1、HPLC 法测定蔬菜与水果中拟除虫菊酯类农药残留量Carrie（绍兴文理学院 化学化工学院 化学 绍兴 312000）摘要：目的：建立蔬菜有机氯农药和拟除虫菊酯类农药的残留气相色谱分析方法。方法：样品用丙酮和正己烷提取。中性氧化铝和弗罗里硅土固相萃取柱净化，经丙酮和正己烷混合溶剂洗脱，洗脱液吹氮浓缩，采用高效液相色谱法定量分析。结果表明：本方法简便、快速、灵敏、准确，可以满足叶类蔬菜中有机氯和拟除虫菊酯类农药检测的需要。有机氯和拟除虫菊酯类农药能较好地分离，峰面积与其浓度均具有良好线性。关键词：高效液相色谱法；叶类蔬菜;有机氯类农药；拟除虫菊酯类农药；引言有机氯及拟除虫菊酯类农药为高效杀虫剂，
2、在蔬菜等农作物使用广泛，其残留问题已引起人们的高度重视，随着全球范围内对食品安全问题的日益关注，需要检测的项目日益增多，规定的限量日益苛刻。但蔬菜的种类繁多，多数蔬菜基质杂，色素较深，因此对农药残留分析，净化步骤很重要。拟除虫菊酯类农药是防治农、林业等方面的有害昆虫及作为媒介传播病害昆虫的常用杀虫剂。它们在农作物生产上的使用，增加了作物的产量，但是不科学的使用会导致其在水果、蔬菜中残留超标，从而危害消费者的健康。因此，许多国家都对这两类农药在农作物中的残留限量作了严格的规定。目前，测定拟除虫菊酯类农药残留的方法主要有气相色谱法(GC) 和高效液相色谱法 (HPLC)等。采用气相色谱一质谱联用技
3、术和液相色谱一质谱联用技术，能够提高农药多残留分析检测的灵敏度，实现多组分同时分析。根据目前的报道，采用气相色谱一火焰光度检测器( 或气相色谱一氮磷检测器)方法，多数只能检测有机磷类农药；采用气相色谱一电子捕获检测器法只能检测果蔬食物中拟除虫菊酯类农药。本实验即是采用高效液相色谱法(HPLC)法对叶类蔬菜中的农药的残留量进行快速检测，此法简便、快速、灵敏、准确，可以用来检测叶类蔬菜中拟除虫菊酯类农药残留量。正文：一.实验部分1实验试剂和仪器1.1 试剂表 1-1 实验用试剂一览表试剂 规格丙酮 农残级正己烷 农残级无水硫酸钠 分析纯 A.R.中性氧化铝 分析纯 A.R.氯氰菊酯 浓度 96佛罗
4、里硅藻土 -单标准储备液 -单标准中间液 -单标准使用液 -1.2 仪器表 1-2 实验所用到的主要仪器仪器名称 型号高效液相色谱仪 Agilent 1200 Series表 1-3 实验所用仪器条件液相色谱柱 ODS-C18（250mm4.6mm 5m）检测波长 230nm流动相 乙腈溶液流速 1ml/min进样器 最大容量 50L2.实验步骤及其现象2.1 样品的制备与提取称取经组织捣碎机绞碎的新鲜蔬菜或水果样品 10g 于 50mL 带盖塑料离心管中，根据样品含水量多少加入适量的无水硫酸钠除水。然后向离心管样品中加入 10mL 丙酮:正己烷（3:7，体积比）混合溶剂，混匀后在超声波提取器
5、中提取 15min，然后用滴管吸取上层液体，将提取液转移至 100mL 烧杯中。逐次向离心管样品残渣中加入 3mL、2mL 混合提取剂，重复以上萃取、离心分离操作两次，合并离心管上层提取液至同一烧杯中。若合并提取液中还存在水分，再加适量无水硫酸钠除水。2.2 柱层析净化与浓缩在 30cm(长)1cm(内径)玻璃管层析柱底部加少许玻璃棉，按顺序分别装上无水硫酸钠、中性氧化铝、和 60100 目佛罗里硅藻土各约 1.0cm 高度，轻轻敲实。先用 3mL 丙酮预洗层析柱，弃掉淋洗液。再将烧杯中的样品提取液全部转移至柱内，用 3mL 丙酮:正己烷（1:2，体积比）混合洗脱剂洗脱 3 次，收集洗脱液于接
6、液管中。将接液管置于 50恒温水浴中用氮气吹脱至洗脱液体积少于 0.30mL，再转移浓缩后的洗脱液至 2mL 的样品瓶中，用正己烷定容至1mL，加盖密封，置于冰箱（0-4，由于本次实验室温较低，所以没有使用冰箱）中保存。2.3 测定在计算机上设置好液相色谱操作条件，用 50L 微量进样器吸取 20L 氯氰菊酯单标准使用液进样，绘制完整的单标准色谱图。再用 50L 微量进样器吸取 20L 样品测试瓶中的样品制备液进样，绘制完整的色谱图。二 结果与讨论1 实验原始记录2绘制氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲线氯 氰 菊 酯 正 己 烷 溶 液 的 工 作 曲 线y = 3E+09x + 25.8660
7、500100015002000250030000 2E-07 4E-07 6E-07 8E-07 1E-06 1.2E-06氯 氰 菊 酯 浓 度 C（ mol/L）峰面积A（mAus）峰 面 积 A线 性 (峰 面 积 A)根据上图可知氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲线方程为 y=3109x+25.8663样品数据记录保留时间(min) 峰面积(mAus)2.22 27.25将上表样品的数据代入氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲线中，可得样品中氯氰菊酯的浓度为 4.611010mol/L.4.小结样品的预处理非常重要，其农药残留物的提取效率直接影响到最后测定结果的准确度，由于新鲜蔬菜的含水量较大，
8、因此预处理过程中要注意除水，切不可将含水分的样品制备液进样。由上述数据处理结果可知样品中氯氰菊酯的浓度为 4.611010mol/L，即 1.92104mg/kg 小于我国农残标准中最大残留量 0.2mg/kg(GB 4829.4-1994),所以该蔬菜符合国家食品安全规定。三结论采用高效液相色谱测定蔬菜中的拟除虫菊酯类农药残留，净化效果好，色谱峰分离效果好，能快速检测出蔬菜水果中的拟除虫菊酯类农药残留量，是测定蔬菜中的拟除虫菊酯类农药残留量的好方法。参考文献1 国家技术监督局.中华人民共和国国家标准 GB/T 14929.494食品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯残留量测定方法2 GBTS009 1462003植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定3 张海霞，朱彭龄分析化学，2000，28(9)：117
