1、液相色谱仪(hplc)的保养 1HPLC 的日常操作条件： 温度：1030； 相对湿度80 ； 最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 2泵的保养： 1)使用流动相尽量要清洁； 2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗； 3)流动相交换时要防止沉淀； 4)避免泵内堵塞或有气泡; 3进样器的保养： 1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染； 4柱的保养： 1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 2)当柱子和色谱仪联结时， 阀件或管路一定要清洗干净； 3)要注意流动相的脱气； 4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 5)进样样品要提纯； 6)严格控制进样量； 7)每天分析工作结
2、束后，要清洗进样阀中残留的样品； 8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭； 5检测器(UV)的保养： 1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。 2)样品池要保养。HPLC 六通阀进样器的使用及保养 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子) 组成。美国 Rheodyne 公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC 仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。工作原理：1、手柄位进样(Load) 位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量
3、环充满后，多余样品从放空孔排出；2、将手柄转动至进样(Inject) 位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样 3 万次而无需维修。以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：1、手柄处于 Load 和 Inject 之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在 HPLC 系统中使用的
4、注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的 75，如 20gL 的定量环最多进样 15p,L的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的 3 至 5 倍，即 20gL 的定量环最少进样 60 至 1001aL 的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用 100ul 的平头进样针配合 20ul 满环进样。
5、3、可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上 10gL 的定量环，实际是 9gL 还是 1lgL 并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用045tm 的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的 Load 和 Inject 位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。色谱柱的维护 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可
6、以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1将修补工具中的 2 套入柱芯的顶端2将修补工具中的 3 轻轻地旋入已套着 2 的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉 3，取出柱芯顶端的滤网4用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的 4 将玻璃棉压入柱芯顶端7柱芯顶端套上 2，然后参照（左图）将滤网放入8压紧，然后取下
7、2，再用 4 将滤网的边缘压平 平衡色谱柱 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/ 水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用 1020 倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡“ 。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）色谱柱的再生 进行色谱柱再
8、生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 表 1 建议用来冲洗的溶剂体积色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法：极性固定相（如 Si，NH2*，DIOL 基色谱填料）的再生：正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水*非极性固定相（如反相色谱填料 RP18，RP 8， CN 等）的再生：水乙腈氯仿（或异丙醇）乙腈水0.05M 稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意：在对 NH2 改性的色谱柱进行再生时，由于 NH2 可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用 0.1M 的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 *如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M 稀硫酸冲洗非常有效。色谱柱的维护 1使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）2大多数反相色谱柱的 pH 稳定范围是 27.5，尽量不超过该色谱柱的 pH 范围3避免流动相组成及极性的剧烈变化4流动相使用前必须经脱气和过滤处理5如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中6压力升高是需要更换预柱的信号
