上，故可将其作为 作为治疗淡水养殖动物嗜水气单胞菌病重症的中药配方， 黄芩、金银花、蒲公英三者复配的质量百分比依次为（ 51.7-55.6） %、（ 20.7-29.6） %和（ 14.8-27.6） %，这一结果也完全符合中药的“性味归经”和“君臣佐使”配伍原理，即：由表 2 可见，蒲公英与黄芩组合（ 0.2p+0.8h、 0.4p+0.6h、0.6p+0.4h，依次记为 A、 B、 C）、黄芩与金银花组合（ 0.4h+0.6j、 0.6h+0.4j、 0.8h+0.2j，依次记为
32、 D、 E、 F）对实验菌有极为显著的强抑菌作用，而金银花与蒲公英组合对菌浓度 1107cfu/ml 组别有较强的杀灭拮抗作用。故三者配伍时应将黄芩作为君药，金银花为臣药（其杀菌能力与黄芩等同，且明显强于蒲公英，见表 2）、蒲公英为佐药（杀菌能力相对较弱，且与金银花有弱拮抗效应，见表 2）。 表 3： 三味中草药配伍组合对实验菌的 杀灭率 (%) Table 3: Compatibility of Chinese herbal combination of shamisen,the killing of experimental strain rate (%) 菌液浓度 1 105cfu/ml
33、 1 106cfu/ml 1 107cfu/ml 0.04p+0.48h+0.48j 92.81 89.85 82.84 0.08p+0.56h+0.36j 95.8 93.8 87.8 0.12p+0.64h+0.24j 96.5 93.83 90.8 0.16p+0.72h+0.12j 87.8 87.8 65.45 0.04p+0.64h+0.32j 97.65 96.34 90.2 0.08p+0.68h+0.24j 90.34 87.86 70.3 0.12p+0.72h+0.16j 87.4 79.9 63.2 0.16p+0.76h+0.08j 82.23 76.5 56.2 0
34、.04p+0.80h+0.16j 84.83 80.8 76.1 0.08p+0.80h+0.12j 80.12 72.9 65.7 0.12p+0.80h+0.08j 77.6 71.3 66.4 0.16p+0.80h+0.04j 71.5 66.21 60.3 0.08p+0.44h+0.48j 90.3 88.93 83.46 0.16p+0.48h+0.36j 95.6 92.32 89.8 0.24p+0.52h+0.24j 93.0 90.7 87.4 0.32p+0.56h+0.12j 92.7 84.5 63.56 0.08p+0.60h+0.32j 100.00 100.0
35、0 99.9 0.16p+0.60h+0.24j 100.00 100.00 99.0 7 0.24p+0.60h+0.16j 99.96 99.7 95.5 0.32p+0.60h+0.08j 99.0 85.2 63.4 0.08p+0.76h+0.16j 93.2 89.0 85.45 0.16p+0.72h+0.12j 87.54 81.33 78.6 0.24p+0.68h+0.08j 81.43 77.6 73.2 0.32p+0.64h+0.04j 78.2 72.74 68.55 0.12p+0.48h+0.48j 93.8 91.0 90.5 0.24p+0.40h+0.36
36、j 90.4 86.6 80.34 0.36p+0.40h+0.24j 87.6 82.4 76.3 0.48p+0.40h+0.12j 83.5 77.9 74.2 0.12p+0.56h+0.32j 95.43 92.4 90.2 0.24p+0.52h+0.24j 87.56 84.7 79.9 0.36p+0.48h+0.16j 83.5 80.1 76.32 0.48p+0.44h+0.08j 78.1 75.23 72.0 0.12p+0.72h+0.16j 87.56 83.6 79.8 0.24p+0.64h+0.12j 83.9 80.4 78.21 0.36p+0.56h+
37、0.08j 78.66 73.21 70.2 0.48p+0.48h+0.04j 75.9 70.77 67.4 注： j 代表金银花（ 1.56 mg/ ml）， p 代表蒲公英（ 3.12mg/ ml）， h 代表黄芩（ 1.56mg/ ml) 3.3 适宜中草药配伍组合的使用范围 由表 4 知，将复配组合 (0.08p+0.60h+0.32j)与（ 0.16p+0.60h+0.24j）药液浓度稀释倍数为 4 倍时，在不同的菌液浓度下，其杀菌率仍可达 90%以上。表明此复配组 合具有很强的杀菌效果，在实际养殖中，可适当稀释用来预防和治疗轻度的淡水养殖动物嗜水气单胞菌病。 表 4：蒲公英、黄
