1、 酵母菌的形态观察和子囊孢子的观察作者：李东方 学号 200900140049系年级：09 级生科一班 指导老师：钱卫日期：2010.11.15 实验地址：山东大学生北 308一、 目的要求1. 进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法；2. 观察并掌握酵母菌的细胞形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态；3. 学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；4. 了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。二、 实验材料1. 菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 、2. 染色液：0.1美蓝染色液、孔雀绿染色液、95乙醇等3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、擦
2、镜纸、吸水纸等三、 基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子进行有性生殖。美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由篮色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。四、 操作步骤1. 鉴别酵母菌细胞死活
3、美蓝染色1）染色：无菌环境下，在干净的载玻片中央加一小滴适宜浓度的酿酒酵母液体培养物，加一小滴 0.1%美蓝染色液，然后再从侧面盖上盖玻片， （注意染色液和菌液不宜过多或过少，并应基本等量） 。2）镜检：将制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约 3min 后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，根据细胞颜色区分死细胞（蓝色）和活细胞（无色） ，并进行记录。3）比较：染色约 30min 后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。2. 子囊孢子的染色与观察1）制片：在洁净载玻片的中央滴一小滴蒸馏水，用接种环于无菌条件下挑取少许菌至水滴上，涂布均匀，在酒精灯火焰上热固定（水和菌均不要太多，涂布时
4、应尽量涂开，否则将造成干燥时间长；热固定温度不宜太高，以免使菌体变形） 。2）染色：滴加数滴孔雀绿染色液，1-1.5min 后水洗；加 95%乙醇脱色 30s，水洗；最后用番红染液复染 30s-1min，水洗，干燥。3）镜检：将染色片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，子囊孢子呈绿色，菌体和子囊呈粉红色。注意观察子囊孢子的数目、形状，并进行记录。五、 实验结果1. 酵母菌的形态观察和鉴别酵母菌细胞死活1）3min 后 2)30min 后出芽生殖 出芽生殖死亡菌种占 20% 死亡菌种占 50%细胞类型 活细胞 死细胞颜色 透明 蓝色时间 细胞总数 活细胞数 死细胞数 死细胞百分数3Min 36 34 12 33.3%30min 87 32 55 63.2%2. 子囊孢子的染色与观察酵母菌的子囊孢子 菌体和子囊子囊孢子 菌体和子囊颜色 蓝绿色 红色六,小结这次实验掌握了光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法，并观察并掌握酵母菌的细胞形态及其子囊、子囊孢子的形态；学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。
