1、2006 生化1.基因组 DNA 文库与 cDNA 文库有何异同？为什么要建立 cDNA 文库？cDNA 文库不同于基因组文库，被克隆 DNA 是从 mRNA 反转录来源的 DNA。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。 cDNA 文库 以 mRNA 为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成 cDNA，与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段 cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部 mRNA 信息的 cDNA 克隆集合称为该组织细胞的 cDNA 文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的
2、种类和强度也不尽相同，所以 cDNA 文库具有组织细胞特异性。cDNA 文库显然比基因组 DNA 文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组 DNA 文库获得的基因与从 cDNA 文库获得的不同，基因组。DNA 文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从 cDNA 文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的 cDNA 基因组文库 用限制性内切酶切割细胞的整个基因组 DNA，可以得到大量的基因组 DNA 片段，然后将这些 DNA 片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组 DNA 片段
3、，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。 将某种生物的基因组 DNA 切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组 DNA 片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所有基因。2.糖原合成与糖异生能否同时进行？为什么？糖异生作用与糖酵解是两条相反的途径，在细胞内不能同时进行。原因（1）两条途径的三个不可逆部位受到严格控制，当能量水平降低时，有利于糖酵解的进行而不利于糖异生作用，当能量水平升高时，则有利于糖的异生作用而糖酵解受到抑制。 （2）2，6 一二磷酸果糖可促进酵解而抑制糖异生作用。当血糖水平低时，刺激胰高血糖素分泌，通
4、过cAMP 的级联放大调节，使 2，6 一二磷酸果糖水平下降，最终导致糖酵解速度下降，糖异生作用加强。糖原的合成与糖原的分解是两条相反的途径，因此在细胞内不能同时进行，如果同时进行会造成能量的浪费和代谢的紊乱。3.真核生物的 RNA 聚合酶有几种？ 其转录产物是什么？RNA 聚合酶：合成核糖体 RNA （rRNA）前体 45S，当成熟后会成为 28S、18S 及5,8S 核糖为 RNA，是将来核糖体的主要 RNA 部份。 RNA 聚合酶合成核糖体 RNA （rRNA）前体 45S，当成熟后会成为 28S、18S 及 5,8S 核糖体 RNA，是将来核糖体的主要RNA 部份。 RNA 聚合酶：合
5、成 信使 RNA （mRNA）的前体及大部份小核 RNA （snRNA）以及微型 RNA （microRNA ） 。 RNA 聚合酶合成信使 RNA （mRNA）的前体及大部份小核 RNA （snRNA）以及 微型 RNA （microRNA） 。 因为它在转录过程中需要多种转录因子才能与启动子結合，所以这是现时最多研究的种类。因为它在转录过程中需要多种转录因子才能与启动子结合，所以这是现时最多研究的种类。 RNA 聚合酶：合成转运 RNA （tRNAs） 、rRNA 5S 及其他可以在细胞胞核及原生质找到的細小的 RNA。 RNA 聚合酶合成转运 RNA （tRNAs） 、rRNA 5S 及
6、其他可以在细胞核及原生质找到的细小的 RNA。4.若内含子发生突变是否影响蛋白质的功能？为什么？通过内含子的相对性可使相同的一段 DNA 编码不同的蛋白，起到了调控的作用，并增加了遗传信息的储存。断裂基因的存在可能有两种意义：（1）有利于储存较多的遗传信息，如 SV40 的 T 和 t 蛋白；（ 2）有利于变异和进化，若在交界序列处发生突变，就可能影响正常的剪切方式从而使蛋白的结构发生较大的变化。剪切位点的点突变，内含子不能被切除，产生异常 MRNA。由于在外显子和内含子的交界区发生突变，可产生新的 5或 3连接点，对于单个 3位点来说可以和原来的 5位点拼接，也可以和新的 5位点结合，这样产生的不同的 mRNA 既可以保留原有的蛋白，也可以产生一种新的蛋白，而原核生物基因突变只有在编码区发生，这样产生了新的蛋白，但原有基因的产物就不可能形成了。1. 蛋白质的某些特定丝氨酸、苏氨酸磷酸化后使其具有活性，但实验发现，丝氨酸/苏氨酸突变为谷氨酸后，蛋白质仍然有活性，试解释
