1、 本科毕业论文 （ 20 届） 饥饿对褐菖鲉肌肉主要生化组分组成的 影响 所在学院 专业班级 生物科学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 本科毕论文 目录 - I - 目录 摘要 .错误 !未定义书签。 Abstract .错误 !未定义书签。 引言 . 1 1 材料与方法 .错误 !未定义书签。 1.1 实验材料 . 错误 !未定义书签。 1.2 实验试剂 . 错误 !未定义书签。 1.3 实验仪器、设备 . 错误 !未定义书签。 1.4 实 验设计 . 错误 !未定义书签。 1.5 氨基酸的测定 . 错误 !未定义书签。 1.6 脂肪酸的测定 . 错误 !未定义书签。 2
2、结果与分析 . 3 2.1 饥饿对褐菖鲉生物学指标的影响 . 5 2.2 饥饿对褐菖鲉肌肉氨基酸的影响 . 5 2.3 饥饿对褐菖鲉肌肉脂肪酸的影响 . 8 3 讨论与结论 . 13 3.1 饥饿对褐菖鲉肌肉氨基酸组成的影响 . 13 3.2 饥饿对褐菖鲉肌肉脂肪酸组成的影响 . 14 参考文献 . 16 致 谢 .错误 !未定义书签。 本科毕业论文 中文摘要 1 摘要 摘要 饥饿是鱼类在自然水域生态系中经常面临的一种生理胁迫现象，也是影响鱼类正常生长、发育和生存的一个重要环境因子。饥饿对鱼类生理生态的影响研究受到国内外 学者的高度重视，饥饿可以影响鱼类代谢、行为、组织结构、存活、繁殖、酶活性
3、、生长和肌体组成成分以及鱼体的免疫功能，严重时可引起动物神经内分泌功能紊乱，诱发各种疾病，甚至导致死亡 . 实验在水温 18 0.5，盐度 27.0 0.5 条件下 ,时间分别为饥饿 0d、饥饿 1d、饥饿 3d、饥饿 7d、饥饿 14d 和饥饿 21d，研究了褐菖鮋（ Sebastiscus marmoratus）在饥饿胁迫下的生化组成、氨基酸和脂肪酸含量的变化。随着饥饿时间的不断延长，褐菖鮋肌肉的灰分、水分显著升高（ P n-3 n-6。 关键词 ： 褐菖鮋；饥饿；生化组成；氨基酸；脂肪酸 本科毕业论文 英文摘要 II Abstract Abstract Hunger is a physi
4、ological stress phenomena which fish are often faced with in natural aquatic ecosystems, and it is also an important environmental factor which affects the normal growth, development and survival of fish. The research about hunger effecting on fish physiology and ecology has been highly valued by do
5、mestic and foreign scholars. Hunger can affect the fish metabolism, behavior, organizational structure, survival, reproduction, enzyme activity, growth and body composition and immune function of fish, in severe cases it can cause neuroendocrine dysfunction of animals, induce kinds of diseases, and
6、even lead death.Present study we aimed at metabolic responses of Sebastiscus marmoratus and see the effects on amino acid, fatty acid and other biochemical composition. Experiments were carried out at water temperature 18 1 and salinity 27.0 0.5 to study the variation of amino acid, fatty acid and o
7、ther biochemical compositions under the starving condition. The sequences of experiment treatment were 1d、 3d、 7d、 4d、 21d of starvation and a feeding control. Starvation led to rate of water and ash increased, and the moisture showed a significant difference (P0.05); the fat decreased as the starva
