1、因为大鼠红细胞比重是 1。090，中性粒细胞的比重是 1。0911 取 9 份 percoll 原液与 1 份 1.5m 的 Nacl 混合 定为 100%的工作液然后就是目的液的配置 根据你的鼠的密度 取一定量的 100%的工作液和 一定量的生理盐水 充分混合后 即为目的液比如：目的密度 1.084=（1.12678*1.912+1.009*1.088）/3 1.12678 为 100%的工作液的密度 1.912 为 100%的工作液的体积1.009 为生理盐水的密度 1.088 为生理盐水的体积 3 为总体积 1.5m 的 Nacl 是我自己配的 条件是 1400rpm/min，20min
2、 还是全血与 PBS1：1 混合后再加在工作液上？ 配好目的液后 把 1:1 稀释血小心加在目的液上 分两步 ：第一部是配工作液 用 PBS 稀释？ 第二部是 用工作液配目的液 离心完后取第三层（中性粒细胞层）第四层（红细胞层） ，再裂解 你裂解液用的是什么？ 让后用二蒸水裂解的 也可以用氯化铵 哦，明白了，1.084 是牛的淋巴细胞比重 差不多 这个密度能除去 90 多的淋巴细胞 双蒸水裂解的条件你告我一下 一般 1ml 的红细胞沉淀 加 2.5ml 左右的双蒸水裂解 30s 左右 再直接放上足够 PBS 把双蒸水稀释，离心，是吧 加到工作液上后细胞分层也是第一层：血浆层、第二层淋巴层、第三
3、层 PMN 层、第四层红细胞层吧 取第三层、第四层裂解 如果第三层里的细胞 PMN 较多 而且纯度较高 那就不用再取第四层了 而且我个人认为 红细胞和 PMN 有可能不能完全分开Bone marrow PMN (BMPMN) were isolated according to the procedure described in refer-ence 37 with some modifications. Briefly, BMC suspended in 2 ml of KRG()were laid on top of a three-layer Percoll gradient prep
4、ared in 15-ml polystyrene tubing by layering 2 ml each of 1.095, 1.085, and 1.070 g/ml Percoll solutions. The density of each Percoll solution was verified using density marker beads. After centrifugation at 500 g for 30 min at 4C in a swinging bucket rotor, the lowest band (1.085/1.095 g/ml interface) and the upper part of the 1.095 g/ml layer were collected as the PMN fraction. After washing with KRG( ), remaining red blood cells were eliminated by hypotonic lysis.
