1、实验 13 离体叶绿体对染料的还原作用 一、 目的 了解希尔反应。 二、仪器及药品 分光光度计、烧杯、试管、移液管、容量瓶 0.1mol/L 磷酸缓冲液、 pH7.3 0.3mmol/L 2.6 一二氯酚吲哚酚钠：称取 0.0087g 二氯酚吲哚酚钠定容至 100ml。 三、原理 分离的叶绿体能使染料 2.6 一二氯酚吲哚酚进行需光还原作用，使染料从蓝色变为无色，这些变化在 2 3 分钟内呈线性关系。 2H+（ H2O 光解过程 ) 氧化型 2.6 一二氯酚吲哚酚 还原型 2.6 一二氯酚吲哚酚 (蓝色 ) (无色 ) 四、方法步骤 （ 1） 加样，取干净试管 3 支，按下表加入样品及其它试剂
2、。 管号 0.1mol/L磷酸缓冲液 叶绿体悬液 （ ml） 煮沸 （分钟） 0.3mol/L二氯酚吲哚酚 1 9.4ml 0.1ml 0.5ml 2 9.4ml 0.1ml 5 0.5ml 3 9.4ml 0.1ml 注意：（ A）叶绿体悬液为前一实验所制备 （ B） 2 号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮 5 分钟。 （ C） 3 号管内调零点作对照 （ D）各试管都在最后加入二氯酚吲哚酚，且加入后立即摇匀此色。 （ 2）比色。将上面的各试管液分别倒入比色杯中，立即在 721 分光光度计（波长 620nm下）进行测定，读出光密度，然后将比色杯取出放在光下照光，约 30 秒钟，再测定光密度（以上设定步骤可进行 3 4 次）。 五、实验报告 作出叶绿体对染料的还原作用的曲线图。 六、思考题 分离的叶绿体在无光的条件下能还原 2.6 一二氯酚吲哚酚吗？