8、tion continued, and it showed significant differences (P n-3 n-6. Key Words: Sebastiscus marmoratus; Starvation; biochemical composiotin; amino acid;fatty acid 本科毕业论文 材料与方法 1 引言 褐菖鲉 （ Sebastiscus marmoratus）， 隶属脊椎动物亚门 （ Vertebrata） ,硬骨鱼纲（ Osteichthyes）， 辐鳍亚纲 （ Actinopterygii）， 鲉形目 （ Scorpaeniformes）
9、， 鲉科（ Scorpaenidae）， 菖鲉属 ， 别名石狗公、石头鲈、石虎、石九公、火麒麟 ； 体 延长 ，侧扁 ， 暗褐色或红褐色 ； 头部具棱棘 ， 被栉鳞 ； 吻圆凸 ， 无鳞 ； 眼大 ， 上侧位 ， 眼间隔凹深 ， 较窄 ， 眼眶骨下缘无棘 ， 眶前骨下缘有一钝棘 ； 口大 ； 端位。下颌短；胸部与腹部被小圆鳞，上下颌，犁骨及腭骨均有细齿带；背鳍连续，共 12根，起点在腮孔上角后上方；背鳍与胸鳍具栉鳞，腹鳍具圆鳞，胸鳍鳍条常为 18根；侧线斜直，上侧位，伸达尾鳍基，侧线下方具 6条较明显横纹。并点缀有大量小型橙黄圆斑。 褐菖鲉属于暖温性底层鱼类。栖息于近岸岩礁海区。大者可达 30
10、0多毫米。分布于我国的南海、东海、黄海和渤海及日本、韩国等北太平洋西部沿岸。卵 胎生，体内受精。摄食小鱼，虾类，麦秆虫，泥螺，藻类等底栖生物 1。 褐菖鲉为定居岛礁性鱼类，移动范围小，基本在 1000m范围以内，一般不超过2000m。但随着季节的变化，也略有一定的迁移行为，迁移距离很短，移动路线有一定的规律性。通常在秋末冬初寒冷季节来到期间，向浅水区域移动 ;然后在春夏季又迁回原来出发的深水区域。因此放流增殖回收率很大，发展褐菖鲉的增殖业大有前途。作为岛礁定居性鱼类，褐菖鲉有明显的昼伏夜出行动，白天钻穴性极强。 据调查，在日本，褐菖鮋雌雄个体均多于 2龄首次性成熟。在大连，雌雄个体均于 2龄
11、9月首次性成熟，雌鱼和雄鱼首次性成熟最小规格分别为 91毫米和 100毫米。褐菖鮋卵胎生，产生的不是卵，而是长约 3mm的仔鱼。一尾雌鱼一次可产 5000-20000尾仔鱼，但要在大约一周的时间内分数次次产出。因此，产仔后水槽中的仔鱼发育不同步，小仔鱼会被捕食，结果只有小部分能存活。 饥饿是鱼类在自然水域生态系中经常面临的一种生理胁迫现象，也是影响鱼类正常生长，发育和生存的一个重要环境因子。 在饥饿胁迫下的鱼类的代谢机能发生改变，并通过利用鱼体自身的贮存物质如糖类，脂肪和蛋白质提供能量，但不同的鱼类，在饥饿状态下 能源物质的贮存和利用是不同的 2。 褐菖鲉（ Sebastiscus marmo
12、ratus）分布于我国的南海、东海、黄渤海及日本、韩国等北太平洋西部沿岸，定居性岛礁鱼类，放流回捕率高，肉质细嫩、味道鲜美、经济价值高，是海洋牧场业、垂钓休闲旅游业的最佳品种之一 3。国内外对褐菖鲉已开展了的研究较多， Watanabe Shoichi4研究了褐菖鮋的年龄与生长关系 ,YokoMatsuo,Yasushi Kasahara5在褐菖鮋幼稚鱼的饥饿耐受力、 游泳能力、成活率等方面做过相关研究。吴常文 6对褐菖 鮋的生物学特征、亲鱼的管理及催产、仔稚鱼发育及育苗技术做了相关研究； 林丹军等 7.8研究了褐菖鮋 精子的超微结构、精巢和卵巢的周期发育、精原细胞和初级精母细胞阶段的分化等；
13、 朱爱意等 9对褐菖鮋的耗氧率和窒息点进行研究并提出了褐菖鮋的生长温度和本科毕业论文 材料与方法 2 体重体长的关系；陈舜等 10对褐菖鮋网箱养殖技术做了初步探索； 石戈等 11从组织学和组织化学的角度，对褐菖鮋的消化道做出分析。但饥饿胁迫下褐菖鮋的生化组分、氨基酸及脂肪酸的变化状况研究尚未见报道 。 在暂养及活体运输过程中，为了提高成活率，鱼类也经常受到人为的饥饿胁迫 ，因此了解饥饿对褐菖鮋生理的影响，具有重要的意义。本文探讨了饥饿对褐菖鮋肌肉生化组分的影响，旨在进一步为该鱼在营养学、生理学等方面的研究提供相关资料。 本科毕业论文 材料与方法 3 1 材料与方法 1.1 实验材料 褐菖鮋 褐
14、菖鮋于 2010年 9月 9日购 自浙江省 舟山市南珍鲜活菜市场。暂养在 60 3025cm的可控生态水槽内（具有冷热控温、水体过滤、杀菌、充氧等功能），海水为经暗处理、沉淀、沙滤后的天然海水，盐度 27.00.5， pH7.90.5， 溶解氧 6-8mg/L，温度 180.5， 每天 18:00左右 投喂适量冰冻小杂鱼 ，其中投饵量以略有剩余为 准，驯养时间 20d，以适应环境。 1.2 实验试剂 试剂（规格） 厂家 氢氧化钠（分析纯 A.R） 国药集团化学试剂有限公司 盐酸（分析纯 A.R） 国药集团化学试剂有限公司 石油醚（分析纯 A.R） 国药集团化学试剂有限公司 试剂 1 4 % B