38、芩、金银花三方不同配比组合的杀菌率（ %） Table 4: dandelion, skullcap, honeysuckle combination of three different sterilization rate ratio (%) 菌液浓度 1 105cfu/ml 1 106cfu/ml 1 107cfu/ml 0.08p+0.60h+0.32j 100 100 100 1/2(0.08p+0.60h+0.32j) 100 100 100 1/4(0.08p+0.60h+0.32j) 90 90 90 1/10(0.08p+0.60h+0.32j) 70 60 50 0.16p
39、+0.60h+0.24j 100 100 100 1/2(0.16p+0.60h+0.24j) 100 100 100 1/4(0.16p+0.60h+0.24j) 90 90 90 1/10(0.16p+0.60h+0.24j) 60 60 50 注： j 代表金银花（ 1.56 mg/ ml）， p 代表蒲公英（ 3.12mg/ ml）， h 代表黄芩（ 1.56mg/ ml) 4.讨论 4.1 中草药复配组合对实验菌的抑制效应特征 中 草 药配伍有两层含义 : 一是指中药学中的配伍 ,即按病情需要和药性特点 , 将两种以上药物配合使用 ； 二是指在方剂学中的配伍 , 即药物按君臣佐使的法
40、度加以组合并确定一定的比例 26。药物通过配伍 , 能增效、减毒、扩大治疗范围 , 适应复杂病情及预防药物中毒。8 中 草 药的配伍 绝 不是药物之间的简单相加 27。 两 味中草药 复配 组合 属于 中药学中的配伍 ，即将 蒲公英、黄芩、金银花按不同 的质量比例直接 复配组合用于实验。在相同的实验条件下，不同实验质量比例梯度组的抑菌效果存在差异，将蒲公英、黄芩、金银花中两两复配时，有较强抑菌能力的一方作为主药，另一方作为配药，则抑菌强度为黄芩 =金银花蒲公英（见表 1），当 两 味中草药 复配 组合 时，主药与配药比例大于 1 时，抑菌效果明显（见表 2）。随着主药与配药的质量比例在增大时，
41、复配组合对实验菌的抑制效果越显著，这与表 2 的实验结果相吻合。 三 味中草药 配伍 组合 属于 方剂学中的配伍 。 即药物按君臣佐使的法度加以组合并确定一定的比例 ， 故三者配伍时应将黄芩作为君药， 金银花为臣药（其杀菌能力与黄芩等同，且明显强于蒲公英，）、蒲公英为佐药（杀菌能力相对较弱，且与金银花有弱拮抗效应，见表 2）。根据 蒲公英、黄芩、金银花 的性味归经，三味中草药配伍 组合 质量 比例关系为黄芩金银花蒲公英时，其抑制效果较明显 ，这与表 3 的 实验结果相符。 4.2 关于实验菌对 中草药复配组合使用范围 的评价 单味中草药对实验菌均有抑制作用，但因各中草药的主要成分不同，导致对实
42、验菌的抑制效果强度不同，为克服这一缺点，可将性味归经相似的中草药配伍，即性能功效相类似的药物配合应用，可以增强原有疗效 28。 使之形成协同作用，加强抑菌效果。 实验菌对中草药配伍组合使用范围很广，不管单味还是配伍都能有抑菌效果，但配伍组合的效果一般强于单味药物。因中草药成分复杂，当配伍的中草药相恶时， 两药合用 ， 一种药物能使另一种药物原有功效降低，甚至丧失 （表 3 与表 2 相比可得 ）。可见，实验菌对中草药的配伍还是有一定的使用范围的，选择配伍的中草药要性味归经相似为好。 4.3 关于中草药复配组合药效的探讨 中草药配伍组合不是简单的加和作用， 应将 配伍组合的 相互作用归为 以下
43、4 种基本方式 : (1)若其 抑菌 效应等于对照组 ,表明具有加和作用 ； (2)若大于对照组 ,表明具有协同作用 ； (3) 若小于其 抑菌 强度较高者 ,则表明具有拮抗作用 ； (4)若大于或等于其 抑菌 强度较高者 ,而小于对照组 ,则表明 抑制 作用具有相互独立性。 试验中的三味中草药蒲公英、黄芩、金银花， 据中华本草介绍， 蒲公英，性味，苦甘，寒；金银花，性味，甘，寒；黄芩，性味，苦，寒 29。其性味归经相似，但配伍时 药物按君臣佐使的法度加以组合并确定 的比例不同，其有些组合的抑菌效果 并 不都比 两 味中草药复配 组合 或单味中草 药的抑制效果强 （见表 2、 3） 。因中草药成分复杂多样，根据中草药配伍关系及作用原理可知， 配伍 时 关系主要有相须、相使、相畏、相杀、相恶和相反六个方面，只有当配伍的中草药性味归经相似时，才会出现药效增强，即为协同或加和作用。否则药效则会减弱或维持药效强度，即为拮抗或独立作用。 鉴于目前，对防治鳖源致病性嗜水气单胞菌的最佳中草药 配伍组合 在中华鳖细菌性疾病中的开发应用还处于摸索阶段。 而且中草药的组成成分复杂 ， 其 具体成分、作用方式和机理如何 ,仍有待于进一步研究。
