1、为什么脓性标本（分泌物或穿刺液）常常培养不出细菌 答： 1.脓标本细菌培养没有细菌生长，首先要明确标本里是有细菌而培养不出细菌，还是标本里本身没有细菌而培养不出细菌？结合标本直接涂片染色镜检可以解决标本中有无细菌的问题。 2.标本中的脓细胞可能是白细胞吞噬 答： 1.脓标本细菌培养没有细菌生长，首先要明确标本里是有细菌而培养不出细菌，还是标本里本身没有细菌而培养不出细菌？结合标本直接涂片染色镜检可以解决标本中有无细菌的问题。 2.标本中的脓细胞可能是白细胞吞噬掉细菌后中毒而死亡的尸体。细菌被白细胞吞噬后，白细胞 及死亡后的尸体释放出某些抑菌物质抑制了细菌的进一步繁殖。 3.深部脓液内本来是厌氧
2、菌生长，用常规有氧条件培养，细菌不会生长。 4.标本中可能存在苛养菌或慢生长菌，但受接种的培养基、培养环境和培养时间等因素的影响，可能导致脓标本培养不出细菌。 5.患者体内残余抗生素抑制了细菌的生长。 6.标本采集、保存及送检过程方法不当也可能导致培养不出细菌。那么如何做才能提高此类标本的阳性培养率呢？待补充！ 答复： 1.脓标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不是可疑的病原体。 2.对大多数开放伤口，采集前应先去除表面定 植菌群。 3.除非有渗出物，干燥、结痂伤口，一般不做培养。 4.闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本，不能用拭子采集标本，防止标本干燥及标本中可能存在的厌氧菌死亡。 5.
3、 开放病灶和脓肿：尽量去除表面菌落，用拭子在病灶活动区域或基底部采集标本，置于需氧培养基中或运送培养基中送检。也可对渗出液做需氧培养，开放病灶不能做厌氧培养。创伤标本如没有炎性细胞可能说明采集了表皮正常菌群，与疾病过程无关，应重新采集。 6.不要仅送检脓液，因为脓液不能代表伤口特点，建议同时取活检标本检查， 7.脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对 于患儿用 23 号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本，迅速送往实验室， 1 小时内不能培养应将标本冷藏。 8.在采集标本时，应注意无菌操作，以防带入与感染无关的皮肤定植菌。 9.小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些地方仔细采集标本培养以
4、发现病原体。 10.应尽可能在使用抗生素前采集标本，若患者在采集标本前已用抗生素，应在检验申请单上注明应用的抗生素，并在下次用抗生素前采集标本。 11.采集标本时应注意标本的性状、色泽及气味，为分离鉴定致病菌提供依据。 12.标本采集后应在室温 2h 内送至微生物室接种处 理，若不能及时送检，需氧培养的标本除对环境敏感的淋球菌、脑膜炎双球菌和流感嗜血杆菌等标本外，可保存在 4 冰箱中，但保存时间不超过 24h。 13.需做厌氧培养的标本若不能及时送检，需室温保存，但保存时间不超过 24h。 标本拒收标准 1.支原体培养、鉴定、计数、药敏操作：若送检标本不是运送培养基送检则为不合格标本。 2.找
5、抗酸杆菌：穿刺液标本如发现严重凝固则拒收。 3.脑脊液培养：如标本为非无菌管采集则拒收。 4.中段尿培养：如标本为非无菌管采集则拒收。 5.下呼吸道标本培养：挑取痰标本直接涂片镜检， WBC 10/LP，上皮细胞25/LP 不适合做细菌培养。 6.脓液及创伤分泌物培养：如标本为非无菌管采集则拒收。 7.穿刺液培养：如标本为非无菌管采集则拒收。 8.生殖道分泌物培养：如为淋球菌培养没有直接接种到淋球菌培养基上则拒收。 9.各类培养标本原则上都要求无菌采集并及时送检、及时接种、及时培养，不能保存。除非特殊情况可置于冰箱保存，对分离怕冷的细菌时，应注意标本的保暖。 某单位细菌科室的 SOP zipp
6、o 发表于 : 2007-5-23 11:16 来源 : 百慕社区 细菌室工作守则 文件编号： LAB OP XJ001 细菌室消毒隔离措施 文件编号： LAB OP XJ002 微生物实验室安全与防护 文件编号： LAB OP XJ003 细菌室内质控制度 文件编号： LAB OP XJ004 临床微生物及实验室的医院感染管理 文件编号： LAB OP XJ005 技术规范 文件编号： LAB OP XJ006 无菌间规章制度 文件编号： LAB OP XJ007 菌（毒种）管理办法 文件编号： LAB OP XJ008 保养及质控措施 文件编号： LAB OP XJ009 标准菌株保存及使
7、用 文件编号： LAB OP XJ0010 细菌室内务管理规定 文件编号： LAB OP XJ011 标本采集及保存要求 文件编号： LAB OP XJ012 室内质控失控处理程序 文件编号： LAB OP XJ013 标本拒收标准 文件编号： LAB OP XJ014 温度失控处理措施 文件编号： LAB OP XJ015 超净工作台 文件编号： LAB OP XJ016 标本的接种和移种法 文件编号： LAB OP XJ017 常用分离培养基 文件编号： LAB OP XJ018 细菌室标本操作流程 文件编号： LAB OP XJ019 二氧化碳培养法 文件编号： LAB OP XJ020