15、 F 3 - C H 3O H 溶液 美国 A L LT E C H 公司； 色 谱 纯 正 己 烷 ， 美国 T E D I A 公司； 硅胶型号粗孔 ( 2 c x ) 青 岛 海 洋 化 工 厂 分 厂 1.3 实验仪器、设备 仪器名称 型号 厂家 氨基酸分析仪 日立 L-8900 日立公司 冷冻干燥仪 DW-ZW128 长沙市恒和科技仪器有限公司 气相色谱 - 质谱分析仪 QP2010 日本 SHIMADZU 公司 自动进样器 AOC- 20 日本 SHIMADZU 公司 色谱柱 3 SPB- 50 美国 SUPELCO 公司 国产旋转蒸发仪 VIVO-VAP 惟沃技术 (中国 )有限
16、公司 旋涡混合仪 QL-861 型 上海天呈医流连锁超市总部 均质器 JZ- 型 铁 道部电化院四方电器设备厂 离心机 TGL-16C 型 上海安亭科学仪器厂 层析柱 Z 型 上海华岩仪器设备有限公司 电热恒温水浴锅 HHS-11-2 型 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 本科毕业论文 材料与方法 4 1.4 实验设计 实验分为实验组和对照组两组 ,每组 100 条 ,分别养在 4 个 60 30 25cm 的可控生态水槽内（具有冷热控温、水体过滤、杀菌、充氧，自动过滤氨氮等功能），海水为经暗处理、沉淀、沙滤后的天然海水， 盐度 27.00.5， pH7.90.5， 溶解氧 6-8mg/L，温度
17、 180.5，每隔 7 天左右更换海水一次 ,并且清洗更换沙滤 ,海绵等物品。对照组每天 18:00 左右 投喂适量冰冻小杂鱼 ，其中投饵量以略有剩余为准。分别在 饥饿 0d、饥饿 1d、饥饿 3d、饥饿 7d、饥饿 14d 和饥饿 21d 时每个鱼缸 挑选 规格 较 一致 ，平均体重 45-52g，全长 13.0-14.5cm，体表无伤、体色正常的鱼 4 尾进行实验。实验组和对照组同步取样。取样时 ,迅速将鱼击昏 ,擦干鱼表面的水分 ,称重并测量体长。取样时剪去鱼的头部 ,挖出内脏 ,放置在冰盘上 取样 ,取样时先沿着尾部向着头部去除表皮 ,然后沿着脊椎剥离背部肌肉 ,仔细的挑去肉中的鱼刺
18、,并且暂时保存在 -70的冰箱里 ,等待冷冻干燥 。 1.5 氨基酸的测定 氨基酸用酸水解法测定，仪器：日立 L-8900，操作：准确称取一定量样品，使样品氨基酸总量在 50 75mg范围内，置于 20-30mL安瓿瓶中，加入 10mL的 6mol/L盐酸，振摇使样品溶解或使样品均匀分散于溶液中，将安瓿瓶充氮后封口，然后置 110 1烘箱中水解 24小时，取出冷却，打开安瓿瓶，在氮吹仪上吹至近干，将水解液全部转移到 50mL容量瓶内，用超纯水或 去离子水定容至刻度，混匀，供衍生使用。 由于测定了色氨酸 ,因此本法还采用了碱水解法 : 一般与 5mol/L NaOH煮沸 10-20小时。优点：水
19、解彻底，色氨酸不被破坏，水解液清亮。缺点：产生消旋产物，破坏的氨基酸多。 1.6 脂肪酸的测定 脂肪酸用气相色谱分析法测定：称取适量的肌肉样品 ,放入组织捣碎机中搅碎 ,真空干燥 ,干燥样品用苯 )石油醚 (1B1体积比 )提取脂肪后 ,用 0.4mol/L氢氧化钾 )甲醇液酯化 30min,然后热水浴浓缩 ,加水分层 ,取上层液在英国 ThermoQues TraceGC/MS型气相色谱 -质谱联用 仪上测定分析 ,由微机按面积归一化法自动计算脂肪酸各组分含量 “气相色谱条件 :色谱柱美国 J起始柱温 18 ,以 1 /min 程序升温至 22 直至所有组分全部流出 ,进样口离子源温度 20
20、 ,载气为高纯氦 ,流量 1ml/min,测试分析在宁波大学测试中心完成 。 本科毕业论文 结果与分析 5 2 结果与分析 2.1 饥饿对褐菖鲉生物学指标的影响 随着饥饿时间的延长，褐菖鲉的体重逐渐减轻；饥饿 21d后，体重仅为对照组（ 0d）的77.441%，差异显著（ P0.05）；肥满度也显著下降，从 对照组（ 0d）的 3.769下降至 3.006；与对照组相比，饥饿 1d、 3d、 7d、 14d， 21d比肝重分别下降 20.505%、 20.692%、 32.891%、69.378%、 85.033%； 其中， 饥饿 14d、 21d， 比肝重变化极显著（ P0.01）。 表 1
21、 饥饿对褐菖鲉生物学指标的变化 Tab1 Changes ingrowth and morphological measurements in starved in S.marmoratus mean s SD 饥饿时间 /d Starvation Period 体重 /g Body Weight 肥满度 Condition Factor 0 51.5622.361 3.769 1 49.0713.002 3.612 3 45.8572.878 3.376 7 42.9172.591 3.180 14 41.5422.447 3.059 21 402.557 3.006 2.2 饥饿对褐菖鲉肌
