1、 本科毕业论文 （ 20 届） 曼氏无针乌贼不同地理群体的营养成分分析 所在学院 专业班级 生物科学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 目录 摘要 .错误 !未定义书签。 Abstract .错误 !未定义书签。 引言 . 1 1 材料与方法 . 3 1.1 样品 . 3 1.2 实验原理 . 3 1.2.1 水分的测定 . 3 1.2.2 总灰分的测定 . 3 1.2.3 脂肪含量的测定 . 3 1.2.4 蛋白质含量的测定 . 3 1.2.5 蛋白质的氨基酸及微量元素测定 . 5 1.3 试剂及仪器 . 5 1.3.1 试剂 . 5 1.3.2 仪器 . 6 1.4 方法步
2、骤 . 7 1.4.1 水分的测定 . 7 1.4.2 灰分的测定 . 8 1.4.3 粗脂肪的测定 . 8 1.4.4 粗蛋白的测定 . 9 1.4.5 蛋白质的氨基酸及微量元素测定 .10 1.5 本章 小结 .10 2 结果与分析 . 11 2.1 检测环境参数 . 11 2.2 检测结果 . 11 2.2.1 水分 含量 . 11 2.2.2 灰分 含量 .12 2.2.3 脂肪 含量 .12 2.2.4 蛋白质 含量 .13 2.2.5 氨基酸 、 微量元素 及脂肪酸 等的 含量 . 14 2.3 结果与分析 . 16 2.3.1 水分 .16 2.3.2 氨基酸 .16 2.3.3
3、 微量元素 . 16 2.3.4 灰分 . 17 2.3.5 粗脂肪 . 17 2.3.6 粗蛋白 . 17 2.4讨论 .17 2.4.1 三地 地理环境差异 .18 2.4.2 光照和饵料对营养成分的影响 . 18 2.5小结 . 18 参考文献 .20 致谢 . 21 I 摘要 摘要 本实验通过干燥法、 550高温灼烧法、索氏提取法、凯氏定氮法和仪器分析法 。对不同地理 群体的 曼氏无针乌贼 （ Sepiella maindroni） 肌肉中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等进行了分析。结 果表明：曼氏无针乌贼肌肉含水量 最高，其中厦门最高，温州次之，舟山最低，分别为 83.8
4、%， 77.73%， 77.2%； 灰分含量 舟山最高，温州次之，厦门最低，分别 为 1.77%， 1.57%， 1.51%； 粗脂肪含量 舟山最高，厦门次之，温州最低，分别 为 3.95%， 3.71%， 3.56%； 蛋白质含量 温州最高，厦门次之，舟山最低，分别 为 11.86%， 11.54%， 11.42%；曼氏无针乌贼肌肉蛋白质中含有 17 种氨基酸，谷氨酸（ GLU），天冬氨酸（ Asp）和亮氨酸（ LEU)的质量分数较高， 其中，谷氨酸和天冬氨酸含量温州最高 ，厦门次之，舟山最低，分别 为 16.0732%， 15.9832%，15.6599%和 12.0659%， 12.02
5、65%， 11.9833%；亮氨酸含量温州最高，舟山次之，厦门最低， 分别 为 6.9322%， 6.7932%， 6.7799%；其他的主要氨基酸为赖氨酸 (LYS),异亮氨酸 (ILR) ，甘氨酸（ GLY）， 其中赖氨酸和异亮氨酸含量厦门最高，温州次之，舟山最低， 分别 为 3.9032%， 3.8932 %， 3.8232 %和 3.3032%， 3.2732 %， 3.2656%；甘氨酸 含量 温州最高，厦门次之，舟山最低， 分别 为 2.9532%， 2.9465%， 2.8932%；氨基酸总的含量 厦门最高，温州次之，舟山最低， 分别 为 63.9727%， 63.8992%，
6、63.3878%； 微量元素中磷、碘、硒、镁的含量相对较高， 舟山最高，厦门次之，温州最低， 分别为舟山 1482.6mgkg、 316.5mgkg、 275.6mgkg、 210.2mgkg；温州 1476.5mgkg、304.5mgkg、 243.2mgkg、 201.mgkg；厦门 1480.2mgkg、 300.2mgkg、 252.3mgkg、200.3mgkg； 其中铅的含量最低 均为 0.1mgkg。文中还对维生素，胆固醇、卵磷脂等成分进行了分析 。 本试验首次对三个不同地理群体曼氏无针乌贼肌肉的营养成分进行了对比分析，为人工养殖及资源的保护开发与利用提供科学依据。 关键词 曼氏
7、无针乌贼；肌肉；营养成分 。 错误 !未找到引用源。 II Abstract Absract This paper determinate the contents of water, ash, crude protein, crude fat and some trace elements of muscle from Sepiella maindroni in different areas by 550 high temperature ignition method, solex method, Kjeldahl method, and instrumental analysis re