8、 分离及纯化法 文件编号： LAB OP XJ021 显微镜检查法 文件编号： LAB OP XJ022 穿刺液标本的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ023 胆汁标本的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ024 粪便标本的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ025 血液及骨髓标本的细菌学检 验 文件编号： LAB OP XJ026 脑脊液的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ027 尿液的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ028 脓汁及病灶分泌物细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ029 生殖系统标本的处理 文件编号： LAB OP XJ030 下呼吸
9、道标本的细菌学检验 文件编号： LAB OP XJ031 API Coryne 系统操作规程 文件编号： LAB OP XJ032 RapID ANA 系统操作规程 文件编号： LAB OP XJ033 BacT/Alert 120 全自动血培养仪操作规程 文件编号： LAB OP XJ034 Vitek-32 型细菌鉴定 /药敏分析仪操作规程 文件编号： LAB OP XJ035 GPI、 GPS 操作规程 文件编号： LAB OP XJ036 GNI GNS 操作规程 文件编号： LAB OP XJ037 NHI 操作规程 文件编号： LAB OP XJ038 YBC 操作规程 文件编号：
10、 LAB OP XJ039 葡萄球菌属的常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ040 链球菌属的常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ041 肠球菌属的常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ042 奈瑟菌属的常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ043 布兰汉菌属的常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ044 棒状杆菌属常规鉴定 文件编号： LAB OP XJ045 最新回复 zippo at 2007-5-23 11:17:23 生效日期： 2004-04-20 细菌室工作守则 1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 3.实
11、验室内应保持肃静，不准吸 烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于 3%来苏儿溶液中 5-10 分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用 1:1000 高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用 3%来苏
12、儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。 10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。 11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水 洗净。 12.爱护仪器设备，经常清洁，注意防尘和防潮。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 z
13、ippo at 2007-5-23 11:17:50 生效日期： 2004-04-20 细菌室消毒隔离措施 1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（最少半小时）进行空气消毒。 2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。 4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有 用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡（至少 24 小时以上）后清洗或丢弃。 5.所有微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。 6.取材、最好采用一次