22、肉氨基酸的影响 褐菖鲉在经过不同时间的饥饿后的氨基酸组成见表 2。从对照组（ 0d）来看，褐菖鲉主要氨基酸有：谷氨酸（ 9.410%）、甘 氨酸（ 4.775%）、赖氨酸（ 4.754%）、天冬氨酸（ 4.535%）、丙氨酸（ 4.505%）、和精氨酸（ 4.207%）。经过不同时间的饥饿，各组的氨基酸总量低于对照组（ 0d）（ P0.05）。必需氨基酸除苏氨酸、甲硫氨酸在饥饿 1d 后含量上升外，均随着饥饿时间的延长而下降，差异显著（ P0.05）；饥饿后，天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸含量呈持续下降；饥饿 1d 后，苏氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪
23、氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸含量先上升后下降。 表 3 饥饿对褐菖鲉 肌肉氨基酸组成的影响 Tab3 Effect of starvation on amino ac ids composition in S.marmoratus (g/100g) 本科毕业论文 结果与分析 6 氨基酸类 饥饿时间 /d starved period Amino acids 0 1 3 7 14 21 天冬氨酸 Asp 5.7410.066 5.5030.0351 5.75400.80 5.1600.015 4.9900.018 4.4500.034 苏氨酸 Tra* 3.6520.064 3.7150.033
24、 3.4370.110 3.2850.057 3.1470.032 2.9060.018 丝氨酸Ser 2.9300.114 2.8340.049 2.7940.060 2.7020.065 2.5080.023 2.3070.022 谷氨酸Glu 11.9110.260 11.8020.319 11.2190.265 9.7190.057 9.5110.088 8.9480.026 甘氨酸Gly 6.0440.405 5.8290.067 5.3100.105 5.0960.032 4.9390.020 4.5690.026 丙氨酸Ala 5.7030.069 5.5330.078 5.29
25、70.005 5.1510.026 5.1220.045 4.61900.166 胱氨酸Cys 1.5530.029 1.5420.074 1.4420.090 1.3160.003 1.3000.003 1.4550.030 缬氨酸Val* 3.2030.042 3.2450.096 3.1150.020 2.8610.057 2.6390.021 2.5730.039 甲硫氨酸Met* 3.0540.114 3.1600.081 2.7230.005 2.6980.018 2.5710.003 2.4680.020 异亮氨酸Lie* 3.3630.106 3.0290.063 3.3540
26、.045 2.9850.032 2.8720.028 2.7210.058 亮氨酸Leu* 4.9430.276 4.6610.144 4.5510.115 4.3150.028 4.0580.036 3.8300.046 酪氨酸Tyr 3.2090.266 3.4320.010 3.4240.050 3.1230.056 2.8850.026 2.5400.013 苯丙氨酸Phe* 3.1610.070 2.9650.064 3.2180.015 2.9250.029 2.7240.012 2.7250.038 赖氨酸Lys* 6.0060.174 5.7700.121 5.7160.210
27、 5.0910.007 4.7790.023 4.3070.114 组氨酸His 1.4430.069 1.8340.023 1.6280.055 1.4840.028 1.3680.016 1.2950.003 精氨酸Arg 5.3250.006 5.3930.016 5.1880.030 4.7050.034 4.5030.049 4.1300.033 脯氨酸Pro 4.3100.117 4.5120.065 4.8980.065 4.5980.024 4.4270.038 4.0540.026 色氨酸 1.1460.015 1.0550.026 1.1330.030 1.1020.031 0.9790.032 0.9020.012