8、spectively. The study indicated that water content of the muscle of the cuttlefish in Xiamen was the highest 83.8%, followed by Wenzhou 77.73%, Zhoushan 77.2%; ash content in Zhoushan was the highest 1.77% , followed by Xiamen 1.57%, Wenzhou 1.51%; the content of fatty acid in Zhoushan was the highe
9、st 3.95%, followed by Xiamen 3.71%, Wenzhou ,3.56%; The content of protein in Wenzhou was the highest 11.86% , followed by Xiamen 11.54%, Zhoushan 11.42%. There were 18 kinds of protein in the muscle from Sepiella maindroni including Glutamate (Glu), aspartic acid (Asp) and leucine (Leu) that was hi
10、gher in score, Content of Glutamic acid and aspartic acid in Wenzhou was the highest, followed by Xiamen, Zhoushan, respectively 16.0732%; 15.9832%; 15.6599% and 12.0659%; 12.0265%; 11.9833%; Content of Leucine in Wenzhou was the highest, followed by Zhoushan, Xiamen, respectively 6.9322%; 6.7932%;
11、6.7799%. The other main amino were acid lysine (LYS), isoleucine (ILR); glycine acid (GLY), Content of lysine and isoleucine in Xiamen was the highest, followed by Wenzhou, Zhoushan, respectively 3.9032%; 3.8932%; 3.8232% and 3.3032%; 3.2732 %; 3.2656%; Content of Glycine in Wenzhou was the highest,
12、 followed by Xiamen, Zhoushan, respectively 9532%, 2.9465%, 2.8932% and the total content of amino acid in Xiamen was the highest, followed by Wenzhou, Zhoushan minimum, respectively 63.9727%, 63.8992%, 63.3878%. Trace elements of sodium, phosphorus, iodine, selenium, and magnesium contents were rel
13、ative taller, that of Zhoushan the highest, followed by Xiamen, Wenzhou, respectively 1482.6mgkg, 316.5mgkg, 275.6mgkg, 210.mgkg in zhoushan, 1476.5mgkg, 304.5mgkg, 243.2mgk, 201.2mgkg in wenzhou, 1480.2mgkg, 300.2mgkg, 252.3mgkg, 200.3mgkg in Xiamen. The content fo lead was 0.1mgkg which was the lo
14、west. Vitamins, cholesterol, lecithin and other ingredients were also analyzed in this paper. The trial of the muscle nutrients of Sepiella maindroni from three areas were used to analysis the nutritional components in muscle for which could provide some science data for the cuttlefish resources use
15、ness and protection. Ke y words Sepiella maindroni； Muscle； Nutritional components1 引言 曼氏无针乌贼 (Sepiella maindroni de Rochebruns)、 属软体动物门 (Mollusca)、头足纲 (Cephalopoda)、乌贼目 (Sepioidea)、乌贼科 (Sepiidae)动物，为中型乌贼。个体较金乌贼小，一般胴体长 15cm。眼部椭圆形，后部端圆，长度为宽度的 2 倍。眼部后面有一脉孔，常流出近红色的腥臭腺体。肉鳍前段狭窄，向后部渐宽，位于胸部两侧全缘，末端分离。腕 5 对，