14、性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。 7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。 8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液（如 5%石炭酸、 3%来苏儿等）消毒 30 分钟以上，然后再清洗。如污染工作服，应立即脱下，高压 灭菌。 9.实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用 1:1000 高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口，必要时根据实际情况服用有关药物。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-
15、23 11:20:04 生效日期： 2004-04-20 在工作区内禁止饮食，吸烟和存放食物及使用化妆品。 实验室里应保持整洁，不存放与工作无关的杂物。 工作台每天至少用消毒剂清洁一次，在溢渗传染物后要立即消毒、清洗； 进入无菌室必须 穿工作服，戴口罩、帽子。 在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。 实验工作区禁止无关人员出入，尤其要严禁儿童进入。 工作人员在处理传染性物质或动物之后，以及在离开实验室时要洗手。 凡发生溢漏事故或接触传染性物质后，均应立即报告实验室监督员或实验室主任，并做好书面记录及采取相应措施。结核杆菌的培养及标本涂片务必在生物安全柜里操作。 9. 有涉及感染性材料的
16、操作应在生物安全柜中进行，如结核杆菌培养、感染性组织等。 10. 工作人员在进入实验室工作区前，应在专用的更衣室（或缓冲间）穿着背开式工作服或其它防 护服。工作完毕后必须脱下工作服，不得穿工作服离开实验室。可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。 11. 工作时必须戴手套（两副为宜）。一次性手套必须先消毒后丢弃。 12. 在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水，且易于取用。可配备应急药品。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:21:01 生效日期： 2004-04-20 每位工作人员必须加强质控意识，
17、以质量控制工作为核心，认真做好各项质控试验和记录。 加强质量控制和专 业理论知识的学习，规范操作，正确分析处理结果。 一旦发现失控，及时采取相应措施，纠正失控结果。 每批自配或购置的培养基、生化鉴定等试剂必须用标准菌株 ATCC27853、 ATCC25923、 ATCC25922质控。合格方可使用，并作好记录。 每周进行药敏试验质量控制。对每批微量药敏板、培养基、药敏纸片必须用 ATCC27853、ATCC25923、 ATCC25922 菌株进行质控，并做好记录，出现问题及时分析，采用相应措施。 每天观察培养箱、 CO2 培养箱、冰箱的温度，并做好记录。 无菌间每周监测一次，三氧机、紫外
18、线消毒灭菌情况，并做好记录。 每三个月用 ATCC27853、 ATCC25923、 ATCC25922 菌株对全自动微生物分析仪进行鉴定和药敏质量控制。 认真讨论、分析每次参加卫生部室间质评结果。总结经验教训。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:23:53 生效日期： 2004-04-20 检验科医院感染管理应达到以下要求 : 工作人员必须穿工作服 ,戴工作帽 ,必要时穿隔离衣，胶鞋，戴口罩 ,手套。 使用合格的一次性检验用品 ,用后进行无害化 处理。 严格执行无菌技术操作规程 ,静脉采血必须一人一针一管一
19、巾一带 ;微量采血应做到一人一针一管一片 ;对每位病人操作前洗手或手消毒。 无菌物品如棉签 ,棉球 ,纱布等及其容器应在有效期内使用 ,开启后使用时间不得超过 24 小时 .使用后的废弃物品 ,应及时进行无害化处理 ,不得随意丢弃。 各种器具应及时消毒 ,清洗 ;各种废弃标本应分类处理 (焚烧 ,入污水池 ,消毒或灭菌 )。 报告单应消毒后发放。 检验人员结束操作后应及时洗手 ,毛巾专用 ,每天消毒。 保持室内清洁卫生 .每天对空气 ,各种物表及地面进行常规消毒 .在进行各种检验时 ,应避免 污染 ;在进行特殊传染病检验后 ,应及时进行消毒 ,遇有场地 ,工作服或体表污染时应及时处理 ,防止扩
20、散 ,并视污染情况向上级报告。 菌种、毒种按传染病防治法进行管理。 实验室的医院感染管理参照检验科的管理要求 .实验动物应严格管理 ,防止逃逸或造成人与实验室动物的交叉感染 ;实验后的动物必须焚化进行无害化处理。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:25:23 生效日期： 2004-04-20 细菌鉴定和药敏试验操作按全国临床检验操作规程。 负责 鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。 从事细菌专业技术人员，应了解医院监测知识，掌握其检测方法，定期统计分析医院感染细菌分布，耐药变迁，并将其结果
