1、DNA 的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳自 1937 年瑞典的 Tiselius 创造纸电泳以来,人们又创造了许多新的支持电泳的介质,其中较为常见的是琼脂糖及聚丙烯酰胺。普通琼脂糖凝胶制胶容易,能分离的核酸片段长度范围广(0.2-50kb),可以区分相差约 100bp 的 DNA 片段;聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率(5bp)要高于琼脂糖,但它能分离的核酸分子通常12kb 1-2V/cm5.混合 DNA 样品和上样缓冲液,用微量移液器将样品混合液及 Marker 缓慢加至加样孔内。 6.关上电泳槽盖,接好电极插头。调节后电压, 打开电泳仪开始电泳。如电极插头连接正确,阳极和阴极由于电解作用将产生气泡
2、,几分钟内溴酚蓝将从加样孔迁移进入胶体内。待溴酚蓝带移动至距胶前沿约 1cm 处,关上电源,停止电泳。7.小心地从电泳槽中取出凝胶,若配胶时未加 EB,则按上述方法,用终浓度为0.5g/ml 的 EB 水溶液染色 20min,若已加 EB,则可直接将胶放在凝胶成像仪中观察实验结果。注意事项1. 溴化乙锭为中度毒性、强致癌性物质,操作时需小心,勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门的电泳区域操作,戴一次性手套,并及时更换。2、预先加入 EB 时可能使 DNA 的泳动速度下降 15%左右,而且对不同构型的 DNA 的影响程度不同。所以为取得较真实的电泳结果可以在电泳结束后再用 0.5g/ml 的 EB溶液浸泡染色。 参考文献李德葆 徐平,1994,重组 DNA 的原理与方法,浙江:浙江科学技术出版社。萨姆布鲁克,J 等著,金冬雁 等 译,1992,分子克隆实验指南(第二版) ,北京:科学出版社。Gene company limited, Your complete guide for DNA separation and analysis.