1、 本科毕业论文 （ 20 届） 曼氏无针乌贼两种颜色受精卵卵膜营养成分对比分析 所在学院 专业班级 生物科学 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 目录 目录 摘要 .错误 !未定义书签。 Abstract .错误 !未定义书签。 引言 . 1 1材料与方法 . 3 1.1 .样品 3 1.2 . 实验原理 3 1.2.1 水分的测定 . 3 1.2.2 总 灰分的测定 . 3 1.2.3 脂肪含量的测定 . 3 1.2.4 蛋白质含量的测定 . 4 1.2.5 蛋白质的氨基酸及微量元素测定 . 5 1.3 试剂及仪器 . 5 1.3.1 试剂 . 5 1.3.2 仪器 . 6 1
2、.4方法步骤 . 7 1.4.1 水分的测定 . 7 1.4.2 灰分的测定 . 8 1.4.3 粗脂肪的测定 . 9 1.4.4 粗蛋白的测定 . 9 1.4.5 氨基酸及微量元素测定 . 10 2 实验结果 . 12 2.1检测环境参数 . 12 2.2检测结果 . 12 2.2.1 水分侧定数据 . 12 2.2.2 灰分数据 . 12 2.2.3 粗脂肪测定数据 . 13 2.2.4 蛋白质数据 . 14 2.2.5 氨基酸及微量元素数据 . 14 3 结果分析与讨论 . 16 3.1水分 . 16 3.2灰分 . 16 3.3粗脂肪 . 16 3.4粗蛋白 . 16 目录 3.5氨基
3、酸 . 16 3.6微量元素 . 17 3.7本章小结 . 17 参考文献 . 19 致谢 .错误 !未定义书签。 中文摘要 I 摘要 摘要 本实验通过干燥法、 550高温灼烧法、索氏提取 法、凯氏定氮法和仪器分析 对曼氏无针乌贼（ Sepiella maindroni）两种颜色受精卵卵膜中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等成分进行了分析。结果表明： 曼氏无针乌贼黑色 卵膜含水量为92.27%，灰分含量为 1.71%，粗 脂肪含量为 0.32%，蛋白质含量为 5.12%； 曼氏无针乌贼白化 卵膜含水量为 92.34%，灰分含量为 1.76%，粗 脂肪含量为 0.34%，蛋白质含量为
4、5.28%； 曼氏无针乌贼卵膜 蛋白质中含有 17 种氨基酸，其中黑色卵膜含天冬氨酸（ Asp），苏氨酸（ THR） 和异亮氨酸（ ILR)的质量分 数较高，分别占 0.50 %、 0.46 %和0.43%。而白色卵膜中谷氨酸（ GLU），天门冬氨酸（ ASP）和亮氨酸（ LEU）所占比例最高，分别为 14.32%、 10.65%和 7.95%。黑色卵膜微量元素中镁、钾、钙的含量相对较高，含量分别为 1100mgkg、 367mgkg、 528mgkg；其中硒的含量最低为 0.23mgkg。白色卵膜微量元素中磷、钙、镁含量相对较高，含量分别为 1423.2mgkg、313.2mgkg、 241
5、.2mgkg；其中铜含量最低为 0.7mgkg。实验结果表明黑色卵膜和白色卵 膜在水分、灰分、脂肪酸和蛋白质含量基本相似，但是氨基酸和微量元素的含量相差较大。 本次试验对 曼氏无针乌贼卵膜的营养成分做了一些基础性研究，为曼氏无针乌贼人工受精做出一些探索。 关键词 曼氏无针乌贼；卵膜；营养成分 英文摘要 II Abstract abstractBy using oven drying method, 550 high temperature ignition method, solex method, Kjeldahl method and instrumental analysis, the
6、contents of water, ash, crude protein, crude fat and trace elements in two color types of egg membrane were analysised in Sepiella.maindroni.The results showed that in the black egg membrane of S.maindroni, the contents of water, ash, Fatty acids, protein were correspondingly 92.27 %, 1.71 %, 0.23 %