21、反馈临床。 细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌知识。 细菌专业人员不断更新知识，了解细菌学检验新进展。 定期或随时与临床联系，主动参与病例讨论了解病情及治疗情况，达到细菌检验与临床的密切联系。 每天发出的微生物报告应认真复审，分析报告、评价报告。 工作人员加强有菌观念，无菌操作。 当工作环境被细菌污染，必须立即消毒处理，报告主管人员，采 取必要措施。 10 工作人员被细菌培养物污染应消毒处理，必要时给予药物治疗，并向主管负责人报告，采取特殊措施。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:25:51 生效日期
22、： 2004-04-20 每一个工作人员必须树立无菌观念，严格进行无菌操作。 在无菌室内必须戴帽子、口罩，进行无菌操作。 每天早上 8： 008： 30 用紫外线消毒或在凌晨 4-6 点用多功能机消毒 2 小时，每月检查一次紫外灯的无菌效果。 无菌室内各种废弃物品必须煮沸消毒。 实验 完毕后，用含氯制剂 1000mg/L 消毒桌面、地面。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:26:14 生效日期： 2004-04-20 1. 菌种保管应有专人负责，保存于冰箱中，房门专人加锁，确保菌种安全。保管人员变动时，必须严
23、格交接手续。 2、菌种应有严格的登记，包括形态，分离日期，鉴定日期，签发者，主要鉴定性能（包括形态、染色、抗原结构、动物致病力等），并注明使用、转移、销毁情况及原因。 3、各种菌种应按规定时间接种，一般在接种三 次后作一次全面的鉴定，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换。 4、菌种保存范围及向外单位转移，应按国家卫生部规定执行。 5、所有存在菌种应具备清单。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:27:09 生效日期： 2004-04-20 细菌室仪器维护保养及质控措施 我室主要仪器为 BacT/Al
24、ert 120、 BACTEC9050 血培养仪和 Vitek-32、 BD 凤凰全自动细菌鉴定和药敏分析仪，为了使仪器能够高质量的运行，使仪器 报告的结果准确可靠，特制定以下仪器维护、保养和质控措施。 一、 BacT/Alert 120 、 BACTEC9050 血培养仪的维护、保养和质控措施 1.每天上班开始工作前和下班离开前要检查仪器的工作状态是否正常，仪器培养箱温度的报告里外是否一致。 2.每天用中性的清洁液将仪器表面擦拭干净 3.每天先做质控。 4.一个月至少做一次全程定标。 5.仪器检测数据每周星期六做备份。 6.仪器每一个月做一次彻底的清洁保养，包括清洁外壳、瓶孔、滤网等 7.仪
25、器每年请工程师做一次检定工作。 二、 Vitek-32、 BD 凤凰全 自动细菌鉴定和药敏分析仪的维护、保养和质控措施 1.每天上班开始工作前和下班离开前要检查仪器的工作状态是否正常。 2.每天用中性的清洁液将仪器表面擦拭干净 3.购买的新批号的试剂都必须先做质控，质控合格后才能用于临床检测。 4.仪器检测数据每周星期六做备份。 5.仪器每一个月做一次彻底的清洁保养，包括清洁外壳、卡片架、滤网等 6.仪器每年请工程师做一次检定工作。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:27:56 生效日期： 2004-04-2
26、0 标准菌株保存及使用 概述：标准菌株是细菌室室内质控工作必不可少的、重要的生物资源，我室的标准菌株主要来自省临检中心的发放和从卫生部临检中心以及国家菌种保存中心购买所得，为了让标准菌株能够得到合理的应用，特制定以下规定。 1.对每批购买的标准菌株要做好登记，包括菌种的菌名、编号、购买时间、保存地点、记录人等 2.每次使用标准品都应作好使用记录，包括标准品的名称、编号、使用时间等。 3.购买的标准品初次使用时，应大量增殖，然后分装在含 10-15%甘油的胰蛋白胨肉汤中， -20以下保存。 4.新的标准 菌株复苏最多不得超过三次，如超过三次将不在视为标准菌株使用。 5.标准菌株保存管一经溶化使用
27、后，不得再次冻存。 编写： 审核： 批准： 批准日期： 2004 年 4 月 20 日 检验科 zippo at 2007-5-23 11:28:35 生效日期： 2004-04-20 细菌室内务管理规定 1.细菌室岗位分工与职责管理规定 1.1 概述 鉴于细菌室工作琐碎烦杂且千头万绪，为了使细菌室的工作能够保质保量地顺利完成，特将细菌室暂定为两个岗位，以明确工作范围、增强责任心、便于日常工作的完成。当然由于细菌室不同岗位 工作量的随机性较大，故我室要求大家发扬既分工，又协作的精神，共同完成细菌室工作。 1.2 岗位职责 各岗位工作人员要求严格按照作业指导书进行操作，高质量的完成本岗位工作，如遇到问题须提出经讨论解决。 1.3 岗位分工