16、 4 对长度相近，第 4 对腕较其他腕长。各腕吸盘大小也相近。其胶制环外缘具尖锥形小齿。触腕一般超过胭长，穗狭小。眼背白花斑明显。石灰质内骨长椭圆形，长度约为宽度的 3 倍，角质缘发达，后端无骨针 1。曼氏无针乌贼广泛分布于中国沿海、俄罗斯远东海、日本濑户内海和朝鲜西南沿海等海区，是我国东海渔场传统的“四大海产”之一。曼氏无针乌贼的可食部分约占总体的 92%。其肉洁白如玉，具有鲜、嫩、脆的特点，营养丰富每 百克肉含蛋白质 13g、脂肪 0.7 g 以及丰富的钙、磷、铁。除鲜食外，还可加工制成罐头食品或干制品。乌贼的干制品南方叫螟蚨鲞，北方叫墨鱼干，雄性生殖腺干品叫乌鱼穗，雌性缠卵腺干品叫乌鱼蛋
17、，均为海味佳品，深受百姓喜爱 2。其不仅肉味鲜美 , 营养丰富 , 而且还具有重要的药用价值。乌贼骨即中药海螵蛸，具有药用价值。我国著名的“墨鱼干”、“螟蛹誊”、“乌穗”“乌鱼蛋”等产品均主要是曼氏无针乌贼及其性腺的干制品 3。曼氏无针乌贼为我国海洋头足类动物中重要的渔业经济品种 , 曾与大黄鱼、小黄鱼及带鱼并列称为我国四大海 产。其肉性平、味咸 , 有健脾、利水、止血、止带、温经之功能 , 可治水肿、湿痹、足癖、瘁疮及妇女闭经等症 4。乌贼墨作为一种中药，文献上早有记载 5。它主要作为止血剂，治疗出血性疾病，如功能性子宫出血、胃出血等 6。也有实验证明它可以预防实验动物放射病7。近年来，日本
18、学者发现乌贼墨有抗肿瘤作用 8。其内壳 , 称为海螵蛸，为我国的传统中药 , 具有除湿、制酸、止血、收敛等功效，对崩漏带下、血枯经闭、腹痛症、吐、呕、便血、胃痛吞酸、阴蚀烂疮、虚疤泻病等均有特殊疗效，民间还用于哮喘、疟疾等疾病的治疗 9。脂肪里含有大量的高度不饱和脂肪酸如 EPA、 DHA，加上肉中所含的高量牛磺酸，都可有效减少血管壁内所累积的胆固醇，对于预防血管硬化、胆结石的形成都颇具效力。同时能补充脑力、预防老年痴呆症等。因此对容易罹患心血管方面疾病的中、老年人来说，乌贼更是有益健康的食物。 浙江省历史上年曼氏无针乌贼最高产量达 6 万吨，占全国海洋捕捞总产量的9.3%。但自 20 世纪
19、70 年代中期以来，由于过度捕捞和环境条件的恶化，我国曼氏无2 针乌贼的资源遭到极大的破坏，野生曼氏无针乌贼资源越来越稀缺，到目前为止已趋于枯竭 10。近年来， 曼氏无针乌贼在市场上供不应求，其市场价格也一路攀升，前景看好。为迅速恢复我国的曼氏无针乌贼资源 , 以人工增殖和养殖为手段的资源修复工作已迅速在我国部分省市展开。然而，曼氏无针乌贼的营养价值非常高，因为其光照时间11，饵料供应，温度，水质等等都不相同 12，在不同地理区域的乌贼是不同的，我们对其主要的食用部分肌肉进行营养成分分析，来研究其肌肉的营养构成，通过比较舟山、温州、厦门三地的乌贼来获得信息， 为乌贼的人工养殖和保护开发与利用提
20、供科学依据。 本文拟采用生化测定方法 , 对我国 舟山、温州、厦门三地的 曼氏无 针乌贼肌肉中的营养成分构成进行研究 , 希望通过研究比较更清楚全面地了解曼氏无针乌贼肌肉的营养成分构成 ,以及比较三地乌贼的差异来确定最具有营养价值和经济效益的品种，从而为大规模饲养提供选种依据。 3 1 材料与方法 1.1 样品 检测样品曼氏无针乌贼的肌肉，采自舟山、温州、厦门三地，样品带回实验室后，取其肌肉备实验分析用。 1.2 实验原理 1.2.1 水分的测定 直接干燥法是基于曼氏无针乌贼肌肉中的水分受热以后，产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱中的分压，使三个不同地里群体乌贼肌肉中的水分蒸发出来 ，同时，由于
21、不断的加热和排走水蒸汽，而达到完全干燥的目的，曼氏无针乌贼肌肉干燥的速度取决于这个压差的大小。 1.2.2 总灰分的测定 把一定量的样品经炭化后放入高温炉内灼烧，使有机物质被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，而无机物质以硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、氯化物等无机盐和金属氧化物的形式残留下来，这些残留物即为灰分，称量残留物的重量即可计算出样品中总灰分的含量。 1.2.3 脂肪含量的测定 游离脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有机溶剂抽提，而结合态脂肪不能直接被乙醚、石油醚提取，需要在一定 条件下进行水解等处理，使之转换成游离脂肪后方能提取，故索氏抽提法测得的只是游离态脂肪，而结合态脂肪测不