7、 and 5.12 %; while in the white egg membrane, the corresponding contents were 92.34 %, 1.76 %, 0.34 %, and 5.28 %.There were 17 kinds of amino acid in the protein of the egg membrane in S.maindroni. In black egg membrane, the concentrations of Asp (0.5 %), THR (0.46 %) and ILR (0.43 %) were relative
8、ly higher than that of the white one. In white egg membrane, however, the concentrations of GLU (14.32 %), ASP (10.65 %) and LEU (7.95 %) were the highest. In black egg membrane, the concentrations of Mg (1100 mgkg), K (367 mgkg) and Ca (528 mgkg) were relatively higher than that of other trace elem
9、ents while the concentration of Se (0.23 mgkg) was the lowest. In white egg membrane, the concentrations of P (1423.2 mgkg), Ca (313.2 mgkg) and Mg (241.2 mgkg) were relatively higher while the concentration of Cu (0.7 mgkg) was the lowest. This experiment revealed that the concentrations of water,
10、ash and protein were similar, while that of amino acids and trace elements were quite different. By doing this experiment, we were able to study the nutrients of S.maindroni, providing methods to explore the artificial insemination of S.maindroni. Key words Sepiella maindroni;egg membrane;nutritiona
11、l components 引言 1 引言 曼氏无针乌贼 (Sepiella maindroni de Rochebruns),属软体动物门 (Mollusca)、头足纲(Cephalopoda)、乌贼目 (Sepioidea)、乌贼科 (Sepiidae)动物，为中型乌贼。个体较金乌贼小，一般胴体长 15cm。眼部椭圆形，后部端圆，长度为宽度的 2倍。眼部后面有一脉孔，常流出近红色的腥臭腺体。肉鳍前段狭窄，向后部渐宽，位于胸部两侧全缘，末端分离。腕 5对， 4对长度相近，第 4对腕较其他腕长。各腕吸盘大小也相近。其胶质环外缘具尖锥形小齿。触腕一 般超过胭长，穗狭小。眼背白花斑明显。石灰质内骨长
12、椭圆形，长度约为宽度的 3倍，角质缘发达，后端无骨针 1。曼氏无针乌贼的可食部分约占总体的 92%。其肉洁白如玉，具有鲜、嫩、脆的特点，营养丰富每百克肉含蛋白质 13g、脂肪 0.7g以及丰富的钙、磷、铁。除鲜食外，还可加工制成罐头食品或干制品。乌贼的干制品南方叫螟蚨鲞，北方叫墨鱼干，雄性生殖腺干品叫乌鱼穗，雌性缠卵腺干品叫乌鱼蛋，均为海味佳品 2，深受百姓喜爱。 其不仅 肉味鲜美 ,营养丰富 ,而且 还具有重要的药用价值。 乌贼骨即中药海螵蛸，具有药用价值。 我国著名的“墨鱼 干”、“螟蛹誊”、“乌穗”“乌鱼蛋”等产品均主要是曼氏无针乌贼及其性腺的干制品 2。国内外部分学者先后对曼氏无针乌贼
13、的生物学、繁殖习性、洄游分布、资源状况以及增养殖开展过一些研究 (张炯等 3， 1965；唐逸民等 4， 1986；吴耀泉等 5， 1990；张宝琳等 6，1997； Moltschaniwskyj etal7， 2000； Koueta et al8， 2001， 2002； Wang et al9， 2003； Correia et al， 2005)。曼氏无针乌贼曾是我国传统的四大海产之一 ,浙江历史上最高年产量曾达 6万 多吨 ,占 海洋捕捞产量的 9.3%。 20世纪 70年代末以来 ,产量连续降至最低水平 ,占全省海洋捕捞产量的比重从 60年代的 9.3%降至 3.0%以下 (乌贼