22、出来。将经前处理而分散且干燥的样品用无水乙醚或者石油醚等溶剂回流提取，使样品中的脂肪进入溶剂中，回收溶剂后所得到的残留物，即为脂肪（或粗脂肪） 。 1.2.4 蛋白质含量的测定 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水，而样品中的有机氮转换成氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨逸出用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 样品消化 ：消化反应方程式： 2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4 =(NH4)2S04 + 6C02+12S02+16H20 4 浓硫酸具有脱水性，使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。浓硫酸
23、又有氧化性，将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫： 2 H2SO4+C=2S02+2H20+CO2 二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中： K2SO4 2NH3 = (NH4)2SO4 在消化反应中，为了加速蛋白质的分解，缩短 消化时间，常加入下列物质： (1)硫酸钾 加入硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物分解，它与硫酸作用生成硫酸氢钾可提高反应温度，一般纯硫酸的沸点在 340 左右，而添加硫酸钾后，可使温度提高至 400 以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被分解、水分不断逸出而使硫酸硫酸钾浓度增大，故沸点升高，其反
24、应式如下： K2SO4+ H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O十 +SO 3 但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起 已生成的铵盐发生热分解放出氨而造成损失： (NH4)2SO4=NH3十 (NH4)HSO4 2(NH4)HSO42NH3+2SO3十 2H2O 除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类来提高沸点，但效果不如硫酸钾。 (2)硫酸铜 CuS04 硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有氧化汞、汞、硒粉、二氧化钛等，但考虑到效果、价格及环境污染等多种因素，应用最广泛的是硫酸铜、使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等
25、作为氧化 剂以加速有机物氧化，硫酸铜的作用机理如下所示： 2Cu SO4Cu SO4+ SO2+O2 C+2CuSO4Cu2 SO4+S02 +CO2 Cu2SO+2H2SO42CuSO4+2H2O+SO2 此反应不断进行，待有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜生成，溶液呈现清澈的蓝绿色。故硫酸铜除起催化剂的作用外，还可指示消化终点的到达，以及下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。 (1)蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热蒸馏即可释放出氨气反应方程式如下： 2NaOH+(NH4) SO4=2NH3+ Na2SO4+2H2O 5 (2)吸收与滴定：加热蒸馏所放出氨可甩硼酸溶液进
26、行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂的变色反应，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定反应方程式如下： 2NH3+4H3BO3=(NH4) 2B4O7+5H2O (NH4) 2B4O7+5H2O+2HCl=2NH4C1+4H3BO3 蒸馏释放出来的氨，也可以采用硫酸或盐酸标准溶液吸收，然后再用氢氧化钠标准溶液反 滴定吸收液中过剩的硫酸或盐酸，计算出总氮量。 1.2.5 蛋白质的氨基酸及微量元素测定 氨基 酸和微量元素钾、 钙、 纳、 镁、磷、铁、铜、锌、锰、硒的测定委托上海 谱 尼测试技术有限公司 (Pony Testing International G
27、roup )和浙江大学饲料研究所 测定。 参照标准 GB/T 5009.124-2003 GB/T 5009.93-2003 GB/T 5009.91-2003 GB/T 5009.90-2003 GB/T 5009.13-2003 GB/T 5009.87-2003 1.3 试剂及仪器 1.3.1 试剂 (1)1： 4 盐酸溶液 (2)0.5三氯化铁溶液和等量蓝墨水的混合液 (3)6mol/L 硝酸 (4)36过氧化氢 (5)辛醇或纯植物油 (6)无水乙醚或石油醚 (7)海砂 (同水分测定 ) (8)浓硫酸， (9)硫酸 铜， (10)硫酸钾， (11)40氢氧化钠溶液 (12)4%硼酸吸收液：称取 29g 硼酸溶解于 500ml热水中，摇匀备用。 (13)甲基红 溴甲酚绿混合指示剂： 5 份 0.2%溴甲酚绿 95%乙醇溶液与 1 份0.2%甲基红乙醇溶液混合均匀。 (14)0.1000mol/L 盐酸标准溶液