14、资源增殖研究课题组 ,1986)。 80年代中后期，浙江沿海渔场曼氏无针乌贼已经无法形成渔汛，并逐步绝迹。 近年来，曼氏无针乌贼在市场上供不应求，其市场价格也一路攀升，前景看好。 修复曼氏无针乌贼资源 ， 逐步恢复我国四大海产，是广大消费者盼望已久的迫切要求，也是海洋渔业工作者的历史使命。 每年春夏之际，乌贼由深水游向浅水内湾灯产卵，此谓生殖徊游。 产卵后的乌贼在近海大批死亡。我国乌贼种类较多，洄游明显的为曼氏无针乌贼（ Sepiella maindroni），盛产于浙江南部沿海及福建沿海；台湾枪乌贼（ Loligo formosana），分布于台湾海峡以南海区，汕头外海及北部湾为产卵场所。乌
15、贼喜欢把卵产在海藻或木片上面，像一串串葡萄似的挂在上面。因此，沿海的渔民常把树枝之类的东西捆成一束一束引言 2 的，投入海中，引诱乌贼来产卵，待成群的乌贼游来产卵时，再张网捕捞，获益甚厚。据青岛附近情况，产卵时适宜温度为 15 20，盐分为 30%以上。产卵前雌雄交配，即雄性以 茎化腕将精荚送入雌体外套腔中，精荚破裂，释放出里面的精子，精卵在外套腔内受精。交配后不久，雌性即排出受精卵，圆形，一端稍尖，长径 10mm许，成串聚积一起，表面黑色，粘于外物上俗称“海葡萄”。乌贼卵含大量卵黄，属端黄卵。经不完全卵裂（盘式卵裂）以外包法形成原肠胚，直接发育。孵化出幼体与成体相似。 卵膜是指包绕在发育中卵
16、母细胞、成熟卵和发育中胚胎外面的单层、双层和三层被膜 ,即初级卵膜、次级卵膜和三级卵膜。初级卵膜源于卵母细胞，次级卵膜和三级卵膜分别由滤泡细胞和输卵管分泌形成。 为迅速恢复我国的曼氏无针乌贼资源 ， 以人工增殖和养殖为手段的资源修复工作已迅速在我国部分省市展开。曼氏无针乌贼人工育苗 ， 是目前急需了解的问题。大量研究明 ， 人工养殖虽然可以快速增加渔业产量 ， 提高生产效率 ， 而曼氏无针乌贼人工育苗，对于曼氏无针乌贼养殖开发而言是极其关键的一环 ， 在人工养殖的过程中发现养殖几代后的曼氏无针乌贼出现白化卵，使得孵化率下降。 但到目前为止 ， 我国还从未对曼氏无针乌贼卵膜的营养成分做过相应的系
17、统全面的研究。本文拟采用生化测定方法 ， 对曼氏无针乌贼正常的受精卵卵膜和白化的受精卵卵膜中的营养成分构成进行研究 ， 希望通过研究更清楚全面地了 解曼氏无针乌贼卵膜的营养成分构成 ，减少白化卵的产生，为以后的人工育苗做出一些贡献。 材料与方法 3 1 材料与方法 1.1 样品 检测样品曼氏无针乌贼卵膜，采自浙江舟山大海洋科技有限公司秀山养殖基地，采样时间为 2010 年 4 月 20 号。 1.2 实验原理 1.2.1 水分的测定 直接干燥法 :基于曼氏无针乌贼卵膜中的水分受热以后，产生的蒸汽压高于空气在电热干嫌箱中的分压，使曼氏无针乌贼卵膜中的水分蒸发出来，同时，由于不断的加热和排走水蒸汽
18、，而达到完全干燥的目的，曼氏无针乌贼卵膜干燥的速度取决于这个压差的大小 。 1.2.2 总灰分的测定 把一定量的 样品经炭化后放入高温炉内灼烧，使有机物质被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，而无机物质以硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、氯化物等无机盐和金属氧化物的形式残留下来，这些残留物即为灰分，称量残留物的重量即可计算出样品中总灰分的含量。 1.2.3 脂肪含量的测定 将经前处理而分散且干燥的样品用无水乙醚或者石油醚等溶剂回流提取，使样品中的脂肪进入溶剂中，回收溶剂后所得到的残留物，即为脂肪（或粗脂肪） 。 一般食品用有机溶剂浸提，挥干有机溶剂后称得的重量主要是游离脂肪，此外还含有磷脂、
19、色素、树脂、蜡状物、挥发油、糖 脂等物质，所以用索氏提取法测得的脂肪，也称粗脂肪。 此法适用于脂类含量较高结合态的脂类含量较少，能烘干磨细，不宜稀释结块的样品的测定。食品中的游离脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有机溶剂抽提，而结合态脂肪不能直接被乙醚、石油醚提取，需要在一定的条件下进行水解等处理，使之转化成游离脂肪后方能提取，故索氏抽提法测得的知识游离态脂肪，而结合态脂肪测不出来。 材料与方法 4 1.2.4 蛋白质含量的测定 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水，而样品中的有机氮转换成氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后 加碱蒸馏，使氨逸出用硼酸吸收后再以标
20、准盐酸或硫酸滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 样品消化：消化反应方程式： 2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4 =(NH4)2S04 + 6C02+12S02+16H20 浓硫酸具有脱水性，使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。浓硫酸又有氧化性，将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫： 2 H2SO4+C=2S02+2H20+CO2 二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中 ： K2SO4 2NH3 = (NH4)2SO4 在消化反应中，为了加速蛋白质的分解，缩短消化时间，常加入下列物质： 1)硫酸钾 加入硫酸钾可以
21、提高溶液的沸点而加快有机物分解，它与硫酸作用生成硫酸氢钾可提高反应温度 ，一般纯硫酸的沸点在 340左右，而添加硫酸钾后，可使温度提高至 400以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被分解、水分不断逸出而使硫酸硫酸钾浓度增大，故沸点升高，其反应式如下： K2SO4+ H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O十 +SO 3 但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起已生成的铵盐发生热分解放出氨而造成损失： (NH4)2SO4=NH3十 (NH4)HSO4 2(NH4)HSO42NH3+2SO3十 2H2O 除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类来提高沸点，但
22、效果不如硫酸钾。 2)硫 酸铜 CuS04 硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有氧化汞、汞、硒粉、二氧化钛等，但考虑到 效果、价格及环境污染等多种因素，应用最广泛的是硫酸铜、使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化，硫酸铜的作用机理如下所示： 2Cu SO4Cu SO4+ SO2+O2 C+2CuSO4Cu2 SO4+S02 +CO2 材料与方法 5 Cu2SO+2H2SO42CuSO4+2H2O+SO2 此反应不断进行，待有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜生成，溶液呈现清澈的蓝绿色。故硫酸铜除起催化剂的作用外，还可指示消化终点的到达
23、，以及下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。 蒸馏：在消化完全的 样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热蒸馏即可释放出氨气反应方程式如下： 2NaOH+(NH4) SO4=2NH3+ Na2SO4+2H2O 吸收与滴定：加热蒸馏所放出氨可甩硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂的变色反应，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定反应方程式如下： 2NH3+4H3BO3=(NH4) 2B4O7+5H2O (NH4) 2B4O7+5H2O+2HCl=2NH4C1+4H3BO3 蒸馏释放出来的氨，也可以采用硫酸或盐酸标准溶液吸收，然后再用氢氧化钠标准溶液反滴定
24、吸收液中过剩的硫酸或盐酸，计算出总氮量。 1.2.5 蛋白质的氨基酸及微量元素测定 基酸和微量元素钾、 钙、 纳、 镁、磷、铁、铜、锌、锰、硒的测定委托上海谱尼测试技术有限公司 (Pony Testing International Group )和浙江大学饲料研究所 测定。 参照标准 GB/T 5009.124-2003 GB/T 5009.93-2003 GB/T 5009.91-2003 GB/T 5009.90-2003 GB/T 5009.13-2003 GB/T 5009.87-2003 1.3 试剂及仪器 1.3.1 试剂 (1)1： 4 盐酸溶液 (2)0.5三氯化铁溶液和等量蓝墨水的混合液 (3)6mol/L 硝酸 (4)36过氧化氢 (5)辛醇或纯植物 油
